高二生物寒假講義練習(xí)（選擇性必修3）第05講 動(dòng)物細(xì)胞工程（學(xué)生卷）

第05講動(dòng)物細(xì)胞工程【學(xué)習(xí)目標(biāo)】1.闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是從動(dòng)物體獲得相關(guān)組織，分散成單個(gè)細(xì)胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的過程。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。2.闡明動(dòng)物細(xì)胞核移植一般是將體細(xì)胞核移入一個(gè)去核的卵母細(xì)胞中，并使重組細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的過程。3.闡明動(dòng)物細(xì)胞融合是指通過物理、化學(xué)或生物學(xué)等手段，使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。4.概述細(xì)胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)。5.簡(jiǎn)述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值?！净A(chǔ)知識(shí)】一、動(dòng)物細(xì)胞工程1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件營(yíng)養(yǎng)①無機(jī)物：無機(jī)鹽等。②有機(jī)物：糖類、氨基酸、維生素、血清等。無菌、無毒環(huán)境①對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行滅菌處理。②在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作。③定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝物。溫度、pH和滲透壓①溫度：哺乳動(dòng)物細(xì)胞多以36.5±0.5℃為宜。②pH：多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。氣體環(huán)境①95%的空氣和5%的CO2混合氣體。②保證細(xì)胞代謝所必須的氧氣。③維持培養(yǎng)液的pH值。2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程（1）原代培養(yǎng)的過程3.傳代培養(yǎng)的過程①吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。②向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。③置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進(jìn)行消化，2~5min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡

下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后，應(yīng)立即中止消化。④吸出消化液，向瓶?jī)?nèi)加入Hanks液少量，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化。⑤使用彎頭吸管，吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，以防用力過猛損傷細(xì)胞。⑥用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。⑦細(xì)胞培養(yǎng)

換液時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)要求來確定。一般2～3d后應(yīng)換一次生長(zhǎng)液。待細(xì)胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)或換成維持液。歸納總結(jié)1.原代培養(yǎng):原代培養(yǎng):即第一次培養(yǎng)，是指將培養(yǎng)物放置在體外生長(zhǎng)環(huán)境中持續(xù)培養(yǎng)，中途不分割培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程。有幾方面含義:①培養(yǎng)物一經(jīng)接種到培養(yǎng)器皿(瓶)中就不再分割，任其生長(zhǎng)繁殖;②原代培養(yǎng)中的"代"并非細(xì)胞的"代"數(shù)，因?yàn)榕囵B(yǎng)過程中細(xì)胞經(jīng)多次分裂已經(jīng)產(chǎn)生多代子細(xì)胞;③原代培養(yǎng)過程中不分割培養(yǎng)物不等于不更換培養(yǎng)液，也不等于不更換培養(yǎng)器皿。2.傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。為了保持細(xì)胞正常的二倍體核型，傳代培養(yǎng)一般只培養(yǎng)到10代。3.細(xì)胞貼壁和接觸抑制①細(xì)胞貼壁是指體外培養(yǎng)的細(xì)胞貼附在瓶壁生長(zhǎng)的現(xiàn)象；接觸抑制是指當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞通常會(huì)停止分裂增殖的現(xiàn)象。②細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)對(duì)培養(yǎng)瓶的要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。③打破接觸抑制現(xiàn)象的方法是將貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。4.掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過短時(shí)，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落，過長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷。5.掌握好消化濃度，當(dāng)消化液濃度過高時(shí)，消化時(shí)間應(yīng)縮短，過低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。6.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的比較項(xiàng)目動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)理論基礎(chǔ)細(xì)胞增殖植物細(xì)胞的全能性培養(yǎng)前處理無菌；用機(jī)械的方法或胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理，使組織分散成單個(gè)細(xì)胞。無菌、離體取材動(dòng)物胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織。植物幼嫩的部位或花藥等培養(yǎng)基性質(zhì)液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分糖類、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。水、礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、植物激素和瓊脂等。結(jié)果細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生大量細(xì)胞，不形成新個(gè)體?？僧a(chǎn)生大量的細(xì)胞，也可產(chǎn)生新個(gè)體應(yīng)用人造皮膚的構(gòu)建、動(dòng)物分泌蛋白的規(guī)?；a(chǎn)。快速繁殖、作物脫毒、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)和單倍體育種等。相同點(diǎn)①都需人工條件下的無菌操作；②都需要適宜的溫度、pH等條件；③都進(jìn)行有絲分裂，都不涉及減數(shù)分裂。二、干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用1.干細(xì)胞是一類具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞。根據(jù)干細(xì)胞所處的發(fā)育階段分為胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)和成體干細(xì)胞。根據(jù)干細(xì)胞的發(fā)育潛能分為三類:全能干細(xì)胞(TSC)、多能干細(xì)胞和單能干細(xì)胞(專能干細(xì)胞)。干細(xì)胞(StemCell)一種未充分分化，尚不成熟的細(xì)胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能。2.干細(xì)胞的培養(yǎng)和應(yīng)用早期胚胎干細(xì)胞骨髓、臍帶血干細(xì)胞等體細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞等)具有分化為成年動(dòng)物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞，并進(jìn)一步形成機(jī)體的所有組織或器官甚至個(gè)體的潛能。具有組織特異性，只能分化成特定的細(xì)胞或組織，不具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力能誘導(dǎo)分化成類似胚胎干細(xì)胞的細(xì)胞分化成心肌細(xì)胞、神經(jīng)元和造血干細(xì)胞等造血干細(xì)胞用于治療白血病，神經(jīng)干細(xì)胞用于治療帕金森病、阿爾茨海默病等治療鐮狀細(xì)胞貧血、阿爾茨海默病、心血管疾病等3.胚胎干細(xì)胞的應(yīng)用體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞→誘導(dǎo)多能干細(xì)胞→定向誘導(dǎo)→多種體細(xì)胞→臨床治療多種疾病。三、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)概念使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)方法聚乙二醇法、電融合法、滅活病毒誘導(dǎo)融合法等原理細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性結(jié)果形成具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞意義突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段，為制造單克隆抗體開辟了新途徑四、單克隆抗體及其應(yīng)用1.單克隆抗體制備的原理①B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)：一種B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。②骨髓瘤細(xì)胞特點(diǎn)：能在體外大量增殖。③雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量增殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體。2.單克隆抗體的制備過程3.單克隆抗體的應(yīng)用①作為診斷試劑診斷疾?。孩谧鳛檩d體運(yùn)載藥物；③作為藥物治療疾病。歸納總結(jié)1圖中給小鼠注射特定的抗原蛋白，其目的是刺激機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答，從而產(chǎn)生特定的B淋巴細(xì)胞。2.若僅考慮細(xì)胞的兩兩融合，在獲取雜交瘤細(xì)胞的過程中，篩選淘汰的細(xì)胞有未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞(B－B融合細(xì)胞、瘤－瘤融合細(xì)胞)兩種類型。出現(xiàn)不同類型是因?yàn)榧?xì)胞融合不是100%的，且是隨機(jī)的。3.單克隆抗體的特點(diǎn)是特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備。4.第一次篩選的目的是獲得雜交瘤細(xì)胞①篩選的方法是在培養(yǎng)基中加入氨基嘌呤。②篩選的原理是：B淋巴細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能增殖、死亡；骨髓瘤細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能增殖、死亡；雜交瘤細(xì)胞能增殖、生長(zhǎng)。③細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。④人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。⑤鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。⑥第二次篩選的目的是獲得能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞。五、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1.原理：概念將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中，使這個(gè)重新組合的細(xì)胞發(fā)育成初期胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物原理動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性分類胚胎細(xì)胞核移植；體細(xì)胞核移植2.體細(xì)胞核移植的過程3.克隆高產(chǎn)奶牛的過程①收集牛卵巢，采集卵母細(xì)胞②通過顯微操作去核③從供體高產(chǎn)奶牛身體的某一部分取體細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)④將供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞⑤通過電融合法使兩細(xì)胞融合，供體核進(jìn)入卵母細(xì)胞形成重構(gòu)胚⑥將胚胎移入受體(代孕)母牛體內(nèi)⑦生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)相同的犢?！究键c(diǎn)剖析】考點(diǎn)一：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)例1．下圖為動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過程示意圖。下列敘述正確的是 ()A．步驟①的操作不需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行B．步驟②中用鹽酸溶解細(xì)胞間物質(zhì)使細(xì)胞分離C．步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理D．步驟④培養(yǎng)過程中不會(huì)發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化【答案】C解析：步驟①和細(xì)胞培養(yǎng)過程都需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行，A錯(cuò)誤；步驟②需要胰蛋白酶處理使細(xì)胞分離，鹽酸會(huì)殺死細(xì)胞，B錯(cuò)誤；步驟④傳代培養(yǎng)過程中，細(xì)胞的形態(tài)和功能可能會(huì)發(fā)生變化，從而使細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，D錯(cuò)誤?？键c(diǎn)二：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)例2．下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的表述，正確的是()A．培養(yǎng)環(huán)境中需要氧氣，不需要二氧化碳B．培養(yǎng)的細(xì)胞有兩類：懸浮生長(zhǎng)和貼壁生長(zhǎng)，都需定期用胰蛋白酶處理，分瓶后才能繼續(xù)增殖C．干細(xì)胞是從胚胎中分離提取的細(xì)胞D．幼齡動(dòng)物細(xì)胞比老齡動(dòng)物細(xì)胞更易于培養(yǎng)【答案】D【解析】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程既需要O2，也需要CO2，A錯(cuò)誤；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞具有貼壁生長(zhǎng)以及接觸抑制的特點(diǎn)，因此在培養(yǎng)中需要用胰蛋白酶處理貼壁的細(xì)胞并進(jìn)行分瓶培養(yǎng)，B錯(cuò)誤；胚胎干細(xì)胞是從早期胚胎或原始性腺中分離提取的細(xì)胞，干細(xì)胞不一定來自胚胎，如造血干細(xì)胞，C錯(cuò)誤；幼齡動(dòng)物組織細(xì)胞分裂能力強(qiáng)，因此選擇幼齡動(dòng)物的組織細(xì)胞更易于培養(yǎng)，D正確?？键c(diǎn)三、動(dòng)物細(xì)胞融合例3．動(dòng)物細(xì)胞融合屬于動(dòng)物細(xì)胞工程的技術(shù)手段之一，下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞融合的敘述正確的是()A．動(dòng)物細(xì)胞融合產(chǎn)生的細(xì)胞稱為重組細(xì)胞B．融合后形成的細(xì)胞為單核或多核細(xì)胞C．常用的誘導(dǎo)融合的生物誘導(dǎo)劑是聚乙二醇、滅活的病毒等D．也稱細(xì)胞雜交，可由兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合成一個(gè)細(xì)胞【答案】D【解析】動(dòng)物細(xì)胞融合產(chǎn)生的細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞，核移植產(chǎn)生的細(xì)胞稱為重組細(xì)胞，A錯(cuò)誤；融合后形成具有兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，B錯(cuò)誤；誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的生物誘導(dǎo)劑是滅活的病毒，聚乙二醇屬于化學(xué)誘導(dǎo)劑，C錯(cuò)誤；動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程，D正確?？键c(diǎn)四、單克隆抗體的制備例4.如圖表示抗人體胃癌的單克隆抗體的制備過程。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．反復(fù)給小鼠注射甲的目的是讓小鼠體內(nèi)產(chǎn)生更多的抗體B．人工誘導(dǎo)細(xì)胞融合獲得乙的常用方法是用滅活的病毒C．丁細(xì)胞既能無限增殖又能產(chǎn)生抗甲抗原的抗體D．制備的單克隆抗體可以早期診斷人體胃癌的發(fā)生情況【答案】A【解析】甲為抗原，反復(fù)給小鼠注射甲的目的是對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，以便產(chǎn)生更多的能分泌相應(yīng)抗體的漿細(xì)胞，A錯(cuò)誤；人工誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的常用方法是用滅活的病毒，還可以用聚乙二醇、電激，B正確；丁細(xì)胞為篩選出來的雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖又能產(chǎn)生抗甲抗原的特異性抗體，C正確；單克隆抗體特異性強(qiáng)，靈敏度高，可以在早期檢測(cè)出人體胃癌的發(fā)生情況，D正確?？键c(diǎn)五、單克隆抗體的應(yīng)用例5使用高效的細(xì)胞毒素類藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞。臨床上運(yùn)用抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)將藥物與抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。ADC通常由抗體、接頭和藥物(如細(xì)胞毒素)三部分組成。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．ADC中的抗體主要是發(fā)揮治療效應(yīng)B．ADC中的抗體能特異性識(shí)別腫瘤抗原C．ADC中的抗體可以通過雜交瘤技術(shù)大量制備D．可以將ADC中的藥物換成放射性同位素，標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行靶向放療【答案】A【解析】ADC中抗體的作用是特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面的抗原并與之結(jié)合，A錯(cuò)誤；抗體能特異性識(shí)別抗原并與其結(jié)合，題中ADC中的抗體能特異性識(shí)別腫瘤抗原，B正確；雜交瘤細(xì)胞可以大量制備單克隆抗體，C正確；用放射性同位素標(biāo)記的單克隆抗體可對(duì)腫瘤進(jìn)行靶向治療，D正確?？键c(diǎn)六、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物例6下列關(guān)于體細(xì)胞核移植技術(shù)應(yīng)用的敘述，錯(cuò)誤的是()A．利用體細(xì)胞核移植技術(shù)可以加速家畜遺傳改良進(jìn)程B．利用體細(xì)胞核移植技術(shù)培育的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物，可以作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)許多珍貴的醫(yī)用蛋白C．轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物不能作為異種移植的供體進(jìn)行器官移植，因?yàn)闀?huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)D．利用體細(xì)胞核移植技術(shù)培育后代可以避免細(xì)胞核供體的線粒體遺傳病基因傳遞給后代【答案】C解析:利用體細(xì)胞核移植技術(shù)已展示出廣闊的應(yīng)用前景，可以快速繁殖具有優(yōu)良品質(zhì)的家畜，可以加速家畜遺傳改良進(jìn)程，A正確；利用體細(xì)胞核移植技術(shù)培育的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物可以作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白，如乳腺生物反應(yīng)器、膀胱生物反應(yīng)器等，B正確；設(shè)法去除豬抗原決定基因，再結(jié)合克隆技術(shù)，培育出沒有免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因克隆豬器官，可作為異種移植的供體進(jìn)行器官移植，C錯(cuò)誤；利用體細(xì)胞核移植技術(shù)培育后代由于細(xì)胞質(zhì)來自卵細(xì)胞的供體，可以避免細(xì)胞核供體的線粒體遺傳病基因傳遞給后代，D正確?！菊骖}演練】1．(2023·江蘇高考，14)航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細(xì)胞跳動(dòng)的視頻。下列相關(guān)敘述正確的是（）A.培養(yǎng)心肌細(xì)胞的器具和試劑都要先進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B.培養(yǎng)心肌細(xì)胞的時(shí)候既需要氧氣也需要二氧化碳C.心肌細(xì)胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂不斷增殖D.心肌細(xì)胞在神經(jīng)細(xì)胞發(fā)出的神經(jīng)沖動(dòng)的支配下跳動(dòng)2．(2023·湖北高考，7)某興趣小組開展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長(zhǎng)緩慢，其原因不可能的是（）A.實(shí)驗(yàn)材料取自小鼠胚胎的腦組織 B.為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封C.血清經(jīng)過高溫處理后加入培養(yǎng)基 D.所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性3．(2023·山東高考，15)如圖所示，將由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子，在體外解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)可制備雙特異性抗體，簡(jiǎn)稱雙抗。下列說法錯(cuò)誤的是（）A.雙抗可同時(shí)與2種抗原結(jié)合B.利用雙抗可以將蛋白類藥物運(yùn)送至靶細(xì)胞C.篩選雙抗時(shí)需使用制備單克隆抗體時(shí)所使用的2種抗原D.同時(shí)注射2種抗原可刺激B細(xì)胞分化為產(chǎn)雙抗的漿細(xì)胞4．(2023·江蘇高考，19)（多選）下圖表示利用細(xì)胞融合技術(shù)進(jìn)行基因定位的過程，在人-鼠雜種細(xì)胞中人的染色體會(huì)以隨機(jī)方式丟失，通過分析基因產(chǎn)物進(jìn)行基因定位?，F(xiàn)檢測(cè)細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4種酶活性，只有Ⅱ具有芳烴羥化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脫氫酶活性。下列相關(guān)敘述正確的有（）A.加入滅活仙臺(tái)病毒的作用是促進(jìn)細(xì)胞融合B.細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別為人-人、人-鼠、鼠-鼠融合細(xì)胞C.芳烴羥化酶基因位于2號(hào)染色體上，乳酸脫氫酶基因位于11號(hào)染色上D.胸苷激酶基因位于17號(hào)染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上5．(2023·海南高考，20)以我國科學(xué)家為主的科研團(tuán)隊(duì)將OSNL（即4個(gè)基因Oct4／Sox2／Nanog／Lin28A的縮寫）導(dǎo)入黑羽雞胚成纖維細(xì)胞（CEFs），誘導(dǎo)其重編程為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS），再誘導(dǎo)iPS分化為誘導(dǎo)原始生殖細(xì)胞（iPGCs），然后將iPGCs注射到孵化2.5天的白羽雞胚血管中，最終獲得具有黑羽雞遺傳特性的后代，實(shí)驗(yàn)流程如圖。回答下列問題。（1）CEFs是從孵化9天的黑羽雞胚中分離獲得的，為了獲得單細(xì)胞懸液，雞胚組織剪碎后需用___________________________處理。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)通常需要在合成培養(yǎng)基中添加______________等天然成分，以滿足細(xì)胞對(duì)某些細(xì)胞因子的需求。（2）體外獲取OSNL的方法有______________（答出1種即可）。若要在CEFs中表達(dá)外源基因的蛋白，需構(gòu)建基因表達(dá)載體，載體中除含有目的基因和標(biāo)記基因外，還須有啟動(dòng)子和______________等。啟動(dòng)子是______________識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)____________________________。（3）iPS細(xì)胞和iPGCs細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能不同的根本原因是______________。（4）誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)的主要區(qū)別是__________。（5）該實(shí)驗(yàn)流程中用到的生物技術(shù)有________________（答出2點(diǎn)即可）。6．(2023·遼寧高考，24)某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過程中，需要表達(dá)N蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，增加其對(duì)N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。Ⅰ．N蛋白胞外段抗原制備，流程如圖1（1）構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒時(shí)，選用氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，目的是___________。用脂質(zhì)體將重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細(xì)胞，質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體___________（填“雙分子層中”或“兩層磷脂分子之間”）。（2）質(zhì)粒在包裝細(xì)胞內(nèi)組裝出由___________組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細(xì)胞進(jìn)而表達(dá)并分離、純化N蛋白胞外段。Ⅱ．N蛋白胞外段單克隆抗體制備，流程如圖2（3）用N蛋白胞外段作為抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫后，取小鼠脾組織用___________酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有混合氣體的___________中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。（4）用選擇性培養(yǎng)基對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行___________培養(yǎng)。用___________技術(shù)檢測(cè)每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集___________，提取單克隆抗體。（5）利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成___________，實(shí)現(xiàn)特異性治療?！具^關(guān)檢測(cè)】1．植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞工程中所用技術(shù)與原理不相符的是（

）A．纖維素酶、果膠酶處理和胰蛋白酶處理——酶的專一性B．植物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)——細(xì)胞的全能性C．原生質(zhì)體融合和動(dòng)物細(xì)胞融合——生物膜的流動(dòng)性D．紫草細(xì)胞培養(yǎng)和雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)——細(xì)胞分裂2．中國科學(xué)院動(dòng)物研究所將大熊貓的體細(xì)胞核放入兔子的去核卵母細(xì)胞之中，并使其成功發(fā)育成囊胚，標(biāo)志著異種核質(zhì)相容的問題得到解決，異種克隆大熊貓邁過了第一道“坎”；然后至關(guān)重要的是選擇一種合適的”代孕母體”。下圖是該研究的理論流程圖。下列說法正確的是（）A．步驟甲、乙分別是指大熊貓?bào)w細(xì)胞核移植、胚胎收集B．誘導(dǎo)超數(shù)排卵所注射的激素只能作用于特定細(xì)胞C．重組細(xì)胞發(fā)育成早期胚胎所需營(yíng)養(yǎng)主要來源于營(yíng)養(yǎng)液D．步驟甲和步驟乙中的供體和受體需要同期發(fā)情處理3．下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述不正確的是A．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的原理是細(xì)胞的全能性B．傳代培養(yǎng)時(shí)需要用胰蛋白酶處理貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞C．癌細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中不會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象D．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般需要使用CO2培養(yǎng)箱4．體細(xì)胞核移植技術(shù)在畜牧業(yè)，醫(yī)藥衛(wèi)生以及其他領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。下列關(guān)于體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景及存在問題的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．利用體細(xì)胞核移植技術(shù)培育的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物可以作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白B．以患者作為供體培育的人核移植胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)形成的組織、器官等，可避免免疫排斥反應(yīng)C．體細(xì)胞核移植技術(shù)發(fā)展到今天，已經(jīng)相當(dāng)成熟，成功率較高D．有研究者指出，絕大多數(shù)克隆動(dòng)物存在健康問題，如體型過大、臟器缺陷，免疫失調(diào)等5．下列有關(guān)細(xì)胞工程的敘述，正確的是（

）A．PEG是促細(xì)胞融合劑，可直接誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合B．作物脫毒依據(jù)的原理是植物頂端成熟區(qū)附近幾乎無病毒C．骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)免疫處理，可直接獲得單克隆抗體D．核移植克隆的動(dòng)物，其線粒體DNA來自供卵母體6．下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞工程的敘述，正確的是（）A．PEG誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合形成的雜種細(xì)胞，經(jīng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能得到優(yōu)良動(dòng)物個(gè)體B．使用冷凍保存的正常細(xì)胞通常為10代以內(nèi)，以保持細(xì)胞正常的二倍體核型C．在高倍顯微鏡下觀察發(fā)生基因突變的細(xì)胞比例可推知某化學(xué)藥品的毒性D．用胰蛋白酶處理動(dòng)物組織后，可用無菌水稀釋制成細(xì)胞懸浮液7．某同學(xué)在學(xué)習(xí)“細(xì)胞工程”時(shí)，列表比較了動(dòng)植物細(xì)胞工程的有關(guān)內(nèi)容，你認(rèn)為有幾處錯(cuò)誤(

)植物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)手段植物組織培養(yǎng)

植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和融合特殊處理酶解法去除細(xì)胞壁胰蛋白酶處理制備細(xì)胞懸浮液融合方法物理方法

化學(xué)方法物理方法

化學(xué)方法

生物方法典型應(yīng)用人工種子

微型繁殖單克隆抗體的制備等培養(yǎng)液區(qū)別植物激素誘導(dǎo)脫分化和再分化動(dòng)物血清或血漿A．0處 B．1處 C．2處 D．3處8．為了解決雜交瘤細(xì)胞在傳代培養(yǎng)中出現(xiàn)來自B細(xì)胞染色體丟失的問題，研究者在單克隆抗體的制備過程中增加了一個(gè)步驟，如下圖所示。除了抗原刺激之外，用EBV（一種病毒顆粒）感染動(dòng)物B細(xì)胞，使其染色體核型更穩(wěn)定。這樣的細(xì)胞能夠在HAT培養(yǎng)基中存活，但對(duì)烏本苷（Oua）敏感。下列相關(guān)分析錯(cuò)誤的是（

）A．雜交瘤細(xì)胞具有持續(xù)產(chǎn)生抗EBV抗體的能力B．雜交瘤細(xì)胞染色體丟失可能導(dǎo)致抗體產(chǎn)生能力下降C．圖中B細(xì)胞取自于抗原刺激后動(dòng)物的脾臟等D．骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)該無法在HAT選擇培養(yǎng)基中存活9．2019年1月24日，我國科學(xué)家宣布世界首批疾病克隆猴——5只生物節(jié)律紊亂體細(xì)胞克隆猴在中國誕生，開啟了克隆猴模型應(yīng)用于生命科學(xué)研究的“春天”?？茖W(xué)家采集了一只一歲半的、睡眠紊亂最明顯的BMAL1（生物節(jié)律基因）敲除猴A6的體細(xì)胞，通過體細(xì)胞核移植技術(shù)，獲得了5只克隆猴——這是國際上首次成功構(gòu)建一批遺傳背景一致的生物節(jié)律紊亂獼猴模型。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．體細(xì)胞核移植技術(shù)的原理是動(dòng)物細(xì)胞（核）的全能性B．5只克隆獼猴細(xì)胞核基因型與核供體細(xì)胞完全一致C．體細(xì)胞核移植需用取自新鮮卵巢的卵母細(xì)胞直接做受體細(xì)胞D．該研究可彌補(bǔ)實(shí)驗(yàn)獼猴繁殖周期長(zhǎng)、單胎數(shù)量少的不足10．牛雄性胚胎中存在特異性H-Y抗原，可在牛早期胚胎培養(yǎng)液中添加H-Y單克隆抗體，篩選胚胎進(jìn)行移植，以利用乳腺生物反應(yīng)器進(jìn)行生物制藥。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．H-Y單克隆抗體由骨髓瘤細(xì)胞分泌 B．應(yīng)選用原腸胚做雌雄鑒別C．鑒別后的雄性胚胎可直接做胚胎移植 D．用H-Y抗原刺激母牛可獲得相應(yīng)抗體11．下列關(guān)于生物工程的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．可利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)現(xiàn)紫草素的工廠化生產(chǎn)B．由根尖細(xì)胞形成愈傷組織的過程中，可能會(huì)發(fā)生基因突變C．動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交所依據(jù)的原理相同，都能形成雜種個(gè)體D．試管動(dòng)物技術(shù)可以充分發(fā)揮優(yōu)良動(dòng)物的繁殖潛力12．“篩選”是生物中常用的技術(shù)手段，下列相關(guān)敘述中正確的是（

）A．制備單克隆抗體過程中，第一次從細(xì)胞水平篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二次從分子水平篩選出產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞B．單倍體育種中需對(duì)F1的花藥進(jìn)行篩選C．為了快速繁殖無子西瓜，需篩選出特定的體細(xì)胞才能進(jìn)行組織培養(yǎng)D．通過顯微鏡觀察染色體數(shù)目診斷先天愚型是分子水平的檢測(cè)13．下圖是科研人員將藥物與單克隆抗體連接形成的抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)的示意圖，它由抗體、接頭和藥物三部分組成，能實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。相關(guān)敘述正確的是（

）A．細(xì)胞膜的選擇透過性是抗體制備過程中細(xì)胞融合的基礎(chǔ)B．ADC能識(shí)別腫瘤細(xì)胞利用了藥物特異性殺傷靶細(xì)胞的原理C．腫瘤細(xì)胞被ADC選擇性殺傷而導(dǎo)致的死亡屬于細(xì)胞壞死D．用放射性同位素標(biāo)記的單克隆抗體可對(duì)腫瘤進(jìn)行靶向治療14．下面是單克隆抗體制備過程示意圖，1～6代表相關(guān)過程，a～e代表相關(guān)細(xì)胞，以下敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．過程1是給小鼠注射特定抗原蛋白，以刺激小鼠產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞B．c細(xì)胞有三種種類，每種細(xì)胞染色體組數(shù)是相等的，e細(xì)胞是雜交瘤細(xì)胞C．過程2的促融方法可以采用電融合技術(shù)，這種技術(shù)能擊穿核膜促使核融合D．過程3是抗體檢測(cè)及克隆產(chǎn)生陽性細(xì)胞的過程，此過程要進(jìn)行兩次15．細(xì)胞融合技術(shù)有著廣泛應(yīng)用，如圖為細(xì)胞融合的簡(jiǎn)略過程。據(jù)圖分析，下列敘述不正確的是（

）A．甲形成過程中，a和b需要通過細(xì)胞膜接觸完成識(shí)別和結(jié)合B．乙形成過程中培養(yǎng)液滲透壓略大于細(xì)胞質(zhì)，有助于植物細(xì)胞酶解法去壁C．若a和b分別為基因型AaBB、aaBb植株的花粉細(xì)胞，則去壁后兩兩融合可得到4種基因型細(xì)胞D．借助單克隆抗體的導(dǎo)向作用能將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在位置16．下圖為細(xì)胞融合的簡(jiǎn)略過程。下列相關(guān)敘述中正確的是（

）A．如果a和b分別是白菜和甘藍(lán)的體細(xì)胞，則需要用纖維素酶和果膠酶處理這兩種細(xì)胞B．如果d經(jīng)分裂分化形成的是有性雜交后代，則a和b融合形成c的過程是受精作用C．如果培養(yǎng)d可得到單克隆抗體，則細(xì)胞d既能無限增殖也能產(chǎn)生抗體D．將d培養(yǎng)成體細(xì)胞雜交植株的過程可以說明植物細(xì)胞具有全能性17．T細(xì)胞表面的受體可以識(shí)別抗原引起免疫反應(yīng)，同時(shí)還有很多輔助分子來幫助完成這一過程。此外，T細(xì)胞表面還存在負(fù)向調(diào)控的受體分子，如PD-1。當(dāng)PD-1與某些特定分子治PDL1結(jié)合后，能迫使免疫細(xì)胞自殺，從而終止正在進(jìn)行的免疫反應(yīng)。：一些腫瘤細(xì)胞進(jìn)化出了一種防御機(jī)制，它們的表面也帶有PDL1，從而誘導(dǎo)T細(xì)胞過早地進(jìn)入自我破壞程序?？茖W(xué)家研制出PD-1單克隆抗體，作為免疫負(fù)調(diào)控抑制劑，通過阻斷PD-1與PDL1的相互作用，從而降低免疫抑制反應(yīng)，進(jìn)而治療甚至治愈腫瘤。下列敘述正確的是（

）A．正常情況下，PD-1有助于防止免疫反應(yīng)過度，避免發(fā)生自身免疫病B．部分T細(xì)胞會(huì)在PD-1的作用下發(fā)生細(xì)胞凋亡C．PD-1單克隆抗體不是直接作用于腫瘤，而是對(duì)免疫細(xì)胞起作用，達(dá)到抗腫瘤的目的D．體細(xì)胞中同時(shí)含有控制合成PD-1的基因和控制合成PDL1的基因18．下圖是一種“生物導(dǎo)彈”的作用原理示意圖，沒有與腫瘤細(xì)胞結(jié)合的“生物導(dǎo)彈”一段時(shí)間后被機(jī)體清除。阿霉素是一種抗腫瘤藥，可抑制DNA和RNA的合成，對(duì)正常細(xì)胞也有一定毒性。下列相關(guān)說法正確的是（

）A．單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞合成和分泌的B．活化阿霉素能抑制細(xì)胞中的DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程C．在治療中，應(yīng)先注射非活化的磷酸酶，再注射生物導(dǎo)彈D．單克隆抗體特異性強(qiáng)，能減輕阿霉素對(duì)正常細(xì)胞的傷害19．亨廷頓舞蹈癥（HD）患者是由于編碼亨廷頓蛋白的基因（H基因）序列中的三個(gè)核苷酸（CAG）發(fā)生多次重復(fù)所致。（1）某HD家系圖（圖1）及每個(gè)個(gè)體CAG重復(fù)序列擴(kuò)增后，電泳結(jié)果如圖2。①據(jù)圖1判斷HD是一種__________染色體遺傳病。②據(jù)圖推測(cè)，當(dāng)個(gè)體的所有H基因中CAG重復(fù)次數(shù)__________25次時(shí)才可能不患病。與Ⅰ-1比較，Ⅱ-1并未患病，推測(cè)該病會(huì)伴隨__________呈漸進(jìn)性發(fā)病。③與Ⅰ-1比較，Ⅱ-1、Ⅱ-3、Ⅱ-4、Ⅱ-5的H基因中CAG重復(fù)次數(shù)均有增加，這表明患者Ⅰ-1__________過程中異常H基因的重復(fù)次數(shù)會(huì)增加。（2）由于缺乏合適的動(dòng)物模型用于藥物篩選，HD患者目前尚無有效的治療方法。我國科學(xué)家利用基因編輯技術(shù)和體細(xì)胞核移植技術(shù)成功培育出世界首例含人類突變H基因的模型豬，操作過程如圖3。①從可遺傳變異類型來看，模型豬發(fā)生的變異是__________。②篩選含有目的基因的體細(xì)胞，將細(xì)胞核移植到__________中，構(gòu)建重組細(xì)胞，再將重組細(xì)胞發(fā)育