培訓(xùn)課件-05培訓(xùn)

臟器利用的歷史悠久，很早以前我國人民就利用牛黃、膽汁等作為醫(yī)療藥品。到了20世紀(jì)30年代，由于生物化學(xué)等科學(xué)的發(fā)展，人們以臟器為原料，利用沉淀、濃縮、吸附、鹽析、透析和結(jié)晶等方法制成各種藥品。這些藥品具有針對性強(qiáng)、副作用小、人體容易消化吸收等特點(diǎn)，目前已經(jīng)成為三大類藥品(化學(xué)藥品、中草藥、生化藥品)中重要的一類，在醫(yī)藥方面起了重要的作用。另外，還可以從牛腺體中提取活性肽、胰酶及其抑制劑，以及加工成各種美味佳肴。在本章中我們將詳細(xì)介紹牛腺體及內(nèi)臟的利用。第一節(jié)臟器的整理及保藏一、臟器的整理牛經(jīng)屠宰后其臟器應(yīng)仔細(xì)整理及保藏以免影響其利用價(jià)值。這主要是由于臟器在生牛屠宰加工過程中極易受到破壞。因此，要求屠宰后在最衛(wèi)生的條件下，迅速地加以采集。然后按照不同級別放入經(jīng)過消毒的不銹鋼或瓷盤中，立即放入凍結(jié)間進(jìn)行凍結(jié)。如不能及時(shí)放入凍結(jié)間進(jìn)行凍結(jié)，則應(yīng)暫時(shí)放入低溫冷藏庫中保存。肝臟取出后水洗，小心剝離膽囊，它可以直接食用或者做香腸原料。膽囊的開口以繩結(jié)扎，置于陰涼處干燥，它可以做醫(yī)藥原料。肝臟及心臟因附有血液和其他污染物，必須充分洗凈。胰臟雖無食用價(jià)值，但可以提取胰島素。胃自幽門處與腸切斷，并切開約6厘米，反轉(zhuǎn)除去內(nèi)容物，充分水洗。腸以手指剝離腸間膜，除去內(nèi)容物，反轉(zhuǎn)清洗?；蛘邔つ游镔|(zhì)除去，而得到堅(jiān)韌和富有彈性的薄膜，它可以在分離內(nèi)分泌腺體時(shí)，要除去附著的脂肪，注意不要使器官受到損傷。睪丸或卵巢可以做為制作激素的原料。膀胱可用于加工香腸的腸衣或者制冰囊。正確的保藏臟器與分泌腺，是制作各種臟器制劑的重要環(huán)節(jié)。要保證臟器有效成分不受破壞，必須進(jìn)行有效的防腐措施方可保存。常用的防腐法有以下幾種：(一)冰凍法第二節(jié)胸腺肽的提取一、化學(xué)組成及其應(yīng)用胸腺肽是一種具有高活力的混合肽類藥物。它主要是由分子量9600和7000左右兩類蛋白質(zhì)組成，含15種氨基酸，其中必需氨基酸甚多。對熱穩(wěn)定，加熱到80℃生物活性不受影響。胸腺肽主要從冷凍小牛胸腺中制備。在臨床上應(yīng)用廣泛，主要用于調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能，有抗衰老和抗病毒作用，適用于原發(fā)和繼發(fā)性免疫缺陷病，以及因免疫缺陷病或因免疫功能失調(diào)所引起的疾病，對腫瘤有較好的輔助療效，也可用于再生性障礙貧血、急慢性病毒肝炎等病的治目前已從胸腺中提取并證明具有生物活性的激素及多肽因子有多種。我國對胸腺肽的生產(chǎn)工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、臨床應(yīng)用等方面，作了大量的研究?，F(xiàn)市場上廣泛使用的胸腺肽是Goidstein等在1966年從小牛胸腺中提取的第五組分(F5),并命名為胸腺素(thymosin)。有的文獻(xiàn)稱，胸腺素F5是含有10-15個(gè)組分的一類多肽物質(zhì)，所以現(xiàn)在稱胸腺肽?，F(xiàn)已清楚，胸腺肽組分五中性組分，它們的主要生物功能表現(xiàn)在，連續(xù)誘導(dǎo)T細(xì)胞分化發(fā)育的各個(gè)階段；放大并增強(qiáng)成熟T細(xì)胞對抗原或其他刺激物的反應(yīng)；維持機(jī)體的免疫平衡狀態(tài)。目前市場銷售的胸腺肽，主要(一)加工原料取健康小牛的胸腺(每頭可采100克左右),并立即在-20℃下冷凍保存，保證原料不變質(zhì)；無菌蒸餾水：取蒸餾水高壓滅菌30分鐘。(二)加工設(shè)備攪肉機(jī)、組織搗碎機(jī)、超濾器、布氏漏斗、水浴鍋、低溫冰箱、滅菌鍋、冷凍干燥設(shè)備。(三)工藝流程胸腺肽的提取工藝流程如圖5-1。圖5-1胸腺肽的提取工藝流程(四)工藝要點(diǎn)4.超濾將上述濾液經(jīng)超濾器進(jìn)行超濾(濃縮作用),收集超濾液(分子量為1萬以下的活性肽)。第三節(jié)胰酶的提取一、化學(xué)組成及其應(yīng)用二、提取工藝1.刨碎把冷凍胰臟創(chuàng)碎成胰漿，然后加入10%的十二指腸(預(yù)絞碎)。2.激活在胰漿中加1.5倍量25%的乙醇，另外按每100克胰漿再加入0.5克氯化鈣，用3.提取把激活的胰酶，在25℃水浴鍋中加熱，恒溫?cái)嚢?~3小時(shí)。趁熱過濾，濾渣再提取一次，合并兩次濾液，棄去胰渣。在濾液中混入乙醇(95%)至乙醇濃度為65%,攪拌30分鐘4.脫水、干燥把沉淀用2.5倍乙酰洗一次，再用2倍丙酮洗一次，脫水至干，在干燥器(三)檢驗(yàn)方法1.質(zhì)量檢查胰酶是從健康的豬、牛、羊等動(dòng)物胰臟中提取的多種酶的混合物。主要為胰(1)性狀胰酶粉為類白色或微帶黃色的粉末，微臭，但無腐敗臭氣，有吸濕性，水溶液煮(2)脂肪殘留量檢查取胰酶粉1克，放入帶塞錐形瓶中，加乙醚10毫升，時(shí)時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)，放置約2小時(shí)后，將上層的乙醚液用乙醚濕潤的濾紙過濾。殘?jiān)儆?0毫升乙醚如上法浸漬2小時(shí)，一起濾過。剩余的殘?jiān)靡颐?毫升在濾紙上進(jìn)行洗滌，濾盡乙醚。合并濾液，放置。使乙醚自然揮發(fā)后，在105℃干燥2小時(shí)。胰酶的質(zhì)量檢驗(yàn)時(shí)，準(zhǔn)確稱取，遺留脂肪不得超過(3)干燥失重取本品在105℃干燥4小時(shí)，失重量不得超過5.0%。2.酶活力測定按規(guī)定，測定胰酶活力時(shí)，胰酶酪蛋白轉(zhuǎn)化力應(yīng)在1.14~1.18倍左右。一、化學(xué)組成及應(yīng)用胰蛋白酶抑制劑，又稱抑肽酶，是一種小分子蛋白酶，分子蛋白酶、纖溶酶、凝血酶及各種組織或血漿激肽釋放酶等蛋白酶有廣譜的抑制作用。臨床上已廣泛用于治療急性胰腺炎、燒傷后的休克及產(chǎn)后大出血等病，有獨(dú)特的療效。胰蛋白酶抑制劑可從牛肺、胰臟等組織中提取，也可從牛胰臟中提取的胰蛋白酶的結(jié)晶母液中制取。隨著養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展，牛的臟器綜合利用逐步引起人們的關(guān)注，從牛肺中提取胰蛋白(一)工藝流程從牛肺中提取胰蛋白酶抑制劑的方法圖5-3表示如下：圖5-3胰蛋白酶抑制劑提取工藝流程圖(二)操作要點(diǎn)1.處理取新鮮或冷凍牛肺，沖洗干凈后，用絞肉機(jī)絞碎(先切成小塊后再絞),把糜漿(牛肺)倒入塘瓷缸中。2.提取在上述塘瓷缸中，加5倍體積的水(相對于牛肺來講),攪拌，用3毫摩爾/升硫酸調(diào)節(jié)pH至2,然后攪拌提取8-10小時(shí)，用雙層紗布過濾，濾渣再按同樣條件提取一次，收集兩次濾液，調(diào)節(jié)濾液pH為5左右。3.鹽析于pH1.5的濾液中，在攪拌下，慢慢加入硫酸銨粉末(每升濾液加277克),再次校正pH至1.5左右，然后靜置過夜。次日，虹吸出上清液，過濾鹽析物，用20%氫氧化鈉調(diào)節(jié)濾液pH至5.5左右，再加硫酸銨粉末(每升濾液加入255克),攪拌均勻后，靜置2天，然后濾4.去雜蛋白將鹽析物放置大燒杯中，用10倍量的水溶解鹽析物，攪拌2小時(shí)，放入4℃冰箱中過夜，過濾，收集濾液，棄去沉淀物。在濾液中加入50%的三氯乙酸(加量為濾液的1/20),攪拌均勻，立即加熱到80℃,冷卻至30℃以下，用雙層紗布過濾，收集濾液于塘瓷桶5.鹽析將上述濾液用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至3,在攪拌中，緩慢加入硫酸銨粉末(按每升濾液加610克左右計(jì)算),待硫酸銨完全溶解后，置室溫下過夜，然后用雙層紗布過6.硫酸鋅鹽析把收集的鹽析物移入玻璃燒杯中，加入5倍體積的新配制的pH為5.5、0.1毫摩爾/升醋酸鈉緩沖液和1倍體積0.4毫摩爾/升的硼酸緩沖液，攪拌，使鹽析物完全溶解。然后在攪拌下，按每升溶解液加1050克硫酸鋅粉的量加入硫酸鋅，待硫酸鋅全部溶解后，于室溫靜置過夜，次日用雙層紗布過濾，棄去濾液，收集鹽析物。7.透析將硫酸鋅鹽析物移入燒杯中，用4倍體積的水使鹽析物全部溶解，然后裝入透析袋內(nèi)，在10℃以下加自來水透析過夜，然后加硅藻土過濾，收集濾液。8.脫鹽將濾液移入塘瓷桶中，加入201XT陰離子交換樹脂和001XT陽離子交換樹脂(201XT:001XT=3:1),攪拌吸附30分鐘，用氯化鉀溶液檢查無白色硫酸壩沉淀為止(取幾滴吸附液加1滴氯化鉀溶液),過濾回收樹脂，收集脫鹽液。9.沉淀在上述脫鹽液中加入0.9%氯化鈉和1.5倍的丙酮，攪拌均勻，靜置后過濾，濾液再加4倍量丙酮，靜置過夜，虹吸回收上清液(可回收丙酮),沉淀分別用丙酮、乙醚洗滌，干燥。再溶于60倍量甲醇溶液(80%)中，在冰浴攪拌2小時(shí)，過濾，收集濾液，棄去濾渣，再按濾液體積的1%加入氯化鈉溶液(30%),加入5倍體積的丙酮，攪拌均勻，靜置過夜，用離心機(jī)分出沉淀，上清液可回收丙酮。沉淀用丙酮洗滌2次，放置干燥器中干燥沉淀物。10.去熱原、沉淀、干燥將沉淀物用60倍體積的無熱原水溶解，然后用20%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至11左右，在4℃放置過夜，過濾，濾液用醋酸調(diào)節(jié)pH4~5,最后加入1%量的氯化鈉溶液(濃度為30%)和5倍量的丙酮，靜置過夜，收集沉淀，清液用于回收丙酮，將沉淀分別用花生四烯酸是動(dòng)物體內(nèi)的必需脂肪酸，又是生物合成前列腺素的前體，有類似前列腺素的廣泛生理和藥理作用。用生物提取法制備花生四烯酸，原料常用牛或豬腎上腺，方法有多種，如加漠脫漠法、低溫冷凍法、柱層析及尿素包合法分離花生四烯酸。其中尿素包合法成本低，質(zhì)量優(yōu)，可以代替進(jìn)口品，經(jīng)氣相色譜分析及生物轉(zhuǎn)化前列腺素E2證明，完全符合要求。1.牛腎上腺油總脂肪酸的制備取1千克牛腎上腺絞碎，加11.95%酒精和100克氫氧化鉀攪勻，加熱充氮回流4小時(shí)。將皂化液冷卻至50℃,用1:1(V/V)鹽酸調(diào)節(jié)pH至3,酸分油，棄水層，乳化層用乙醚提取，合并乙酸提取液和油層，減壓回收乙醚，得總脂肪酸。2.牛腎上腺油脂肪酸的分離——花生四烯酸的制備將總脂肪酸、尿素、石油醚及甲酵(w;w:U:U=1:1:4.8:0.25)混合，室溫下攪拌4小時(shí)，放置過夜，抽濾，沉淀用適量石油醚洗滌，3.花生四烯酸甲酯的制備將花生四烯酸、甲醇、濃硫酸(W:U:U=30:20:0.7)混合，于上回流3小時(shí)，水洗至中性，干燥后回收溶劑得花生四烯酸甲酯粗品。減壓蒸餾(190~200℃,300帕)得淡黃色油狀物為花生四烯酸甲酯精品。采用氣相色譜進(jìn)行分析。色譜條件：日本島律GC-5A型氣相色譜(聯(lián)數(shù)據(jù)處理機(jī)),氫火焰離子化檢測器，氮?dú)饬魉?5毫升/分鐘、空氣流速400毫升/分鐘、氫氣流速35毫升/分鐘、柱溫185℃、檢測室215℃、氣化室250℃、柱長3米直徑3毫米、載體硅藻土(DFGC)。上述條件，將總脂肪酸甲酯和花生四烯酸甲酯進(jìn)行氣相色譜分析，再用Sigima公司生產(chǎn)的花生四烯酸甲團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)品和自制的混合脂肪酸甲酪對照品進(jìn)行比較，鑒定出5種脂肪酸組分，氣相色譜分析各組分的百分含量。結(jié)果見表5-1。我國牛腎上腺資源豐富，成本低，設(shè)備簡單，綜合利用適合我國國情，且可為國家節(jié)省大量外匯。上述分析闡明每千克牛腎上腺含油量為27.69克，其花生四烯酸含量為15.7%。尿素飽合法操作簡便，避免了加漠脫漠法腐蝕性強(qiáng)及毒性大等缺點(diǎn)，此法優(yōu)點(diǎn)是化學(xué)合成法所不及的。尿素飽合并精制后花生四烯酸純度達(dá)70%,收率約4克/千克。表5-1牛腎上腺脂肪酸甲酯尿素飽合前后氣相色譜分析結(jié)果一、化學(xué)組成及其應(yīng)用膽酸(CA),全稱3a,7a,12a-三羥基-5B-膽烷酸，分子式C24H40O5,分子量408.6,熔點(diǎn)198℃。膽酸主要存在于牛、羊、豬的膽汁中，占膽汁酸量的90%。膽汁酸鹽具有降低表面張力的作用，使腸內(nèi)油脂乳化，提高脂酶的催化效率。此外，膽酸還有很強(qiáng)的溶血作用。在中藥的配制中，膽酸是人工牛黃的主要成分。據(jù)報(bào)道，人工牛黃的臨床效用主要為膽酸。食草類動(dòng)物牛、羊的膽汁中，膽紅素的含量比吃雜食的豬少，但膽酸含量為標(biāo)示量的90%~110%。因此，從牛、羊膽汁中提取膽酸，可以充分利用廢棄的動(dòng)物膽汁，變廢為寶，為制藥行業(yè)提供必(一)乙醇法提取工藝1.工藝流程如圖5-4所示2.操作要點(diǎn)(1)水解采集新鮮牛膽，剪破膽皮，收集膽汁，用紗布過濾一次，然后移入水解鍋內(nèi)，加入0.1倍量30%工業(yè)氫氧化鈉液，攪拌加熱至沸，皂化15~17小時(shí)，在皂化期間要隨時(shí)補(bǔ)充清水，以保證皂化進(jìn)行。皂化完畢后，冷卻至室溫，虹吸收集上層清液，把下層沉淀用布過濾，圖5-4乙醇法提取膽酸的流程圖(2)酸化用30%硫酸在攪拌下，調(diào)節(jié)pH至3左右，這時(shí)膽酸即浮出液面，靜置20分鐘左右，撈出漂浮物，放在鍋中，再加入1倍量的清水，攪拌均勻，加熱煮沸30分鐘，此時(shí)，膽酸即以顆粒狀沉淀下來。過濾出沉淀，用清水洗沉淀至中性，吊干，干燥得粗膽酸。(3)溶解、結(jié)晶把粗膽酸磨碎，加入等量左右80%乙醇，攪拌均勻，加熱回流至粗膽酸全部溶解，過濾除去不溶物，收集濾液至攜瓷桶中，于5℃左右靜置結(jié)晶過夜，然后虹吸回收上層廢乙醇，吊干結(jié)晶物。用95%乙醇洗滌1-2次，吊干，干燥即得結(jié)晶物。(4)乙醇沉淀和洗滌干燥把以上結(jié)晶物放在塘瓷缸中，攪拌下加入4-5倍量95%乙醇和5%活性炭，加熱到70-80℃,攪拌30分鐘，趁熱過濾活性炭。將過濾液靜置于鍋中加熱濃縮至原體積的1/4,在5℃靜置過夜，再用布吊干沉淀，用95%乙醇洗滌1-2次，干燥，即得膽酸精(二)醋酸乙酯法提取工藝1.工藝流程醋酸乙酯法從牛膽汁中提取膽酸的工藝如圖5-5所示。圖5-5醋酸乙酯法提取工藝流程圖分離：將經(jīng)乙醇法酸化后過濾至干的粗膽酸，放入鍋中，加人1.5倍量的10℃冷醋酸乙酯，攪拌使其完全溶解，保溫?cái)嚢?小時(shí)，使雜物溶解在醋酸乙酯內(nèi)，然后用布過濾，收集濾液可回收醋酸乙酯，沉淀再按上法提取分離2~3次。沉淀物吊干，盡量自然揮發(fā)除去醋酸乙酯提純、干燥：把以上膽酸放入鍋中，加入等量左右的冷乙醇(10℃左右),攪拌使其完全溶解，然后繼續(xù)攪拌保溫3小時(shí)，過濾回收乙醇。沉淀再按上法提取分離2~3次，最后吊干，除一、化學(xué)組成及其應(yīng)用牛黃是從牛的膽囊或膽囊管中取出的結(jié)石，又稱天然牛黃。牛黃是一種療效確切的名貴中定魄”;“定精神，除熱，止驚痢”;“痘瘡紫色，發(fā)狂譜語者可用”。在歐洲，15世紀(jì)也有牛黃的化學(xué)成分：游離膽紅素、結(jié)合膽紅素(膽紅素鈣、膽紅素酯)、游離膽汁酸(膽酸、豬脫氧膽酸、鵝去氧膽酸、石膽酸、留族膽酸)、結(jié)合膽汁酸(?；悄懼猁}、甘氨膽汁酸鹽)、膽舀醇(游離膽固醇、膽固醇酯、麥角固醇)、脂肪酸、卵磷脂、黏蛋白、平滑肌收縮物質(zhì)(肽類)、氨基酸(丙氨酸、甘氨酸、?；撬?、精氨酸、天門冬氨酸、蛋氨酸、白氨酸)、三種類胡蘿卜素、維生素D、粒狀無色結(jié)晶、性狀不明的熒光物質(zhì)、油狀的強(qiáng)心成分、牛黃的主要成分是膽紅素和膽酸，其中膽紅素含量達(dá)72%~76.5%,膽汁酸、膽酸及其鹽類占11%~16.2%。牛黃是配制很多中成藥的主要成分，但自然來源十分稀少，所以要配制大量的中成藥，靠天然牛黃，也就是牛的膽結(jié)石，就遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了生產(chǎn)中成藥的需要。20世紀(jì)50年代初，我國參照天然牛黃的化學(xué)組成，成功制備了人工牛黃，并進(jìn)行了藥理實(shí)驗(yàn)和臨床驗(yàn)證工作，人工牛黃在解熱、抗驚厥、祛痰和抑菌作用方面，都優(yōu)于天然牛黃。(一)采黃后的處理取黃后應(yīng)及時(shí)將其表面上的脂汁、黏液和血跡用蒸酸水或清水洗凈，置托盤中，在室溫下避光隙至表面不粘手，用兩層衛(wèi)生紙或硫酸紙包好即可進(jìn)行干燥。(二)干燥由于采黃手術(shù)多在偏遠(yuǎn)山區(qū)和牧區(qū)進(jìn)行，培植牛黃的干燥受其條件的限制。因此，可根據(jù)1.傳統(tǒng)干燥法用燈心草將牛黃纏好，懸吊在室內(nèi)通風(fēng)、避光處陰干。2.石灰干燥法用衛(wèi)生紙包好牛黃，置于小托盤中，放入石灰桶(塑料桶中裝入石灰),桶口用塑料紙?jiān)o，經(jīng)過2~3天即可干燥好。3.電熱干燥法將濕黃置于方盤中，放入電熱干燥箱或真空干燥箱中60~70℃,干燥6~12(三)脫床脫床是將培植牛黃成品與培植牛黃的核心物(塑料網(wǎng)架和包布)剝離的過程。一般分為全全干脫床：帶床的培植牛黃干燥后，水分在9%左右即可進(jìn)行脫床。操作者應(yīng)該戴上橡皮手套，在潔凈和避光的環(huán)境下，用手術(shù)剪剪開包布和牛黃床，將培植牛黃剝離，置于潔凈的玻璃平血或白紙上，并把包布上的培植牛黃用手搓凈。半干脫床：帶床的培植牛黃在半干的情況下(含水分約25%~35%),按全干脫床法進(jìn)行。脫(四)挑揀、分級及貯藏脫床后的培植牛黃混有牛毛、線頭、焦黑塊狀物等雜質(zhì)，將其挑練干凈。根據(jù)培植牛黃的香清涼感者質(zhì)量上乘；呈土黃色、黑黃色的片塊物，間有灰白色，質(zhì)較硬的為質(zhì)量下乘；呈烏黑色，斷面棕黑色，角質(zhì)樣的塊片，無清香氣，略帶異臭味者不是培植牛黃，屬膽汁沉積的干結(jié)物。將挑揀分級好的培植牛黃按標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，合格的成品應(yīng)貯存在棕色玻璃廣口瓶內(nèi)，或裝入塑料袋，外包牛皮紙或黑紙，裝入鐵盒內(nèi)密封，置陰涼干燥處，防潮，防壓。三、人工牛黃的鑒別牛黃為我國傳統(tǒng)的中藥材，是多種中成藥的重要原料之一。由于它功效卓著,價(jià)格昂貴而短缺，故在商品中常有摻假品的現(xiàn)象，為確保用藥質(zhì)量和療效，將其鑒別方法報(bào)告如下：(一)牛黃外觀牛黃為?？?/p>