SN-T 5655.10-2023 商品化試劑盒檢測(cè)方法 預(yù)包裝食品致敏原免疫分析法 第10部分：巴西堅(jiān)果

學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載0ICS67.50學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載0CCSX04中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)1SN/T

5655.0—20231商品化試劑盒檢測(cè)方法預(yù)包裝食品致敏原免疫分析法

10

:

it tCommercalkitesit tImmunoassayoffoodalergensinfoodst iPar10:Brazt i-

- -

--

- -

-中華人民共和國(guó)海關(guān)總署 發(fā)

布學(xué)ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)兔兔ｗ下載學(xué)ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)兔兔ｗ下載學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1SN/T5655.0—2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1前 言本文件按照GB/T1.標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件為SN/T5655《商品化試劑盒檢測(cè)方法 預(yù)包裝食品致敏原免疫分析法》的第10部分。SN/T5655已經(jīng)發(fā)布了以下部分:———第1部分:麩質(zhì);———第2部分:甲殼綱類動(dòng)物;———第3部分:蛋類;———第4部分:花生;———第5部分:大豆;———第6部分:乳;———第7部分:扁桃仁;———第8部分:腰果;———第9部分:榛子;———第10部分:巴西堅(jiān)果;———第11部分:夏威夷果;———第12部分:開(kāi)心果;———第13部分:胡桃。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中華人民共和國(guó)海關(guān)總署提出并歸口。本文件起草單位:中華人民共和國(guó)廣州海關(guān)、中華人民共和國(guó)拱北海關(guān)、珠?；浉凼称钒踩珯z測(cè)有限公司。本文件主要起草人:梁穎婕、高東微、馮家望、冼鈺茵、劉津、吳本培。學(xué)ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)兔兔ｗ下載學(xué)ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)兔兔ｗ下載學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1SN/T5655.0—2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1引 言食品致敏原是普通食品中正常存在的天然或人工添加物質(zhì),被過(guò)敏體質(zhì)人群消耗后能夠誘發(fā)過(guò)敏反應(yīng)。SN/T5655《商品化試劑盒檢測(cè)方法 預(yù)包裝食品致敏原免疫分析法》規(guī)定了預(yù)包裝食品中致敏原成分的酶聯(lián)免疫吸附定量檢測(cè)和膠體金免疫層析定性檢測(cè)方法,旨在滿足預(yù)包裝食品致敏原標(biāo)識(shí)、生產(chǎn)質(zhì)控和食品安全檢驗(yàn)監(jiān)管的檢測(cè)需求。SN/T5655《商品化試劑盒檢測(cè)方法 預(yù)包裝食品致敏原免疫分析法》擬由下列13個(gè)部分構(gòu)成?！?部分:麩質(zhì)。———第2部分:甲殼綱類動(dòng)物?！?部分:蛋類?！?部分:花生?！?部分:大豆?！?部分:乳?！?部分:扁桃仁?！?部分:腰果?！?部分:榛子?！?0部分:巴西堅(jiān)果。———第11部分:夏威夷果?！?2部分:開(kāi)心果?！?3部分:胡桃。學(xué)ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)兔兔ｗ下載學(xué)ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)兔兔ｗ下載學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1SN/T5655.0—2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1商品化試劑盒檢測(cè)方法預(yù)包裝食品致敏原免疫分析法第10部分:巴西堅(jiān)果1

范圍本文件規(guī)定了預(yù)包裝食品中巴西堅(jiān)果致敏原的膠體金免疫層析測(cè)定方法。本文件適用于預(yù)包裝食品中巴西堅(jiān)果致敏原的膠體金免疫層析定性檢測(cè),也適用于預(yù)包裝食品生產(chǎn)過(guò)程對(duì)生產(chǎn)原料和環(huán)境樣品中巴西堅(jiān)果致敏原的定性監(jiān)測(cè)。2

規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法l i i iii i

i i

iAOACGuideinesforl i i iii i

i i

iAnalyss.AppendixM:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISAmethods:commu-t iniybestt i3

術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。13.1i巴西堅(jiān)果 BrazlnutiBis玉蕊科巴西栗屬植物(ertholetaexcela)的可食用種仁。Bis注:又稱巴西栗、鮑魚果、巴西果。23.2

G膠體金免疫層析

coloidalgoldassay;ICAG以膠體金作為示蹤標(biāo)志物的一種免疫層析檢測(cè)技術(shù)

。注:通常為試紙條形式。4

原理利用抗原-抗體特異性結(jié)合反應(yīng),對(duì)樣品中的巴西堅(jiān)果致敏原進(jìn)行膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)。樣品中的巴西堅(jiān)果致敏原與預(yù)包被在反應(yīng)管內(nèi)的標(biāo)記抗體發(fā)生反應(yīng),形成抗原-抗體結(jié)合物。此抗原-抗體結(jié)合物被預(yù)包被在免疫層析試紙條上的特異性抗體捕獲,形成抗體-抗原-抗體的夾心復(fù)合物,并在檢測(cè)區(qū)顯色,通過(guò)目測(cè)判讀檢測(cè)結(jié)果。1學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1SN/T5655.0—2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載15

試劑和材料除特別說(shuō)明外,實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合

GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水,所有試劑均為分析純。1ii ii i i

ii

i t i5. 巴西堅(jiān)果致敏原膠體金免疫層析檢測(cè)試劑盒:1ii ii i i

ii

i t iStudyProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendixM:Valdatonproce-duresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces進(jìn)行評(píng)價(jià),評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)附錄

A。注:試劑盒詳細(xì)信息見(jiàn)附錄B。25. 吸附緩沖液,按照附錄C執(zhí)行。2 :

0 22 , 234455. PBS-吐溫緩沖液

8.

gNaCl,0.

gKCl,1.44gNaHPO4

0.24gKH2PO :

0 22 , 23445pH

至7.2~7.,用蒸餾水定容至1L。5. 氯化鈉(NaCl)。5. 棉簽拭子。6

儀器和設(shè)備126. 分析天平:感量0.1g。126. 勻漿機(jī)。36. 渦旋混勻儀。346. 離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥4000r/min。45 1 56. 單道移液器:00μL~1000μL,5 1 57

分析步驟17. 環(huán)境拭子的采樣111 ( (7.. 吸取1mLPBS-吐溫緩沖液

5.3)到潔凈的2mL離心管中,11 ( (12 (13 ( 27..

用浸潤(rùn)的棉簽拭子

7.1.)的棉頭,擦拭大約10cm×10cm

面積的待檢測(cè)環(huán)境表面。12 (13 ( 2實(shí)現(xiàn)10cm×10cm

的待檢測(cè)環(huán)境表面擦拭,請(qǐng)自行定義合理及合適的待檢測(cè)環(huán)境表面范圍并記錄。7.. 將擦拭取樣后的棉簽拭子

7.1.)放回裝有PBS-吐溫緩沖液的離心管中,充分浸洗并擠壓使棉頭與緩沖液充分融合和釋放,取出擠干的棉簽拭子。14 17.. 從離心管中取0.

mL14 1( 2注:若棉簽采樣拭子

7.1.)含有肉眼清晰可見(jiàn)的致敏原顆粒,則可能含有的致敏原超過(guò)1000( 2拭子采樣處理后的離心管中樣品液,進(jìn)一步稀釋后,再用于檢測(cè)。27. 清潔用水的采樣21直接取0.

mL清潔用水用于檢測(cè)。137.食品樣品前處理和提取3317.. 液體樣品:量取不少于5mL樣品,進(jìn)行充分均質(zhì)。3132 0 (27.. 固體樣品:稱取50.0g樣品,向其中加入450mL水和4.0g氯化鈉

5.32 0 (2中4000r/min室溫(0℃~25℃)離心5min,取上清液用于檢測(cè)。無(wú)離心條件時(shí),可用粗濾紙過(guò)濾,2學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載8.2

本方法學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載8.2

本方法對(duì)環(huán)境表面的拭子采樣的檢出限為1μg/100cm

(當(dāng)采樣面積為10cm×10cm

時(shí)),或1得到濾清液用于檢測(cè)。若離心后產(chǎn)生脂肪層,則輕挑除去脂肪層后,取脂肪層下的無(wú)脂肪清液用于檢測(cè)。脂肪含量高的樣品,宜進(jìn)行冷凍離心以去除脂肪。33 (022 47.. 含多酚類的樣品:對(duì)于如啤酒、葡萄酒、可可、調(diào)味料、中草藥等樣品,應(yīng)使用吸附緩沖液33 (022 4行樣品前處理。吸取1mL液體樣品或稱取1.0g均質(zhì)后的固體樣品,加入已含有9mL吸附緩沖液的樣品管中,室溫(0℃~25℃)孵育10min~15min,邊孵育邊振蕩。孵育結(jié)束后置離心機(jī)中于室溫(0℃~25℃)000r/min,離心5min,取上清液用于檢測(cè)。注:含若樣品中可能含有的致敏原濃度超過(guò)1000mg/kg,則建議將樣品提取液進(jìn)一步稀釋后,再進(jìn)行檢測(cè)。密封好的上清液或?yàn)V清液在2℃~8℃避光保存不超過(guò)2d。47. 樣品的測(cè)定41 22 1、 3 21向預(yù)包被標(biāo)記抗體的反應(yīng)管[見(jiàn)

B.a)]中加入0.

mL

的流動(dòng)相緩沖液1 22 1、 3 210.

mL于7.

7.2、7.

步驟得到的樣品提取液,蓋上管蓋充分混勻,于室溫(0

℃~25

℃)孵育5min。向反應(yīng)管中放入巴西堅(jiān)果致敏原試紙條[見(jiàn)B.b)],反應(yīng)5min,目測(cè)讀取檢測(cè)結(jié)果。注:強(qiáng)酸性或強(qiáng)堿性樣品提取液調(diào)節(jié)pH

值至7.5±0.

后再檢測(cè)。57. 測(cè)定結(jié)果評(píng)估和表述551 C C7.. 試紙條反應(yīng)區(qū)包括2條結(jié)果條帶,從上至下分別為質(zhì)控帶(

)和檢測(cè)帶(T)。當(dāng)質(zhì)控帶51 C C藍(lán)紫色條帶,檢測(cè)結(jié)果有效,否則檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。52 C7.. 試紙條同時(shí)出現(xiàn)藍(lán)紫色質(zhì)控帶(

)和藍(lán)紫色檢測(cè)帶(T),檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,結(jié)果表述為“檢出52 C西堅(jiān)果致敏原”。53 C7.. 試紙條只出現(xiàn)藍(lán)紫色質(zhì)控帶(

),未出現(xiàn)藍(lán)紫色檢測(cè)帶(T),檢測(cè)結(jié)果為陰性,結(jié)果表述為53 C出巴西堅(jiān)果致敏原”。67. 試劑失效6C試紙條未出現(xiàn)藍(lán)紫色質(zhì)控帶(

),檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。C77. 內(nèi)部質(zhì)控7定期或必要時(shí)使用巴西堅(jiān)果致敏原質(zhì)控品或?qū)嶒?yàn)室自行制備的人工添加樣品進(jìn)行檢測(cè)質(zhì)量控制。8

檢出限1 L8. 本方法對(duì)食品樣品及清潔用水中巴西堅(jiān)果致敏原的檢出限為1mg/kg(1 L21μg/采樣拭子(當(dāng)采樣面積是自行確定時(shí),應(yīng)明確所記錄的采樣范圍)。9

方法局限性本文件的膠體金免疫層析方法適用于檢測(cè)巴西堅(jiān)果致敏原,檢測(cè)結(jié)果為定性檢測(cè)結(jié)果,無(wú)法獲得定量檢測(cè)結(jié)果。若樣品中含有特別高濃度的巴西堅(jiān)果(>1000mg/kg),則檢測(cè)帶的顏色可能會(huì)變淺,甚至完全抑制其形成。若樣品可能含有特別高濃度的目標(biāo)檢測(cè)過(guò)敏原,則建議對(duì)樣品進(jìn)行大倍數(shù)稀釋。3學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1SN/T5655.0—2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載110

防污染措施12310. 食品樣品的均質(zhì)可能產(chǎn)生粉塵,為避免污染應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行樣品均質(zhì)的前處理操作。12310. 設(shè)備和器具用水沖洗后,用60%乙醇或異丙醇徹底清潔,以消除致敏原(蛋白質(zhì))污染。10. 在試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)戴手套操作,在稱量、均質(zhì)樣品、樣品提取及試劑盒檢測(cè)四個(gè)檢測(cè)階段更換手套。4學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1SN/T5655.0—2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1附 錄

A(資料性)巴西堅(jiān)果致敏原膠體金免疫層析檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)結(jié)果1)1A. 檢出限1對(duì)食品樣品及清潔用水中巴西堅(jiān)果致敏原的檢出限為1mg/kg(L)。對(duì)環(huán)境表面的拭子采樣的檢出限為1μg/100cm2(當(dāng)采樣面積為10cm×10cm

時(shí)),或1μg/采樣拭子(當(dāng)采樣面積是自行確定時(shí),應(yīng)明確所記錄的采樣范圍)。2A. 特異性2對(duì)扁桃仁、杏仁、腰果、椰子、蛋、榛子、花生、南瓜籽、葵花籽、核桃、板栗、夏威夷果、碧根果、開(kāi)心果、松籽、油菜籽、玉米粉、豌豆、綠豆、小麥、燕麥、孜然、咖喱、大豆、辣椒、桂皮、丁香、八角、姜、芥末、洋蔥、雞肉、豬肉、牛肉、可可粉、橙汁、蘋果汁、牛奶、牛血清蛋白、羊奶均無(wú)交叉反應(yīng)。-

o o l i1)

本評(píng)價(jià)結(jié)果僅適用于rbipharmbiavidLatera-

o o l i使用者。如果采用其他產(chǎn)品可以得到相同或更好的檢測(cè)效果,經(jīng)實(shí)驗(yàn)評(píng)估后可以使用這些等效產(chǎn)品。5兔ｗｗｗ學(xué)兔．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1SN/T5655.0—2023兔ｗｗｗ學(xué)兔．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1附 錄 B(規(guī)范性)巴西堅(jiān)果致敏原膠體金免疫層析檢測(cè)試劑盒2)1B. 試劑盒組成1111a)

預(yù)包埋標(biāo)記抗體的反應(yīng)管:0支或25支(根據(jù)試劑盒規(guī)格不同);111b)

巴西堅(jiān)果致敏原快速試紙條:0支或25支(根據(jù)試劑盒規(guī)格不同);c)

內(nèi)含10mL流動(dòng)相(緩沖液)的滴瓶:

支;1d)

凍干陽(yáng)性質(zhì)控:

份,使用時(shí)加入1mL水復(fù)溶,渦旋混勻5min。12B. 試劑盒驗(yàn)收和保存221B.. 每個(gè)批號(hào)試劑盒應(yīng)按照質(zhì)量控制要求進(jìn)行驗(yàn)收試驗(yàn),考察檢測(cè)性能。2122 2B.. 未開(kāi)封試劑盒保存在2℃~8℃,使用前回復(fù)至室溫(0℃~25℃22 22溫(0℃~25℃)并保持干燥。2233B.. 超過(guò)有效期的試劑盒不應(yīng)使用。233B. 試紙條檢測(cè)結(jié)果示例1試紙條檢測(cè)結(jié)果示例見(jiàn)圖B.。1從左至右檢測(cè)結(jié)果第1條為陰性,第2~3條為陽(yáng)性。C為質(zhì)控帶,T為檢測(cè)帶。1圖B. 試紙條檢測(cè)結(jié)果示例1-

o o l i2)

rbipharmbiavidLatera

FlowBrazlNut試劑盒是適合的市售產(chǎn)品實(shí)例。給出這一信息是為了方-

o o l i的使用者。如果采用其他產(chǎn)品可以得到相同或更好的檢測(cè)效果,經(jīng)實(shí)驗(yàn)評(píng)估后可以使用這些等效產(chǎn)品。6學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載1SN/T5655.0—2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下