DB21-T 3074-2018花生抗網(wǎng)斑病鑒定技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.01

B15

備案號：62071-2019DB21

遼寧省地方標(biāo)準

DB21/T3074—2018

風(fēng)沙半干旱區(qū)玉米/花生防蝕增效

花生抗網(wǎng)斑病鑒定技術(shù)規(guī)程

Ruleforevaluationofresistancetowebblotchinpeanut

DB21/T3074—2018

花生抗網(wǎng)斑病鑒定技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準規(guī)定了花生抗網(wǎng)斑?。≒homaarachidicolaMarasasPauer&Boerema）鑒定技術(shù)的病原物分

離、接種體制備、室內(nèi)抗性鑒定、田間抗性鑒定、病情調(diào)查、抗性評價、鑒定記載方法等。

本標(biāo)準適用于花生（ArachishypogaeaL.）品種及種質(zhì)資源對花生網(wǎng)斑病抗性的室內(nèi)、田間鑒定及

評價。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

NY/T2391農(nóng)作物品種區(qū)域試驗與鑒定規(guī)程花生

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3試劑、材料與儀器設(shè)備

本標(biāo)準所用試劑在未加說明時均采用分析純試劑。實驗室用水應(yīng)符合GB/T6682中規(guī)定的三級水要

求。

3.1PDA培養(yǎng)基

稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切碎，加入1000mL水，煮沸20min—30min，紗布過濾，補水至1000mL，

再加入18g瓊脂和18g葡萄糖，攪拌均勻，高壓滅菌（121℃，20min）。

3.2OA培養(yǎng)基

稱取燕麥粉15g，加入水1000mL，煮沸30min，加入瓊脂10g，pH自然，高壓滅菌（121℃，20min）。

3.3恒溫培養(yǎng)箱：（28+2）℃。

3.4顯微鏡：物鏡頭10倍-100倍。

3.5電子天平：感量0.01g。

3.6超凈工作臺。

2

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3.7高壓滅菌器。

3.8冷藏箱（-4℃）。

3.9低溫冰箱：最低溫度-40℃

4病原物分離與接種體制備

4.1病原物分離

從具有典型癥狀的花生葉片病斑處挑取花生網(wǎng)斑病菌分生孢子器置于無菌水中震蕩3min，將分生孢

子懸浮液涂布于水瓊脂平板上，用接種針挑取單孢置于馬鈴薯葡萄糖（PDA）培養(yǎng)基上，26℃培養(yǎng)箱中

暗培養(yǎng)，經(jīng)觀察菌落和孢子形態(tài)結(jié)合ITS序列比對，鑒定為花生莖點霉菌(P.arachidicolaMarasas.

Pauer&Boerema)，致病性測定后確定為供接種用菌株。于4℃條件下保存，或20%甘油中-40℃條件下

長期保存，備用。

4.2接種體制備

接種前15d~30d，將病菌接種于馬鈴薯葡萄糖（PDA）培養(yǎng)基平板上25℃恒溫培養(yǎng)5d，利用5mm打

孔器從菌落邊緣制取菌餅，置于燕麥瓊脂（OA）培養(yǎng)基平板上25℃、近紫外燈照射（波長340~380nm，

8W×3）培養(yǎng)10d~20d。用無菌解剖刀于超凈工作臺中刮取病菌的分生孢子器，置于裝有少量無菌水的

50mL無菌燒杯中，靜置20min，使分生孢子器吸水脹破，釋放分生孢子，配制成濃度為1×105個/mL孢

子懸浮液（如未立即接種使用，可置4℃條件下保存，保存時間3d以內(nèi)）。接種前每毫升孢子懸浮液中

加入Tween201μL以增加病菌孢子與葉片的粘附性，加入0.05mg蔗糖提高孢子萌發(fā)率。

5室內(nèi)抗性鑒定

5.1室內(nèi)離體葉片準備

在長寬高為10cm×10cm×8cm的花盆中播種籽粒飽滿的花生種子3粒，定期澆水，于每天26℃、12h

光暗交替的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至下針期。剪取底部向上的第3、4片復(fù)葉，用脫脂棉包裹葉柄插入經(jīng)人工打孔

后的接種杯（直徑4cm，高4.8cm）中，杯內(nèi)放入30mL清水。

5.2接種

用8號水粉筆沾取孢子懸浮液均勻涂抹于離體葉片，直至整片復(fù)葉涂滿孢子懸浮液，用6號自封袋

（120mm×170mm）保濕。

5.3接種后管理

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將接種后的離體葉片放置于每天26℃、12h光暗交替的植物培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5.4病情調(diào)查

接種后25d~30d，進行病情調(diào)查，同批次的材料應(yīng)在24h內(nèi)完成。

5.5調(diào)查方法

目測每份鑒定材料發(fā)病狀況，根據(jù)病害癥狀描述，調(diào)查記載病情級別。

5.6病情分級

病情分級及其對應(yīng)的癥狀描述見表1。

表1花生品種抗網(wǎng)斑病鑒定病情級別劃分標(biāo)準

病情級別病害癥狀描述

0整片復(fù)葉無病癥狀；

1病斑面積＜10%；

310%≤病斑面積＜25%；

525%≤病斑面積＜50%；

750≤病斑面積＜75%；

975%≤病斑面積。

6田間抗性鑒定

6.1抗性鑒定圃設(shè)置

抗性鑒定圃設(shè)置在具備良好的自然發(fā)病環(huán)境條件、灌溉良好、地勢平坦、地力均勻的地塊。

6.2小區(qū)設(shè)計

鑒定材料隨機排列。小區(qū)行長5m，4行區(qū)，行距0.5m或0.6m，小區(qū)保苗80穴左右。每20份鑒定材料

各設(shè)1組抗、感病對照，抗病對照品種為魯花11，感病對照品種為四粒紅。

6.3種植要求

鑒定材料播種時間、栽培管理與大田生產(chǎn)相同，整個生長季不施用殺菌劑。

6.4接種

6.4.1接種期

接種期為花針期。

6.4.2接種方法

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每個品種隨機連續(xù)選擇10株，用8號水粉筆沾取孢子懸浮液均勻涂布主莖中下部4片復(fù)葉，用6

號自封袋（120mm×170mm）保濕。

6.5接種后管理

在接種期如遇干旱天氣，應(yīng)及時進行田間澆灌，確保病害發(fā)生。

6.6病情調(diào)查

接種后15d~20d，進行病情調(diào)查，同批次的材料應(yīng)在1d~2d內(nèi)完成。

6.7調(diào)查方法

同5.5

6.8病情分級

同5.6

7抗性評價

7.1鑒定有效性判別

當(dāng)感病對照材料達到其相應(yīng)感病程度（9級），該批次材料抗網(wǎng)斑病鑒定視為有效。

7.2抗性評價標(biāo)準

依據(jù)鑒定材料發(fā)病程度（病情級別）確定其抗性水平，劃分標(biāo)準見表2。

表2花生抗網(wǎng)斑病評價標(biāo)準

病情級別抗性評價

0免疫（IM）

1高抗（HR）

3抗（R）

5中抗（MR）

7感（S）

9高感（HS）

7.3重復(fù)鑒定

初次鑒定時表現(xiàn)為免疫、高抗和抗病的花生品種應(yīng)在次年進行重復(fù)鑒定。

7.4抗性評價

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對初次鑒定結(jié)果和重復(fù)鑒定結(jié)果進行比較，以記載的最高病情級別為最終鑒定結(jié)果，并依此結(jié)果對

鑒定材料進行抗性評價

8鑒定記載表格

花生抗網(wǎng)斑病鑒定結(jié)果記載見表3。

表3年花生抗網(wǎng)斑病鑒定結(jié)果記載表

編號品種名稱病情級別抗性評價

注1:鑒定地點

注2:接種病原菌分離物編號

注3:接種日期調(diào)查日期

鑒定技術(shù)負責(zé)人（簽字）：

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附錄A

（資料性附錄）

花生網(wǎng)斑病菌

A.1學(xué)名和形態(tài)描述

A.1.1學(xué)名

花生網(wǎng)斑病致病菌為花生莖點霉(PhomaarachidicolaMarasasPauer&Boerema)，半知菌門

（Deuteromycotina），腔孢綱(CoeZomycetes），球殼孢目（Sphacropsidales），莖點霉屬（Phoma）。

A.1.2形態(tài)描述

花生網(wǎng)斑病菌絲體在燕麥瓊脂培養(yǎng)基（OA）上菌落呈白色至灰白色，圓形，粘性較差，菌絲體白色

透明，有隔，分生孢子器褐色，圓形或不規(guī)則形，有孔口，其大小為175.5μm×96.85μm。分生孢子橢

圓形，無色單孢，通常中間有隔膜，頂端有油球，其大小為5.89μm×3.41μm。厚垣孢子單生或串生，

外壁和兩孢子夾壁變厚，暗褐色，類球形或不規(guī)則形，單孢被1個或幾個橫隔分開，分隔處縊縮9-12μm

×8-17μm。

A.1.3病菌圖片

莖點霉分生孢子器及分生孢子花生網(wǎng)斑病菌菌落形態(tài)

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附錄B

(資料性附錄)

花生網(wǎng)斑病癥狀

B.1病名和癥狀描述

B.1.1病名

花生網(wǎng)斑病peanutwebblotch

B.1.2癥狀描述

花生網(wǎng)斑病是花生生產(chǎn)上一種常見的真菌病害,主要為害葉片，也可為害莖和葉柄，其癥狀隨發(fā)病

條件的不同有所差異。病斑先出現(xiàn)在植株基部的葉片上，侵染初期菌絲體以菌索狀于葉片表面蠟質(zhì)層下，

呈白網(wǎng)狀，隨后從侵染點沿葉脈以放射方式向外擴展，呈星芒狀粉點，隨病斑擴大，由白、灰白、褐至

黑褐色，形成邊緣不清網(wǎng)狀斑。當(dāng)濕度大、溫度高時，便出現(xiàn)直徑1~1.5cm的大塊斑點。病斑部背部初

期和中期不表現(xiàn)癥狀，后期出現(xiàn)褐色斑痕，表皮下有黑色小突起。生產(chǎn)上該病常與褐斑病、黑斑病混合

發(fā)生，造成嚴重落葉。

B.1.3癥狀圖片