高效液相色譜法測定牡丹皮丹皮酚含量

高效液相色譜法測定牡丹皮丹皮酚含量姓名：葉積財(cái)班別：09中鑒1班學(xué)號：0906503109摘要：目的:用高效液相色譜法(HPLC)測定牡丹皮中丹皮酚含量。方法:采用HPLC測定丹皮酚含量，0DS-C18色譜柱(150mmX4.6mm,5Mm),流動相為甲醇：醋酸：水(58：2:40)，檢測波長274nm，流速1.0ml/min,柱溫35°C。結(jié)果:線性范圍在選定色譜條件下線性范圍良好，丹皮酚的樣品加樣回收率為98.75%,RSD1.1%，所選牡丹皮的丹皮酚含量為1.51%。結(jié)論：所用方法分離度好、快速、簡便、適用于丹皮酚的含量測定，可作為其質(zhì)量控制方法。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；丹皮酚；含量測定牡丹皮為毛茛科植物牡丹的干燥根皮，味辛，微寒，人心肝腎三經(jīng)，有消炎抗菌，清熱，活血散淤，降級血壓之功效［1］。主要成分有丹皮酚、丹皮苷、丹皮原苷、芍藥苷等。其中以丹皮酚為主要有效成分，為牡丹皮藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。丹皮酚具有抗炎、降壓、止血等多種藥理作用［2］。本文對牡丹皮加工方法及含量測定進(jìn)行系統(tǒng)的研究，為牡丹皮的合理開發(fā)利用提供依據(jù)，為質(zhì)量控制提供有效的方法。1材料與儀器2690液相液相色譜儀，PDA996紫外檢測器，QC-250超聲波清洗器，牡丹皮，甲醇，95%乙醇，2000ml圓底燒瓶，10ml容量瓶，電子天平。2方法與結(jié)果牡丹皮的提取分離：取牡丹皮100g，粉碎。將其置2000ml圓底燒瓶中口450ml水，加10mL乙醇和40gNaCl,浸泡，浸泡時(shí)間選擇120min為宜。用水蒸氣蒸餾，收集蒸餾液約300ml，將蒸餾液放冷，有白色針狀結(jié)晶析出，濾去結(jié)晶，干燥、稱重。如結(jié)晶不純，可重結(jié)晶一次。若在制取過程中得不到白色結(jié)晶，只有油珠狀物質(zhì)沉出，可在蒸餾液中加入少量晶種，摩擦瓶壁后，即有較大量的丹皮酚結(jié)晶析出。2.1色譜條件ODS-C18色譜柱(150mmX4.6mm，5^m)；流動相為甲醇：醋酸：水(58:2：40)；檢測波長274nm，流速1.0ml/min，柱溫35C，采用外標(biāo)峰面積法計(jì)算含量，理論塔板數(shù)均大于104,對稱因子均在0.95?1.05與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于2.0,切經(jīng)DAD進(jìn)行峰純度檢測，表明為單一成分峰。陰性對照試驗(yàn)：按樣品處方量制備不含牡丹皮藥材的陰性對照樣品，按供試品的制備方法制備陰性對照溶液。結(jié)果表明，陰性對照溶液對丹皮酚測定無干擾。見圖1。2.2對照品的制備精密稱取丹皮酚對照品10mg，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液0.1mg/ml。精密量取上述溶液2ml,置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液0.02mg/ml。2.3供試品制備精密稱取牡丹皮藥材粗粉0.5g,加入95%乙醇25ml,回流提取10h,溶液濃縮至干燥膏，甲醇超聲溶解，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜).45如濾過，取續(xù)濾液作為供試品。

圖1牡丹皮HPLC圖1牡丹皮HPLC圖譜2.4線性關(guān)系考察精密吸取對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、12.0、16.0M注入高效液相色譜儀，按HPLC條件測定峰面積積分值，重復(fù)3次，取平均值，以對照品的量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。Y=5318.622+343984X，y=0.9997，表明丹皮酚進(jìn)樣量在0.025?0.25臨之間線性關(guān)系良好。2.5精密度試驗(yàn)精密吸取對照品溶液5卩l(xiāng)進(jìn)樣，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)行測定，得丹皮酚面積RSD0.98%(n=5)，表明該色譜系統(tǒng)具有較好的精密度。2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批樣品溶液，按照上述色譜條件分別在0、2、4、6、8、12、24、36、48h進(jìn)行測定，以丹皮酚峰面積計(jì)算RSD=1.0%，表明在4h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批牡丹皮藥材干燥粗粉各約0.5g，精密稱定，加入95%乙醇25ml，回流提取10h,溶液濃縮至于燥膏，甲醇超聲溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45M)濾過，各取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣5M,按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣3次，結(jié)果分別為1.48%，1.53%，1.50%，RSD1.49%2.8加樣回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，取已知含量的樣品分別加入丹皮酚對照品，按含量測定項(xiàng)測定樣品中丹皮酚的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98.75%，n=5,RSD=1.1%。本法具有較好的回收率。2.9樣品含量測定精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5M,按上述色譜條件測定丹皮酚的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算丹皮酚的含量，每批樣品測定丹皮酚含量，測定結(jié)果見表1。表1丹皮酚含董測定結(jié)果5=陽％）祥品丹皮酚含債Rsn1L504L2421.522L503L4741,733討論因不同株植物同一采收期的含量有所差異，本實(shí)驗(yàn)采用統(tǒng)一株牡丹采樣，以減少實(shí)驗(yàn)誤差。不同采收期牡丹皮中丹皮酚的含量以開花期最高，隨后逐漸減少［3］。經(jīng)過紫外掃描法丹皮酚在274nm有最大吸收峰。對牡丹皮干燥藥材設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)考察提取條件，考察項(xiàng)目為溶劑（水、乙醇、丙酮）粉碎度（切片、粗粉、中粉）提取方式（回流、超聲、索氏提?。┨崛r(shí)間（8h、10h、12h）結(jié)果表明最佳提取時(shí)間為95%乙醇回流提取10h。不同體系和比例的流動相，如甲醇一磷酸，甲醇一水，甲醇一醋酸一水，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示以甲醇-醋酸-水溶液為流動相時(shí)丹皮酚的分離效果最好［4］。實(shí)驗(yàn)檢測指標(biāo)符合《中華人民共和國藥典》規(guī)定時(shí)，以丹皮酚含量高低判定藥材質(zhì)量［5］。不同產(chǎn)地中丹皮酚的含量差異比較大，平均含量為1.08%?2.51%。本文對牡丹皮進(jìn)行了主要化學(xué)成分丹皮酚的含量測定。結(jié)果表明：本方法穩(wěn)定性好，操作簡便，干擾少，可準(zhǔn)確測定樣品中丹皮酚的含量，為觀察牡丹的質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。參考文獻(xiàn)：［1］ 中華人們共和國藥典（一部）［s］?北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：234.［2］ 中華人民共和國衛(wèi)生部?中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-中藥成方制劑（第12冊）［S］.1997；30.［3］ 國家醫(yī)藥管理局中草藥情報(bào)中心站?植物藥有效成分手冊［M］.北京：人民衛(wèi)生出版，