蔬菜水果中克百威的檢測量子點微球熒光免疫層析法

1蔬菜水果中克百威的檢測量子點微球熒光免疫層析法本文件規(guī)定了蔬菜水果中克百威的量子點微球熒光免疫層析快速檢測方法。本文件適用于辣椒、青菜、豇豆、芹菜、韭菜、黃瓜、蘋果、柑橘和梨中克百威的快速檢測。本方法檢測克百威的檢出限為0.004mg/kg，定量限為0.008mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB23200.112食品安全國家標準植物源性食品中9種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定液相色譜-柱后衍生法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理本方法以量子點微球為熒光標記物，基于競爭抑制免疫層析技術(shù)原理，通過熒光免疫分析儀進行數(shù)據(jù)讀取和分析，根據(jù)已設(shè)定的標準曲線計算樣品中待測物質(zhì)的含量，對蔬菜水果中的克百威進行定量檢測。5試劑和材料除另有說明外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。5.1乙腈（C2H3N）。5.2磷酸氫二鉀（K2HPO4）。5.3磷酸二氫鉀（KH2PO4）。5.4試樣提取液：準確稱取5.6g磷酸氫二鉀（5.2）、0.41g磷酸二氫鉀（5.3），乙腈（5.1）100mL用水溶解并定容至1L。5.5試樣稀釋液（0.01mol/L磷酸鹽緩沖液）：準確稱取5.6g磷酸氫二鉀（5.2）、0.41g磷酸二氫鉀（5.3），用水溶解并定容至1L。6儀器和設(shè)備26.1分析天平：感量為0.01g。6.2微量移液器：20μL～200μL、100μL～1000μL和1mL～10mL。6.3旋渦振蕩器：轉(zhuǎn)速≥2500r/min。6.4恒溫孵育器：設(shè)定溫度為37℃,誤差不超過±1℃。6.5熒光免疫分析儀：激發(fā)波長為365nm±5nm，發(fā)射波長為610nm±5nm。6.6離心機：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。6.7均質(zhì)機：轉(zhuǎn)速≥5000r/min。6.8離心管：1.5mL和50mL。6.9克百威量子點微球免疫層析包裝盒：含量子點微球免疫層析試紙條和標準曲線內(nèi)置卡（ID卡ID卡內(nèi)設(shè)對應(yīng)批次標準曲線。7試樣制備7.1分樣和粉碎取不少于100g具有代表性的蔬菜水果樣品，充分均質(zhì)混勻，均分成兩份分別裝入潔凈容器作為試樣和留樣，密封，標記，留樣置于-20°C避光保存。蔬菜水果測定部位按照GB2763的規(guī)定執(zhí)行。7.2試樣前處理7.2.1準確稱取2g±0.1g試樣于50mL離心管中。7.2.2向上述離心管中加入試樣提取劑3mL（5.4），封蓋漩渦混勻2min。7.2.3取1mL提取后上清液，4000rpm離心2min。7.2.4取50μL離心后上清液加入700μL克百威試樣稀釋液（5.5），混勻后用于檢測。注：不同廠家檢測卡所用的樣品前處理方法可能不同，應(yīng)按照產(chǎn)品使用說8測定步驟8.1測試前打開熒光免疫分析儀（6.5），確認包裝盒中的ID卡與產(chǎn)品批號是否匹配，插入ID卡，在儀器測試界面點擊“讀卡/讀項目”，界面出現(xiàn)“讀取完成”，點擊“確認”即可使用。8.2將恒溫孵育器（6.4）開機，待溫度升至37℃即可使用。8.3從密封包裝袋中取出克百威量子點微球免疫層析試紙條，在30min內(nèi)使用。8.4將克百威量子點微球免疫層析試紙條平放，用微量移液器吸取90μL稀釋后的待測液于克百威量子點微球免疫層析試紙條的加樣孔（S）中，在恒溫孵育器中37℃孵育反應(yīng)10min。8.5反應(yīng)時間結(jié)束后立即將克百威量子點微球免疫層析試紙條插入熒光免疫分析儀中，點擊儀器界面的“測試”，儀器會自動給出定量測試結(jié)果，15min內(nèi)測試，結(jié)果有效。注：不同廠家熒光免疫分析儀所用儀器界面設(shè)置可能不同，應(yīng)按照儀器使9結(jié)果表述樣品中克百威的含量由熒光分析儀自動計算并顯示，單位為毫克/千克（mg/kg）。310.1注意事項：使用前請仔細閱讀說明書，儀器的具體操作詳見儀器操作說明書；檢測卡為一次性使用，檢測時請勿觸摸檢測卡結(jié)果顯示