TNAIA 0258-2023 牛冠狀病毒病診斷與防控技術(shù)規(guī)程

ICSICS65.020.30ICSCCSA031

T/NAIA團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/NAIA0258-2023牛冠狀病毒病診斷與防控技術(shù)規(guī)程Technicalregulationsfordiagnosis,preventionandcontrolofBovinecoronavirusdisease2023-12-18發(fā)布 2023-12-31實(shí)施寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會(huì) 發(fā)布T/NAIA0258-2023T/NAIA0258-2023前言GB/T1.1-20201定起草。本文件由寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所、寧夏大學(xué)、寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院。尤建村、張永康、李生虎、于有利、張久盤、馬玉禮、郝萬軍、魏彥明。本文件為首次發(fā)布。牛冠狀病毒病診斷與防控技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了牛場牛冠狀病毒病診斷與防治技術(shù)的術(shù)語和定義、診斷、預(yù)防和治療。本文件適用于牛冠狀病毒病的防治。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T16568奶牛場衛(wèi)生規(guī)范NY/T5030無公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準(zhǔn)則NY5047無公害食品奶牛飼養(yǎng)獸醫(yī)防疫準(zhǔn)則NY/T5049無公害食品奶牛飼養(yǎng)管理準(zhǔn)則術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。牛冠狀病毒病Bovinecoronavirus是指由牛冠狀病毒引發(fā)犢牛以出血性腹瀉為主要癥狀的傳染病。診斷流行病學(xué)7～10臨床癥狀犢牛感染后發(fā)生腹瀉，發(fā)病初期出現(xiàn)帶血的黃色黏性糞便，后期發(fā)展為水瀉，有時(shí)出現(xiàn)脫水、虛弱、體溫低，少數(shù)犢牛出現(xiàn)發(fā)熱、臥地不起等癥狀，嚴(yán)重的犢牛會(huì)出現(xiàn)昏迷甚至死亡。成年牛常突然暴發(fā)，排出深褐色帶血稀糞，伴有產(chǎn)奶下降、沉郁及厭食等癥狀。病理變化爛 爛小腸腸壁變薄、透明，腸腔液體增多，嚴(yán)重者引起腹腔積水，胃內(nèi)有未消化的凝乳塊。感染的?？赡馨殡S呼吸道癥狀，表現(xiàn)為氣管黏膜充血、局限性肺炎等。實(shí)驗(yàn)室診斷樣品采集3mLPBS采樣管中；也可無菌采集地上剛排出采樣杯內(nèi)。樣品處理3mLPBS12000r/min4℃離心5min～8min，1g置于研缽，充分研磨后加5mLPBS，混勻，8000r/min45min，取上清備用。將上清于0.22μm濾器過濾，-80℃冰箱保存或直接接種細(xì)胞。分子診斷RNA提取5.2RNA書進(jìn)行。反轉(zhuǎn)錄將5.3.1中的基因組RNA利用反轉(zhuǎn)錄試劑進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄（見附錄表A.1,A.2）。RPA鑒定RPA方法進(jìn)行病原核酸檢測，BRV引物序列（A.3）RPA擴(kuò)增RPA（℃20min。RPA產(chǎn)物電泳1×TAE2%5μLDNA分子量標(biāo)準(zhǔn)5V/cm恒壓電泳，30min后采用凝膠成像系統(tǒng)判定核酸片144bp大小的條帶，且陰性對照不出現(xiàn)條帶（B.1）。確診出現(xiàn)4.1、4.2和4.3可判定為牛冠狀病毒病疑似病例。符合5.3.4可判定為牛冠狀病毒病。防控GB/T16568和NY/T5049的規(guī)定。加強(qiáng)產(chǎn)房消毒衛(wèi)生，產(chǎn)房需要保暖、寬敞、通風(fēng)、干燥，產(chǎn)犢過程中排出物及時(shí)清除，隨時(shí)消毒。在保證舍內(nèi)溫度的前提下，自然通風(fēng)，保證牛舍干燥、舒適、溫暖。避免應(yīng)激，消除可能降低機(jī)體抵抗力的各種應(yīng)激因素。自然哺乳母牛定期消毒乳頭，防止致病微生物傳染犢牛。分娩時(shí)，落地犢牛口鼻切勿接觸臟污。初生犢牛及時(shí)哺喂初乳。犢牛出生后1h內(nèi)及時(shí)吸吮初乳。哺乳犢牛給予開食料，補(bǔ)充微量元素，飼料配比適當(dāng)。NY5047的規(guī)定。無害化處理管理辦法》的規(guī)定處理。治療NY/T5030的規(guī)定。5%100mL～200mL。對持續(xù)腹瀉不止的犢牛，可應(yīng)用白頭翁散或明礬或次硝酸鉍，內(nèi)服。8%8%時(shí)，應(yīng)在給予補(bǔ)液的同時(shí)，皮下或靜脈注射含有碳酸鈉的林格氏液。爛 爛附錄A（規(guī)范性）反應(yīng)體系表A.1 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系試劑使用量RNase-freeddH2O10μL5×All-in-oneQrtsUPERMix4μLEnzymeMix1μL模板RNA5μL表A.2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)程序溫度時(shí)間50℃15min85℃5sec表A.3 輪狀病毒基礎(chǔ)RPA引物序列信息引物名稱引物序列（5'→3'）片段大?。╞p）參考序列BCoV-FGCTAAGGGGTACTGGTACAGACACAACAGA144KT318094.BCoV-RTCCGTCAATGTCGGTGCCATACTGGTCTTT表A.4 RPA反應(yīng)體系試劑體積μLBRV-F1（10μM）1.2μLBRV-R1（10μM）1.2μLRehydrationbuffer14.75μL模板1μLd