五組血友病問(wèn)題討論

CurrentapproachestogenetherapyinhemophiliaB

傳統(tǒng)蛋白替代療法的缺陷FIX的半衰期僅為24h，患者需要反復(fù)輸入維持正常水平；費(fèi)用昂貴（按需蛋白質(zhì)治療的年治療費(fèi)用大約為每例患者150,000美元，預(yù)防性治療大約為每年300,000美元，估計(jì)每例患者的終身治療費(fèi)用將超過(guò)2千萬(wàn)美元）;面臨血液感染疾病的風(fēng)險(xiǎn)如肝炎及艾滋病毒等。基因治療的優(yōu)勢(shì)1.FIX的基因突變是引起血友病的主要原因，且大都為核苷酸取代（FVIII最普遍的變異則是染色體的倒位）；2.FIX的基因能夠在不同的細(xì)胞類型中表達(dá)，并且很容易分泌進(jìn)入到血液；3.少量的.FIX的表達(dá)（正常含量的1%）即可明顯地改變癥狀；4.已經(jīng)存在較多的動(dòng)物模型?；蛑委煹妮d體病毒載體逆轉(zhuǎn)錄病毒載體（rRV載體）腺病毒載體（AV載體）腺相關(guān)病毒載體（AAV載體）非病毒載體逆轉(zhuǎn)錄病毒載體（rRV載體）優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定整合到宿主細(xì)胞的基因組中，且宿主細(xì)胞廣泛，包括成纖維細(xì)胞、成肌細(xì)胞、造血干細(xì)胞和肝細(xì)胞等。缺點(diǎn)：不能整合到非分裂細(xì)胞中；創(chuàng)傷較大（肝細(xì)胞為G0期細(xì)胞，為使肝臟增殖，需要切除部分肝臟）；體內(nèi)轉(zhuǎn)化效率低。腺病毒載體（AV載體）優(yōu)點(diǎn)：高效轉(zhuǎn)化廣泛的靶細(xì)胞，尤其是非分裂細(xì)胞；不整合到宿主細(xì)胞基因中，不影響其他基因表達(dá)。缺點(diǎn)：感染腺病毒可以刺激細(xì)胞免疫（圖），從而降低其表達(dá)的持續(xù)性。第二代AV載體（amplicon載體）切除幾乎所有的AV基因，僅含有復(fù)制和包裝的順式元件，因而降低了宿主的免疫反應(yīng)，延長(zhǎng)了基因表達(dá)的時(shí)間。但缺點(diǎn)在于基因表達(dá)的水平較低，幾乎比第一代AV載體降低了100倍。腺相關(guān)病毒載體（AAV載體）優(yōu)點(diǎn)：有效穩(wěn)定表達(dá)；免疫原性弱，不引起細(xì)胞毒性的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)缺點(diǎn)：包裝容量小（基因少），表達(dá)反應(yīng)滯后AAV是一種可感染人細(xì)胞、但具有天然復(fù)制缺陷的單鏈DNA病毒。傳統(tǒng)單鏈AAV載體（singlestrandedAAV,ssAAV）表達(dá)滯后的原因在于其進(jìn)入靶細(xì)胞并脫殼后，首先要合成互補(bǔ)DNA鏈才能進(jìn)一步表達(dá)。自身互補(bǔ)AAV載體（plementaryAAV,scAAV）的發(fā)明則彌補(bǔ)了表達(dá)滯后的缺點(diǎn)，可將載體基因設(shè)計(jì)成1個(gè)單鏈反向重復(fù)序列，當(dāng)載體進(jìn)入靶細(xì)胞后即可折疊形成1條互補(bǔ)雙鏈，從而繞開(kāi)影響基因表達(dá)速度的步驟。非病毒載體脂質(zhì)體、微膠囊等形式，避免了病毒載體的免疫原性、不安全性和表達(dá)不穩(wěn)定性等缺陷。具有來(lái)源廣泛、成分明確、免疫反應(yīng)低、可大量制備等優(yōu)點(diǎn)。而缺點(diǎn)在于轉(zhuǎn)染效率低、FⅨ難以長(zhǎng)期表達(dá)。例：將含人FIX基因的載體體外轉(zhuǎn)化成肌細(xì)胞，然后將成肌細(xì)胞用微膠囊包被后，植入小鼠體內(nèi)，可穩(wěn)定表達(dá)8周左右?；蛑委煹陌屑?xì)胞肝細(xì)胞成肌細(xì)胞皮膚成纖維細(xì)胞…成功案例復(fù)旦大學(xué)遺傳研究所和第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)海醫(yī)院：用帶有FⅨ基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染患者的離體皮膚成纖維細(xì)胞，篩選出表達(dá)FⅨ的細(xì)胞，經(jīng)一系列安全性檢測(cè)后經(jīng)體外擴(kuò)增，用膠原包埋細(xì)胞，于患者腹部或背部皮下注射。2例患者體內(nèi)血漿FⅨ水平升高2倍多，持續(xù)超過(guò)1年，沒(méi)有出現(xiàn)明顯的治療相關(guān)不良反應(yīng)。最新消息2011年12月10日，英國(guó)倫敦大學(xué)學(xué)院的的臨床試驗(yàn)表示，單次靜脈注射表達(dá)FⅨ的腺病毒相關(guān)病毒(scAAV8)