可樂(lè)中咖啡因的高效液相色譜法測(cè)定

可樂(lè)中咖啡因的

高效液相色譜法測(cè)定基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)中心實(shí)驗(yàn)化學(xué)四（綜合化學(xué)實(shí)驗(yàn)）1色譜法簡(jiǎn)介混合物隨流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱時(shí)，由于個(gè)不同組分與固定相的相互作用強(qiáng)弱不同，從而使各組分按先后不同的順序依次從固定相中流出。這種利用個(gè)組分在兩相中具有不同分配系數(shù)或吸附系數(shù)，使混合物中各組分分離的技術(shù)稱為色譜法。作用：分析分離流動(dòng)相：攜帶樣品流過(guò)固定相的流動(dòng)體固定相：固定不動(dòng)的一相

2按流動(dòng)相的物態(tài)分：

氣相色譜液相色譜高效液相色譜：在技術(shù)上采用了高壓泵，高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了分析速度快，分離效率高和操作自動(dòng)化。流動(dòng)相為液體的色譜技術(shù)3高效液相色譜的分類：高效液相色譜液—液分配色譜法離子交換色譜法液—固分配色譜法空間排阻色譜法流動(dòng)相極性<固定相極性：正相色譜法流動(dòng)相極性>固定相極性：反相色譜法固定相為依附在載體上的液體固定相為吸附劑凝膠滲透色譜法（GPC）4液—液分配色譜法載體全多孔型表面多孔型化學(xué)鍵合固定相：用化學(xué)反應(yīng)的方法把有機(jī)分子結(jié)合到載體表面。（如實(shí)驗(yàn)所用的C18即十八烷基鍵合硅膠）5反相色譜優(yōu)點(diǎn)：能和水兼容高效，穩(wěn)定適用于大部分物質(zhì)，應(yīng)用非常廣泛常被用于從極性溶液中或水相中萃取非極性物質(zhì)6分析方法：定性：根據(jù)保留值或與其相關(guān)的制進(jìn)行判斷，以確定各色譜峰代表何組分定量：檢測(cè)信號(hào)（峰面積、峰高等）大小與組分的量成正比關(guān)系

標(biāo)準(zhǔn)曲線法歸一化法內(nèi)標(biāo)法7高效液相色譜儀流程示意圖8實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私庖合嗌V儀的基本結(jié)構(gòu)和操作；了解反相液相色譜法的原理、優(yōu)點(diǎn)和應(yīng)用；掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線定量方法。9咖啡因又稱咖啡堿，化學(xué)名稱為1，3，7-三甲基黃嘌呤，分子式為C8H10O2N4，屬黃嘌呤衍生物，是一種可由茶葉或咖啡中提取而得的生物堿。它能興奮大腦皮層，使人精神興奮。咖啡中含咖啡因的質(zhì)量分?jǐn)?shù)約為1.2％~1.8％，茶葉中約含2.0％~4.7％，可樂(lè)飲料、APC藥品等中均含咖啡因。

101.色譜儀:ProStar210（Varian）2.色譜柱：C18柱，200mm×4.6mm3.流動(dòng)相:甲醇:水(60:40)，流速:1.0mL/min4.檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器UV345

檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm主要儀器與試劑：11實(shí)驗(yàn)步驟：1.

配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液：40、60、80、100、120μg/ml；(140μg/ml不用配制）2.樣品處理：可口可樂(lè)、百事可樂(lè)干過(guò)濾后（棄去前濾液）取25ml用氯仿萃取（加飽和NaCl和NaOH溶液），脫水過(guò)濾配成50ml溶液；3.制作工作曲線：基線平穩(wěn)后分別進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)系列溶液5μL，重復(fù)一次，紀(jì)錄峰面積和保留時(shí)間；4.樣品測(cè)定：將配好的樣品分別用0.45μm的濾膜過(guò)濾后，進(jìn)樣5μL

，根據(jù)保留時(shí)間確定咖啡因色譜峰并記錄其峰面積；5.結(jié)束試驗(yàn)：清洗所用各儀器，關(guān)液相色譜儀及計(jì)算機(jī)。12數(shù)據(jù)處理：1.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的色譜圖，繪制咖啡因峰面積與其濃度的關(guān)系曲線；2.根據(jù)樣品中咖啡因色譜峰的面積，由工作曲線得出兩種可樂(lè)中咖啡因含量。13思考1、若標(biāo)準(zhǔn)曲線用咖啡因濃度對(duì)峰高作圖，能給出準(zhǔn)確結(jié)果嗎？與本實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線相比何種優(yōu)越？為什么？2、在樣品干過(guò)濾時(shí)