有助于改善睡眠檢驗方法

六、有助于改善睡眠檢驗方法1實驗動物推薦用成年小鼠，單一性別，18－22克，每組10－15只。2劑量分組及受試樣品給予時間實驗設(shè)三個劑量組和一個陰性對照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個劑量組，另設(shè)二個劑量組，必要時設(shè)陽性對照組。受試樣品給予時間30天，必要時可延長至45天。3實驗方法3.1直接睡眠實驗3.1.1操作步驟:觀察受試組動物給予3個劑量的受試樣品，對照組給予同體積溶劑后，是否出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象。睡眠以翻正反射消失為指標(biāo)。當(dāng)小鼠置于背臥位時，能立即翻正身位。如超過30－60秒不能翻正者，即認(rèn)為翻正反射消失，進入睡眠。翻正反射恢復(fù)即為動物覺醒，翻正反射消失至恢復(fù)這段時間為動物睡眠時間，記錄陰性對照組與受試樣品組入睡動物數(shù)及睡眠時間。3.1.2數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定睡眠時間為計量資料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。入睡動物數(shù)為計數(shù)資料，用2檢驗，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時，應(yīng)改用確切概率法。比較對照組與實驗組入睡動物數(shù)及睡眠時間之間的差異，若入睡動物數(shù)或睡眠時間增加有顯著性，則實驗結(jié)果陽性。3.2延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗3.2.1原理在戊巴比妥鈉催眠的基礎(chǔ)上，觀察受試物是否能延長睡眠時間，若睡眠時間延長，則說明受試物與戊巴比妥鈉有協(xié)同作用。3.2.2試劑戊巴比妥鈉（用前新鮮配制）3.2.3操作步驟做正式實驗前先進行預(yù)實驗，確定使動物100%入睡，但又不使睡眠時間過長的戊巴比妥鈉劑量（30-60mg/kgBW用此劑量正式實驗。動物末次給予溶劑及不同劑量受試樣品后，出現(xiàn)峰作用前10－15分鐘，給各組動物腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為0.2mL/20g，以翻正反射消失為指標(biāo)，觀察受試樣品能否延長戊巴比妥鈉睡眠時間。3.2.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。比較實驗組與對照組睡眠時間延長之間的差異，睡眠時間延長有顯著性，則實驗結(jié)果陽性。3.3戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）閾下劑量催眠實驗3.3.1原理觀察受試物與戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）的協(xié)同作用。由于戊巴比妥鈉通過肝酶代謝，而對該酶有抑制作用的藥物，也能延長戊巴比妥鈉睡眠時間，所以為排除這種影響，應(yīng)進行閾下劑量實驗。3.3.2試劑戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉用前新鮮配制。3.3.3操作步驟正式實驗前先進行預(yù)實驗，確定戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）閾下催眠劑量（戊巴比妥鈉16－30mg/kgBW或巴比妥鈉100－150mg/kgBW即80－90%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉最大閾下劑量。動物末次給予溶劑及不同濃度受試樣品后，出現(xiàn)峰作用前10－15分鐘，各組動物腹腔注射戊巴比妥鈉最大閾下催眠劑量，記錄30分鐘內(nèi)入睡動物數(shù)（翻正反射消失達1分鐘以上者）。實驗宜在24－25℃安靜環(huán)境下進行。3.3.4數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定入睡動物數(shù)為計數(shù)資料用2檢驗，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時，應(yīng)改用確切概率法。比較對照組與實驗組入睡動物數(shù)之間的差異，入睡動物發(fā)生率增加有顯著性，則實驗結(jié)果陽性。3.4巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗3.4.1原理在巴比妥鈉催眠的基礎(chǔ)上，觀察受試物是否能縮短入睡潛伏期，若睡眠潛伏期縮短，則說明受試物與巴比妥鈉有協(xié)同作用。3.4.2試劑巴比妥鈉（用前新鮮配制）3.4.3操作步驟做正式實驗前先進行預(yù)實驗，確定使動物100%入睡，但又不使睡眠時間過長的巴比妥鈉的劑量（200-300mg/kgBW用此劑量正式實驗。動物末次給于溶劑及不同濃度受試樣品10－20分鐘后，給各組動物腹腔注射巴比妥鈉，注射量為0.2mL/20g，以翻正反射消失為指標(biāo)，觀察受試樣品對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。3.4.4數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。比較實驗組與對照組睡眠潛伏期之間的差異，睡眠潛伏期縮短有顯著性，則實驗結(jié)果陽性。4結(jié)果判定延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗、戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）閾下劑量催眠實驗、巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗三項實驗中二項陽性，且無明顯直接睡眠作用，可判定該受試樣品具有有助于改善睡眠作用。s注意事項5.1實驗室環(huán)境必須安靜、恒溫、恒濕，以確保條件的恒定。5.2由于動物自身固有的生物學(xué)特征和習(xí)性，對受試樣品的反應(yīng)存在著種屬、性別、年齡