DB13-T1384-6-2011飼料中泰樂菌素的測定

ICS65.120

B46

DB13

河北省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB13/T1384.6—2011

飼料中泰樂菌素的測定

Determinationoftylosininfeed

DB13/T1384.6—2011

飼料中泰樂菌素的測定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中泰樂菌素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中泰樂菌素的測定。

本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限為1.0μg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（GB/T6682-1992，neqISO3696:1987)

3原理

試樣用堿性溶液溶解后，用固相萃取柱萃取，洗脫液濃縮后用甲醇溶液定容，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

儀測定，外標(biāo)法定量。

4試劑和材料

除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1水：應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.2甲醇：HPLC級。

4.3二氯甲烷：分析純。

4.4乙酸鈉：分析純。

4.5甲醇+水(2＋8)（V/V）：量取20mL甲醇與80mL水混合。

4.6固相萃取柱：HLB或相當(dāng)者,200mg，3mL。

4.7泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥95％。

4.8泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：1.0mg/mL。準(zhǔn)確稱取適量的泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（4.7），用甲醇配成

1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。儲備液貯存在4℃冰箱中，可使用兩個(gè)月。

4.9泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用空白樣品提取液分別配成泰樂菌素濃度為2.0ng/mL、5.0ng/mL、

10.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、200.0ng/mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在4℃保存，可

使用一周。

4.10乙酸鈉緩沖液（pH＝5.5，0.15mol/L）：稱取12.30g醋酸鈉于1000mL量瓶中，加900mL

水，使溶解，調(diào)節(jié)pH至5.5，用水定容。

5儀器

1

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5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。

5.2分析天平：感量0.lmg和0.0lg各一臺。

5.3氮吹儀。

5.4旋渦混勻器。

5.5離心管：100mL。

5.6高速離心機(jī)。

5.7濾膜過濾器：0.45μm，有機(jī)相。

5.8刻度離心管：10mL。

6試樣的制備

6.1提取

準(zhǔn)確稱取5g樣品（精確至0.01g）于100mL離心管中，加入30mL二氯甲烷于旋渦混勻器上快

速混勻10mim,5000r/min離心5min。將上清液移至20mL試管中，氮吹儀吹至近干，加1mL甲醇

溶解殘?jiān)?，再加入乙酸鈉緩沖溶液4mL,輕輕搖勻，在離心管中加入5mL正己烷，輕輕搖勻，于5000

r/min離心5min,使分層，取水相待凈化。

6.2凈化

將水相移入OasisHLB柱器（使用前分別用3mL甲醇和5mL水預(yù)處理，保持柱體濕潤）中，以不

高于2mL/min的流速過柱，待溶液完全流出后，用5mL水洗離心管和貯液管并過柱,然后再用5mL

甲醇＋水（20＋80）洗柱，棄去全部淋出液。在65kPa的負(fù)壓下，減壓抽干10min，最后用5mL甲

醇洗脫，收集洗脫液于10mL刻度離心管中，于50℃氮吹儀吹干，用甲醇＋水（30＋70）定容至1.0mL，

過0.45μm的濾膜到進(jìn)樣瓶中，供液相色譜－質(zhì)譜儀測定。

7測定步驟

7.1測定

7.1.1液相色譜條件

色譜柱：C18，5μm，150mm×2.1mm（內(nèi)徑）或相當(dāng)者。

流動相：水（A）+甲醇（B）。

流速：0.25mL/min。

梯度：0min～5.0min20％～90％B，5.0min～7.0min90％B，7.1min～9.0min20％B。

柱溫：30℃。

進(jìn)樣量：25μL。

7.1.2串聯(lián)質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI），正離子監(jiān)測。

掃描方式：多反映檢測（MRM）。

霧化氣、鞘氣為高純氮?dú)猓鲎矚鉃楦呒兒狻?/p>

電噴霧電壓、碰撞電壓等自動優(yōu)化至最佳值。

定性離子對(m/z)：916.5/174，916.5/772.5。

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定量離子對(m/z)：916.5/174。

7.2液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜測定

泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜設(shè)定條件下分別進(jìn)樣，以樣品峰面積為縱坐標(biāo)，工作

溶液濃度（ng/mL）為橫坐標(biāo)，繪制6點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中

泰樂菌素的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測定的線性范圍內(nèi)。泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖參見附錄A。

7.3空白試驗(yàn)

除不稱取試樣外，均按上述步驟進(jìn)行。

8結(jié)果計(jì)算

結(jié)果用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式(1)計(jì)算，計(jì)算結(jié)果需扣除空白值：

V

X=c?

m...........................................................(1)

式中：

X——試樣中被測組分殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）。

c——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到的被測組分溶液濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）。

V——樣品溶液定容體積，單位為毫升(mL)。

m——樣品溶液所代表試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。

9精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15％。

3

DB13/T1384.6—2011

AA

附錄A

（資料性附錄）

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)總離子流圖及質(zhì)譜圖

圖A.1泰樂菌素總離子流圖及質(zhì)譜圖

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4

DB13/T1384.6—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1－2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、石家莊市疾病預(yù)防控制中心、北京出入境檢驗(yàn)

檢疫技術(shù)中心、河北醫(yī)科大學(xué)、河北省飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張巖、張宏、李揮、叢斌、楊立學(xué)、盧曉宇、呂品、賈茜、李志平、馬春玲、

米振杰、沈磊、范斌、高振同、武英利。

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AA

附錄A

（資料性附錄）

氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖

表A.1氯羥吡啶標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖

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