JJF 2089-2023 全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀校準(zhǔn)規(guī)范

中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量技術(shù)規(guī)范全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀校準(zhǔn)規(guī)范2023-10-12發(fā)布2024-04-12實(shí)施JJF2089—2023全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀校準(zhǔn)規(guī)范CalibrationSpecificationforFullyAutomatedELISAAnalyzersJJF2089—2023歸口單位:全國(guó)生物計(jì)量技術(shù)委員會(huì)主要起草單位:中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院參加起草單位:中檢(河南)計(jì)量檢測(cè)有限公司河南省計(jì)量科學(xué)研究院黑龍江省計(jì)量檢定測(cè)試研究院本規(guī)范委托全國(guó)生物計(jì)量技術(shù)委員會(huì)負(fù)責(zé)解釋JJF2089—2023本規(guī)范主要起草人:盛靈慧(中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院)武利慶(中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院)參加起草人:丁峰元[中檢(河南)計(jì)量檢測(cè)有限公司]趙迎晨[中檢(河南)計(jì)量檢測(cè)有限公司]賈會(huì)(河南省計(jì)量科學(xué)研究院)丁海銘(黑龍江省計(jì)量檢定測(cè)試研究院)周彤(黑龍江省計(jì)量檢定測(cè)試研究院)JJF2089—2023Ⅰ引言 (Ⅱ)1范圍 (1)2引用文件 (1)3術(shù)語和計(jì)量單位 (1)4概述 (1)5計(jì)量特性 (2)6校準(zhǔn)條件 (2)6.1環(huán)境條件 (2)6.2測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)及其他設(shè)備 (2)7校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法 (2)7.1加液體積示值誤差和加液重復(fù)性 (3)7.2孵育溫度示值誤差 (3)7.3洗滌殘留 (4)7.4吸光度示值穩(wěn)定性 (4)7.5吸光度示值誤差 (4)7.6吸光度重復(fù)性 (5)7.7吸光度通道差異 (5)7.8吸光度線性 (5)8校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá) (6)8.1校準(zhǔn)結(jié)果處理 (6)8.2校準(zhǔn)結(jié)果的測(cè)量不確定度 (6)9復(fù)校時(shí)間間隔 (6)附錄A1990年國(guó)際溫標(biāo)純水密度表 (7)附錄B校準(zhǔn)原始記錄格式 (8)附錄C校準(zhǔn)證書內(nèi)頁格式 (12)附錄D吸光度示值誤差測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)定示例 (13)JJF2089—2023ⅡJJF1071《國(guó)家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫規(guī)則》、JJF1001《通用計(jì)量術(shù)語及定義》和JJF1059.1《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》共同構(gòu)成支撐本規(guī)范制定工作的基礎(chǔ)性系列規(guī)范。JJG861—2007《酶標(biāo)分析儀》。本規(guī)范為首次發(fā)布。JJF2089—20231全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀校準(zhǔn)規(guī)范1范圍本規(guī)范適用于吸光度測(cè)定原理的全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀的校準(zhǔn)。2引用文件本規(guī)范引用了下列文件:JJG861—2007酶標(biāo)分析儀JJF1059.1—2012測(cè)量不確定度評(píng)定與表示JJF1071—2010國(guó)家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫規(guī)則YY/T1529—2017酶聯(lián)免疫分析儀凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3術(shù)語和計(jì)量單位JJG861—2007、YY/T1529—2017中界定的及以下術(shù)語和定義適用于本規(guī)范。3.1酶聯(lián)免疫分析enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,通過酶標(biāo)記抗原或抗體與固相載體表面的抗體或抗原進(jìn)行免疫反應(yīng),實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行定性或定量檢測(cè)的方法。注:酶聯(lián)免疫分析通常將抗原或抗體吸附在固相載體上(包被),受檢樣本(含待測(cè)抗原或抗體)和酶標(biāo)記抗體或抗原,按一定程序與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體起反應(yīng)形成抗原和抗體的復(fù)合物,固相載體上被結(jié)合的酶標(biāo)記物的量與樣本中待測(cè)物的量成一定比例。加入酶反應(yīng)底物后,底物被酶催化生成有色產(chǎn)物,通過底物的顏色反應(yīng)來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中相應(yīng)抗體或抗原的量成比例。3.2全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀fullyautomatedELISAanalyzer采用酶聯(lián)免疫分析原理對(duì)樣本進(jìn)行定性和定量分析的儀器,其所有分析過程包括樣品和試劑的加注、孵育洗板、數(shù)據(jù)測(cè)量、結(jié)果計(jì)算和輸出等都實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化。4概述全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀(以下簡(jiǎn)稱“分析儀”)通常由液體分配單元、孵育單元、洗板單元、檢測(cè)單元及計(jì)算機(jī)系統(tǒng)等核心模塊組成。測(cè)定時(shí)儀器首先通過液體分配單元將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟加到包被有抗體或抗原的固相載體(如96孔酶標(biāo)板)的表面;接著將固相載體轉(zhuǎn)移到孵育單元恒溫孵育一定時(shí)間;孵育結(jié)束后將固相載體轉(zhuǎn)移至洗板單元進(jìn)行洗滌,將未結(jié)合的抗原或抗體洗去;然后加入顯色底物并孵育顯色,最后采用檢測(cè)單元測(cè)定特定波長(zhǎng)下反應(yīng)液的吸光度,根據(jù)吸光度與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例的原理進(jìn)行定性或定量分析。JJF2089—202325計(jì)量特性分析儀各項(xiàng)計(jì)量特性指標(biāo)見表1。表1分析儀的主要計(jì)量特性指標(biāo)序號(hào)計(jì)量特性計(jì)量特性指標(biāo)1加液體積示值誤差20μL:不超過±4%200μL:不超過±1.5%2加液體積重復(fù)性20μL:不超過2%200μL:不超過1%3孵育溫度示值誤差不超過±1.5℃4洗滌殘留不超過5μL5吸光度示值穩(wěn)定性不超過±0.0056吸光度示值誤差不超過±0.037吸光度重復(fù)性不超過1.0%8吸光度通道差異不超過0.039吸光度線性r≥0.996校準(zhǔn)條件6.1環(huán)境條件6.1.1環(huán)境溫度:(15~30)℃;6.1.2相對(duì)濕度:≤85%。注:上述條件與制造商的產(chǎn)品規(guī)定不一致時(shí),以產(chǎn)品規(guī)定為準(zhǔn)。6.2測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)及其他設(shè)備6.2.1電子天平:分度值為0.01mg和0.1mg,級(jí);6.2.2溫度計(jì)及溫度測(cè)量?jī)x:最大允許誤差不超過±0.1℃。6.2.3計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):應(yīng)使用計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器或經(jīng)國(guó)家計(jì)量行政部門批準(zhǔn)頒布的光譜中性濾光片標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),吸光度標(biāo)稱值分別為0.2、0.5、1.0、1.5、2.0。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)6.2.4純水:電阻率達(dá)到18.2MΩ·cm。6.2.4純水:電阻率達(dá)到18.2MΩ·cm。7校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法分析儀在正常工作條件下先進(jìn)行儀器自檢和清洗,校準(zhǔn)前分析儀應(yīng)提前開機(jī)預(yù)熱30min以上。純水在使用前平衡至室溫并超聲脫氣處理,用溫度計(jì)測(cè)量純水溫度并從附錄A中查找到對(duì)應(yīng)的密度。JJF2089—202337.1加液體積示值誤差和加液重復(fù)性將可密封容器(如500μL帶蓋離心管)在分度值為0.01mg的電子天平上稱量質(zhì)量,去蓋后放到分析儀板架的合適位置,控制樣品針往該容器中加入20μL平衡至室溫的脫氣純水,立即蓋上容器在電子天平上稱量質(zhì)量。根據(jù)公式(1)計(jì)算加液體積,重復(fù)測(cè)量6次,根據(jù)公式(2)計(jì)算加液體積重復(fù)性。取后3次測(cè)量結(jié)果根據(jù)公式(3)計(jì)算20μL校準(zhǔn)點(diǎn)的加液體積示值誤差。重復(fù)上述過程,加液體積改為200μL,計(jì)算200μL校準(zhǔn)點(diǎn)的加液體積示值誤差。每一根加液針都按上述方法進(jìn)行校準(zhǔn),并分別報(bào)告結(jié)果。V=m-m0ρ(1)式中:V—加液體積,μL;m—容器和純水的總質(zhì)量,mg;m0—容器質(zhì)量,mg;ρ—室溫下水的密度,g/mL。RV=((nV-i-1)2××100%式中:RV—加液體積重復(fù)性,%;Vi—第i次加液體積測(cè)量結(jié)果,μL;V—6次加液體積測(cè)量結(jié)果平均值,μL;n—測(cè)量次數(shù),n=6。V0-ViEV×100%式中:V0—體積設(shè)定值,μL;Vi—后3次加液體積測(cè)量值,μL;EV—加液體積示值誤差,%。(2)(3)7.2孵育溫度示值誤差將分析儀孵育溫度設(shè)置為37.0℃,把溫度測(cè)量?jī)x的傳感器放置在酶標(biāo)板架上并關(guān)閉酶標(biāo)儀倉門,平衡30min待讀數(shù)穩(wěn)定后,讀取酶標(biāo)板上有代表性的至少6孔(如B4、B8、B12、G4、G8、G12)的實(shí)際溫度,每孔重復(fù)測(cè)量3次,根據(jù)公式(4)分別計(jì)算并報(bào)告上述代表性孔位的孵育溫度示值誤差。ET,j=T0-Ti,ji=1(4)式中:JJF2089—20234j—酶標(biāo)板上有代表性的至少6孔;T0—孵育溫度設(shè)定值,℃;Ti,j—j孔第i次溫度測(cè)量值,℃;ET,j—j孔孵育溫度示值誤差,℃。7.3洗滌殘留取一塊96孔酶標(biāo)板,在分度值為0.1mg的電子天平上稱量其質(zhì)量。設(shè)定洗滌程序?yàn)槿逑礈?用平衡至室溫的脫氣純水逐行或逐列清洗,每孔清洗用量300μL,無浸泡時(shí)間,重復(fù)清洗5次。清洗完成后,在分度值為0.1mg的電子天平上再次稱量96孔酶標(biāo)板的質(zhì)量,根據(jù)公式(5)計(jì)算洗滌殘留:w=(5)式中:w—洗滌殘留,μL;m1—洗滌后酶標(biāo)板質(zhì)量,mg;m0—洗滌前酶標(biāo)板質(zhì)量,mg;ρ—純水密度,g/mL。7.4吸光度示值穩(wěn)定性選用492nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng),將吸光度標(biāo)稱值為1.0的光譜中性濾光片平放在96孔酶標(biāo)板的空板架上,以空氣為參比,測(cè)量并記錄儀器的初始吸光度示值,5min后記錄吸收度示值一次,記錄初始值10min后再次記錄儀器示值。取后兩次吸光度示值與初始值之差絕對(duì)值較大者按照公式(6)計(jì)算吸光度示值穩(wěn)定性r:r=A-A0(6)式中:r—吸光度示值穩(wěn)定性,無量綱;A0—初始時(shí)的吸光度,無量綱;A—5min和10min兩次吸光度示值與初始值之差絕對(duì)值較大者,無量綱。7.5吸光度示值誤差依次選用405nm、450nm、492nm、620nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng),將吸光度標(biāo)稱值分別為0.2,0.5,1.0,1.5,2.0的5塊光譜中性濾光片同時(shí)平放在96孔酶標(biāo)板的空板架上,以空氣為參比,連續(xù)測(cè)量3次,依次記錄儀器吸光度示值,并計(jì)算平均值。吸光度示值誤差ΔA按公式(7)計(jì)算:ΔA=式中:Ai-As=A-As(7)ΔA—吸光度示值誤差,無量綱;Ai—第i次測(cè)量的吸光度值,無量綱; A—3次吸光度測(cè)量結(jié)果的平均值,無量綱;As—吸光度標(biāo)準(zhǔn)值,無量綱。JJF2089—20235逐一報(bào)告405nm、450nm、492nm、620nm或儀器特有專一波長(zhǎng)下,不同吸光度水平的吸光度示值誤差。7.6吸光度重復(fù)性選用450nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng),將吸光度標(biāo)稱值為0.5或1.0的光譜中性濾光片平放在96孔酶標(biāo)板的空板架上,以空氣為參比,于固定的某一孔位重復(fù)測(cè)量6次,記錄儀器吸光度示值,并計(jì)算平均值,按公式(8)計(jì)算RA表征吸光度重復(fù)性。RA=nA-i-1)2××100%(8)式中:RA—相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,%;Ai—第i次吸光度測(cè)量值,無量綱; A—6次吸光度測(cè)量結(jié)果的平均值,無量綱;7.7吸光度通道差異n—測(cè)量次數(shù),n=7.7吸光度通道差異選用450nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng),將吸光度標(biāo)稱值為1.0的光譜中性濾光片平放在96孔酶標(biāo)板的空板架上,先后置于多個(gè)通道的相應(yīng)位置,以空氣為參比,測(cè)量并記錄每一通道的至少6次吸光度值(例如A通道可測(cè)量A1~A6或A2~A7),多個(gè)通道的差異結(jié)果報(bào)告用全部測(cè)量數(shù)據(jù)的極差值表示,按公式(9)計(jì)算吸光度通道差異δA:δA=Amax-Amin(9)式中:Amax—多個(gè)通道中測(cè)量結(jié)果的吸光度最大值,無量綱;Amin—多個(gè)通道中測(cè)量結(jié)果的吸光度最小值,無量綱;δA—吸光度通道差異,無量綱。7.8吸光度線性選用450nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng),將吸光度標(biāo)稱值分別為0.2、0.5、1.0、1.5和2.0的光譜中性濾光片平放在96孔酶標(biāo)板的空板架上,以空氣為參比,每個(gè)濾式(10)進(jìn)行最小二乘線性回歸并計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)r作為吸光度線性的表征。r=式中:(xi-x)(yi-y)i=12ii=1(x-x2ii=12ii=1(y-2ii=1(10)r—線性相關(guān)系數(shù);xi—各個(gè)吸光度水平光譜中性濾光片吸光度的標(biāo)準(zhǔn)值,無量綱;JJF2089—20236 x—各個(gè)吸光度水平光譜中性濾光片吸光度標(biāo)準(zhǔn)值的平均值,無量綱;yi—各個(gè)吸光度水平光譜中性濾光片吸光度的測(cè)量值,無量綱;y—各個(gè)吸光度水平光譜中性濾光片吸光度測(cè)量值的平均值,無量綱。8校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)8.1校準(zhǔn)結(jié)果處理經(jīng)校準(zhǔn)后的分析儀應(yīng)核發(fā)校準(zhǔn)證書,校準(zhǔn)證書應(yīng)符合JJF1071—2010中5.12的要求,并給出各校準(zhǔn)項(xiàng)目名稱和測(cè)量結(jié)果以及擴(kuò)展不確定度。校準(zhǔn)原始記錄格式(推薦性表格)見附錄B,校準(zhǔn)證書內(nèi)頁格式(推薦性表格)見附錄C。8.2校準(zhǔn)結(jié)果的測(cè)量不確定度分析儀校準(zhǔn)結(jié)果的測(cè)量不確定度按JJF1059.1—2012的要求評(píng)定,校準(zhǔn)結(jié)果測(cè)量不確定度評(píng)定示例見附錄D。9復(fù)校時(shí)間間隔由于復(fù)校時(shí)間間隔的長(zhǎng)短是由分析儀的使用情況、使用者、分析儀本身質(zhì)量等諸因素所決定的,因此送校單位可根據(jù)實(shí)際使用情況自主決定復(fù)校時(shí)間間隔,復(fù)校時(shí)間間隔建議不超過1年。JJF2089—20237附錄A1990年國(guó)際溫標(biāo)純水密度表g/mLt90/℃0.00.10.20.30.40.50.60.70.80.9150.9990990.9990840.9990690.9990530.9990380.9990220.9990060.998959160.9989430.9989260.9989100.9988930.9988760.9988600.9988430.998792170.9987740.9987570.9987390.9987220.9987040.9986860.9986680.998613180.9985950.9985760.9985570.9985390.9985200.9985010.9984820.998424190.9984040.9983850.9983650.9983450.9983250.9983050.9982850.998224200.9982030.9981820.9981620.9981410.9981200.9980990.9980770.998013210.9979910.9979700.9979480.9979260.9979040.9978820.9978590.997792220.9977690.9977470.9977240.9977010.9976780.9976550.9976310.997561230.9975370.9975130.9974900.9974660.9974420.9974170.9973930.997320240.9972950.9972700.9972460.9972210.9971950.9971700.9971450.997069250.9970430.9970180.9969920.9969660.9969400.9969140.9968880.996809260.9967820.9967550.9967290.9967020.9966750.9966480.9966210.996539270.9965110.9964840.9964560.9964280.9964010.9963730.9963440.996260280.9962310.9962030.9961740.9961460.9961170.9960880.9960590.996972290.9959430.9959130.9958840.9958540.9958250.9957950.9957650.995675300.9956450.9956150.9955840.9955540.9955230.9954930.9954620.995370310.9953390.9953070.9952760.9952450.9952140.9951820.9951510.995055320.9950240.9949920.9949600.9949270.9948950.9948630.9948310.994733330.9947000.9946670.9946350.9946020.9945690.9945350.9945020.994402340.9943690.9943350.9943010.9942670.9942340.9942000.9941660.994063350.9940290.9939940.9939600.9939250.9938910.9938560.9938210.993716JJF2089—20238B.2加液體積示值誤差和重復(fù)性(t=B.2加液體積示值誤差和重復(fù)性(t=℃,ρ=g/mL)校準(zhǔn)原始記錄格式儀器名稱環(huán)境溫度儀器型號(hào)環(huán)境濕度制造廠商校準(zhǔn)日期出廠編號(hào)證書編號(hào)校準(zhǔn)地點(diǎn)原始記錄號(hào)送檢單位名稱校準(zhǔn)依據(jù)送檢單位地址送檢單位聯(lián)系電話校準(zhǔn)人員核驗(yàn)人員計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器信息B.1外觀檢查12345620μL純水質(zhì)量/mg體積/μL平均體積/μL———加液體積示值誤差/%加液體積重復(fù)性/%200μL純水質(zhì)量/mg體積/μL平均體積/μL———加液體積示值誤差/%加液體積重復(fù)性/%JJF2089—20239B.3孵育溫度示值誤差溫度設(shè)定值/℃測(cè)量點(diǎn)測(cè)量值1/℃測(cè)量值2/℃測(cè)量值3/℃平均值/℃示值誤差/℃37.0B.4洗滌殘留m0/mgm1/mgρ/g·mL-1w/μLB.5吸光度示值穩(wěn)定性A起始A5minA10minrB.6吸光度示值誤差和吸光度線性波長(zhǎng)nm標(biāo)稱吸光度標(biāo)準(zhǔn)吸光度AiAΔA1234050.20.51.01.52.0JJF2089—202310(續(xù))波長(zhǎng)nm標(biāo)稱吸光度標(biāo)準(zhǔn)吸光度AiAΔA1234500.20.51.01.52.04920.20.51.01.52.06200.20.51.01.52.0450nm處吸光度線性:B.7吸光度重復(fù)性n123456ARAAiB.8吸光度通道差異123456789101112ABCDEJJF2089—202311(續(xù))123456789101112FGH吸光度通道差異δA=JJF2089—202312附錄C校準(zhǔn)證書內(nèi)頁格式校準(zhǔn)結(jié)果校準(zhǔn)項(xiàng)目校準(zhǔn)結(jié)果及不確定度加液體積示值誤差加液體積重復(fù)性孵育溫度示值誤差洗滌殘留吸光度示值穩(wěn)定性吸光度示值誤差吸光度重復(fù)性吸光度通道差異吸光度線性備注:JJF2089—202313附錄D吸光度示值誤差測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)定示例D.1測(cè)量方法采用分析儀測(cè)量光譜中性濾光片標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),并與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比較。D.2測(cè)量模型吸光度示值誤差可由公式(D.1)給出:ΔA=Ai-As=A-As(D.1)式中:ΔA—吸光度示值誤差,無量綱;Ai—第i次測(cè)量的吸光度值,無量綱; A—3次吸光度測(cè)量結(jié)果的平均值,無量綱;As—吸光度標(biāo)準(zhǔn)值,無量綱。D.3合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算公式依據(jù)u=Σc2(xi)u2(xi),則由公式(D.1)得:c(A)==1(D.2)c(As)==-1(D.3)故輸出量合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度的完整表達(dá)式應(yīng)為:u=u(A)2+u(As)2(D.4)uc=(D.5)D.4不確定度來源不確定度來源包括:a)吸光度測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度u1;b)示值穩(wěn)定性引入的不確定度u2;c)吸光度通道差異引入的不確定度u3;d)吸光度測(cè)量分辨力引入的不確定度u4;e)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度uAs;下面以一次分析儀檢定為例具體分析其測(cè)量不確定度。在檢定中吸光度標(biāo)稱值為0.2的光譜中性濾光片3次測(cè)量結(jié)果的分別為0.271、0.270、0.269;該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)為=2)。D.5.1測(cè)量結(jié)果平均值引入的不確定度uAD.5.1.1吸光度測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度u1選定一臺(tái)分析儀,對(duì)光譜中性濾光片標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)連續(xù)測(cè)量10次,得到一組測(cè)量值:JJF2089—2023140.004u3==230.271、0.269、0.269、0.270、0.271、0.269、0.271、0.270、0.271、0.004u3==23則單次測(cè)量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差s(Ai): s(Ai)=i-1x)2≈0.00094(D.6)實(shí)際檢定時(shí)在重復(fù)性條件下連續(xù)測(cè)量3次,