第四章 基因重組育種

1第四章基因重組育種2定義：由于不同DNA鏈的斷裂和連接而產(chǎn)生DNA片段的交換和重新組合，形成新的DNA分子，進而形成新遺傳個體的方式稱為基因重組(generecombination)。作用：基因重組可使生物體在未發(fā)生突變的情況下，也能產(chǎn)生新遺傳型的個體。3重組與雜交的關(guān)系重組是分子水平上的一個概念，可以理解成是遺傳物質(zhì)分子水平上的雜交而一般所說的雜交（hybridization）則是細胞水平上的一個概念。雜交中必然包含著重組，而重組則不限于雜交這一形式。4原核微生物轉(zhuǎn)化Transformation

轉(zhuǎn)導(dǎo)Transduction

接合Conjugation真核微生物有性生殖Sexualreproduction

準性生殖Parasexualreproduction體外基因重組——基因工程體內(nèi)基因重組的方式5基因重組是基因重組育種的理論基礎(chǔ)基因重組育種的優(yōu)點：①由于選用了已知性狀的供體菌和受體菌作為親本，因此，不論在方向性還是自覺性方面，均比誘變育種前進了一大步。②往往還可以消除某一菌株在經(jīng)過長期誘變處理后所出現(xiàn)的產(chǎn)量上升緩慢的現(xiàn)象，因此，它是一種重要的育種手段。6菌株甲

生長快、產(chǎn)量低基因重組新菌株生長快、產(chǎn)量高菌株乙

生長慢、產(chǎn)量高7基因重組育種的缺點：

由于方法較復(fù)雜，工作進展較慢，還很難像誘變育種技術(shù)那樣得到普遍的推廣和使用，尤其在原核生物的領(lǐng)域中，應(yīng)用轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或接合等重組技術(shù)來培育可應(yīng)用于生產(chǎn)實踐上的高產(chǎn)菌株的例子還不多見。到了70年代后期，由于原生質(zhì)體融合技術(shù)獲得巨大的成功后，才使重組育種技術(shù)獲得了飛速的發(fā)展。8第一節(jié)轉(zhuǎn)化Transformation受體菌直接攝取來自供體菌的游離DNA片段，并將其整合到自己的基因組中，從而獲得部分新的遺傳性狀的基因轉(zhuǎn)移過程，稱為轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化后的受體菌稱為轉(zhuǎn)化子Transformant。能進行自然轉(zhuǎn)化的微生物Bacillus,Streptococcus,Neisseria,Haemophilus9有關(guān)概念受體菌：recipient/receptor，轉(zhuǎn)化基因的接受者供體菌：donor，轉(zhuǎn)化基因的提供者轉(zhuǎn)化因子：來自供體菌的DNA片段轉(zhuǎn)化子：transformant，將轉(zhuǎn)化基因重組進入自身染色體組的重組子10細菌的轉(zhuǎn)化過程供體菌轉(zhuǎn)化因子受體菌轉(zhuǎn)化子11一、轉(zhuǎn)化因子Transformationfactor1、轉(zhuǎn)化因子的化學本質(zhì)——DNAStreptococcuspneumoniaGriffith.F，192812132、轉(zhuǎn)化因子的分子結(jié)構(gòu)

ssDNA?dsDNA?14二、感受態(tài)Competence1、感受態(tài)：細菌能接受轉(zhuǎn)化作用的生理狀態(tài)152、感受態(tài)通常取決于細菌的遺傳特性和生長條件生長階段：肺炎鏈球菌、枯草桿菌：對數(shù)后期出現(xiàn)頻率：枯草桿菌：10~20%

肺炎鏈球菌：幾乎100%持續(xù)時間：枯草桿菌：數(shù)小時肺炎鏈球菌：約40分鐘16肺炎鏈球菌對于鏈霉素抗性的轉(zhuǎn)化的感受態(tài)曲線m173、感受態(tài)可誘導(dǎo)產(chǎn)生從營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)液中轉(zhuǎn)移到營養(yǎng)貧乏的培養(yǎng)液中抑制核酸合成但不抑制蛋白質(zhì)合成的處理Ca2+處理加入感受態(tài)因子感受態(tài)因子：伴隨感受態(tài)而出現(xiàn)的位于細胞表面的蛋白質(zhì)分子18194、感受態(tài)細胞的特點細胞表面的正電荷增加細胞壁的通透性增加細胞表面的DNA分解能力增加20三、（自然）轉(zhuǎn)化的過程1、轉(zhuǎn)化因子的吸附adsorption吸附位點吸附的專一性吸附較大的轉(zhuǎn)化因子：只有分子量較大（>3×105d）的雙鏈DNA才能被吸附吸附不受感受態(tài)的限制212、轉(zhuǎn)化因子的吸收absorption核酸內(nèi)切酶將吸附的DNA切成約107d的片段核酸酶切除一個單鏈剩余的一個單鏈進入細胞223、整合integration轉(zhuǎn)化因子的單鏈DNA和受體染色體的某一部分形成供體-受體復(fù)合物供體DNA和受體DNA形成共價鍵，同時被替代的一小段DNA為酶所分解作用酶：核酸酶

DNA多聚酶

DNA連接酶23外源單鏈DNA通過重組整合到受體染色體24供體-受體復(fù)合物瞬變異質(zhì)雙鏈重組DNA分子254、形成轉(zhuǎn)化子transformant

受體細胞經(jīng)復(fù)制分裂后出現(xiàn)了供體性狀的子代5、影響轉(zhuǎn)化效率的因素受體細胞的感受態(tài)受體細胞的限制酶系統(tǒng)和其它核酸酶受體和供體染色體的同源性26自然轉(zhuǎn)化的普遍性已發(fā)現(xiàn)能發(fā)生轉(zhuǎn)化作用的菌屬主要有：◆細菌

Streptococcuspneumoniae、Haemophilus、Bacillus、Neisseria、Rhizobium、Staphylococcus、Pseudomonas、Xanthomonas◆在若干放線菌和藍細菌以及Saccharomycescerevisiae、Neurosporacrassa、Aspergillusniger中，也有轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。27腸桿菌科的一些細菌很難進行轉(zhuǎn)化，主要原因一方面由于外來DNA難以摻入到細胞中，另一方面在受體細胞內(nèi)常存在可降解線形DNA的核酸酶。如果用CaCl2處理E.coli細胞，就可以使之發(fā)生低頻率的轉(zhuǎn)化。另外，可利用霉菌的原生質(zhì)體進行轉(zhuǎn)化。兩個菌種或菌株之間能否發(fā)生轉(zhuǎn)化，與它們在進化過程中的親緣關(guān)系有著密切的關(guān)系。但即使在轉(zhuǎn)化率極高的菌種中，其不同菌株間也不一定都能發(fā)生轉(zhuǎn)化。28四、人工轉(zhuǎn)化通過人為誘導(dǎo)的方法，使細胞具有攝取DNA的能力，或人工地將DNA導(dǎo)入細胞內(nèi)1、CaCl2處理：E.coli2、Li+處理：Saccharomycescerevisiae3、電穿孔法electroporation：用高壓脈沖電流擊破細胞膜，或擊成小孔，使各種大分子（包括DNA）能通過這些小孔進入細胞4、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化29五、轉(zhuǎn)染Transfection1、定義：用除去蛋白質(zhì)外殼的病毒DNA或RNA通過轉(zhuǎn)化過程進入受體細胞，使后者得以感染，進而產(chǎn)生正常的病毒的后代，這種現(xiàn)象稱為轉(zhuǎn)染。2、與轉(zhuǎn)化的區(qū)別病毒或噬菌體并非遺傳基因的供體菌；中間不發(fā)生任何遺傳因子的交換或整合；最后不產(chǎn)生具有雜種性質(zhì)的轉(zhuǎn)化子。30六、大腸桿菌的轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化因子的提取：染色體DNA或質(zhì)粒DNA冷CaCl2處理受體，人工誘發(fā)感受態(tài)產(chǎn)生冰浴轉(zhuǎn)化30min熱激處理42℃30s冰浴培養(yǎng)2min加LB培養(yǎng)基，37℃振蕩培養(yǎng)1h涂布選擇性平板，37℃培養(yǎng)過夜，得轉(zhuǎn)化子菌落31七、可轉(zhuǎn)化的性狀莢膜多糖的合成專一性酶的合成專一性蛋白質(zhì)的合成抗藥性32轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體作媒介，將供體細胞的DNA片段攜帶到受體細胞中，通過交換與整合，使后者獲得前者部分遺傳性狀的現(xiàn)象稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)。轉(zhuǎn)導(dǎo)子：獲得新遺傳性狀的受體細胞稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)子transductant第二節(jié)轉(zhuǎn)導(dǎo)

Transduction33[-][-][-]Trp-his+Trp+his-Trp+his+混合培養(yǎng)AB轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)J.Lederberg等（1952）在Salmonellatyphimurium（鼠傷寒沙門氏菌）中發(fā)現(xiàn)34參與轉(zhuǎn)導(dǎo)的成員：供體細菌，受體細菌，噬菌體35轉(zhuǎn)導(dǎo)的過程供體菌噬菌體轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體感染釋放感染受體菌細胞分裂轉(zhuǎn)導(dǎo)子36完全普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)導(dǎo)局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)流產(chǎn)普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)導(dǎo)的種類37一、普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)generalizedtransduction

通過完全缺陷噬菌體對供體菌任何DNA小片段的“誤包”而實現(xiàn)其遺傳性狀傳遞至受體菌的轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象，稱為普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)。1、噬菌體

烈性噬菌體或經(jīng)過改造的溫和性噬菌體，如SalmonellatyphimuriumP22,

E.coliP1，Bacillussubtilis的PBS1和SP10等噬菌體382、轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體定義：能進行性狀轉(zhuǎn)導(dǎo)的噬菌體稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體transducingphage?？山M入寄主細菌的染色體片斷，由感染而傳給受體菌。形成機制：選擇性包裹模型形成頻率：10-6

特性：完全缺陷噬菌體39噬菌體裂解供體菌時可能有三種情況：

1）包入的完全是噬菌體的DNA（正常噬菌體）

2）包入的完全是細菌DNA（完全缺陷噬菌體）

3）部分帶有噬菌體基因的DNA(部分缺陷噬菌體)

轉(zhuǎn)導(dǎo)分別是由后兩種噬菌體參與進行的，即后兩種噬菌體為轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體。40413、轉(zhuǎn)導(dǎo)子的形成transductant（1）完全轉(zhuǎn)導(dǎo)Completetransduction與完全轉(zhuǎn)導(dǎo)子感染時MOI<1（MOI,multiplicityofinfection感染復(fù)數(shù)，是指感染時噬菌體與細菌的數(shù)量比值，也就是平均每個細菌感染噬菌體的數(shù)量）通過DNA雙交換(重組）而實現(xiàn)完全轉(zhuǎn)導(dǎo)完全轉(zhuǎn)導(dǎo)子菌落大小正常完全轉(zhuǎn)導(dǎo)子約占總轉(zhuǎn)導(dǎo)子的10％4243第一次交換第二次交換交換完成，外源DNA摻入染色體組中一個穩(wěn)定的轉(zhuǎn)導(dǎo)子的形成44（2）流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)Abortivetransduction與流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)子

abortive:partiallyorimperfectlydeveloped經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)而獲得了供體菌DNA片段的受體菌，如果外源DNA在其內(nèi)既不進行交換、整合和復(fù)制，也不迅速消失，而僅進行轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯和性狀表達，這種現(xiàn)象就稱流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)。流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)子只能形成微小菌落流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)子約占總轉(zhuǎn)導(dǎo)子的90％4546二、局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)specializedtransduction定義：通過部分缺陷的溫和噬菌體把供體菌的少數(shù)特定基因攜帶到受體菌中，并獲得表達的轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象稱為局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)。47特點：噬菌體對供體菌和受體菌都是溫和噬菌體；只能轉(zhuǎn)導(dǎo)供體菌的個別特定基因（一般為噬菌體整合位點兩側(cè)的基因）；該特定基因由部分缺陷的噬菌體攜帶；缺陷噬菌體是由于其在形成過程中所發(fā)生的低頻率（約10-5）“誤切”，或由于雙重溶源菌的裂解而形成（約形成50%缺陷噬菌體）分類：低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)與高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)481、低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)LFT，lowfrequencytransduction

（1）轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體的形成形成機制：Campbell模型（不正確切離）形成頻率：10-4~10-6

轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體：缺陷噬菌體ldgal或ldbioLFT（低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)）裂解物：由正常l和很低比例缺陷噬菌體ldgal或ldbio組成的裂解物4950缺陷噬菌體(defectivephage)

：具有噬菌體的正常形態(tài)，但不能引起寄主細胞裂解性感染的一類溫和噬菌體的突變體，它們沒有正常λ噬菌體所具有的使宿主發(fā)生溶源化的能力，當它感染宿主細胞并整合在宿主的核基因組上時，不能形成溶源菌，因而對λ噬菌體不具有免疫性。51（2）低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)條件：LFT裂解物以低MOI感染受體菌轉(zhuǎn)導(dǎo)子：形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)子或不穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)子1）穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)子ldgalDNA的gal基因與受體gal-基因之間雙交換，得到穩(wěn)定的gal+轉(zhuǎn)導(dǎo)子穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)子約占轉(zhuǎn)導(dǎo)子的1/352532）不穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)子ldgalDNA通過att位置的單交換整合入染色體DNA，形成一個帶缺陷l原噬菌體的gal+/gal部分合子（不穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)子）。整合的ldgalDNA偶然會從受體染色體上逸出，從而產(chǎn)生gal-分離子不穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)子約占轉(zhuǎn)導(dǎo)子的2/35455E.coliK12gal-/

dgal+（LFT轉(zhuǎn)導(dǎo)子）低MOIU.V.（LFT裂解物）E.coliK12(

)gal+(供體菌)(大量)+dgal+（10-5）E.coliK12gal-(受體菌)56（1）雙重溶源菌（doublelysogen）：核染色體組上同時整合有λ與λdgal的溶源性細菌形成：LFT裂解物以高MOI感染E.coligal–菌株時，凡是感染有λdgal噬菌體任一細胞，幾乎都同時感染有正常的λ噬菌體，二者都整合到細菌染色體組上。

2、高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)

HFT，highfrequencytransduction57（2）助體（或輔助）噬菌體（helperphage）：在雙重溶源菌中的正常λ噬菌體。當雙重溶源菌被紫外線等誘導(dǎo)時，其中的正常λ噬菌體的基因可補償λdgal缺失的部分基因功能，因而兩種噬菌體就同時獲得復(fù)制的機會。58（3）HFT（高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)）裂解物雙重溶源菌的裂解物中含有等量的λ和λdgal粒子，稱為HFT（高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)）裂解物。（4）高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)用HFT裂解物以低MOI感染另一個E.coligal–受體菌，就可以高頻率地把它轉(zhuǎn)化為能發(fā)酵半乳糖的E.coligal+轉(zhuǎn)導(dǎo)子，是為高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)59E.coliK12gal-/

dgal+/

（雙重溶源菌）高MOIU.V.（LFT裂解物）E.coliK12(

)gal+(供體菌)(大量)+dgal+（10-5）E.coliK12gal-(受體菌)(50%)+dgal+（50%）E.coliK12Sgal-(受體菌)（HFT轉(zhuǎn)導(dǎo)子）E.coliK12Sgal-/

dgal+U.V.低MOI60概念：當溫和噬菌體感染宿主而使其發(fā)生溶源化時，因噬菌體的基因整合到宿主的核基因組上，而使后者獲得了除免疫性以外的新性狀的現(xiàn)象，稱為溶源轉(zhuǎn)變。性質(zhì)：表面上與轉(zhuǎn)導(dǎo)相似，而本質(zhì)上不同于轉(zhuǎn)導(dǎo)。三、溶源轉(zhuǎn)變lysogenicconversion

61區(qū)別：當宿主喪失其原噬菌體時，通過溶源轉(zhuǎn)變而獲得的新性狀也隨之消失溫和噬菌體不攜帶來自供體菌的外源基因，是噬菌體自身基因使宿主獲得新性狀溫和噬菌體是完整的，不是缺陷的獲得新性狀的是溶源化的宿主細胞，不是轉(zhuǎn)導(dǎo)子62Corynebacteriumdiphtheriae（白喉棒桿菌）：白喉毒素/

溫和噬菌體Clostridiumbotulinum（肉毒梭菌）：C型或D型肉毒毒素Salmonellaanatum（鴨沙門氏菌）：細胞表面多糖/E15噬菌體Streptomyceserythreus（紅霉素鏈霉菌）：紅霉素合成和氣生菌絲形成/P4溫和噬菌體溶源轉(zhuǎn)變典型實例63比較項目普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)導(dǎo)的基因供體染色體或染色體外的任何基因供體染色體上與原噬菌體緊密連鎖的少數(shù)幾個個別基因噬菌體寄生的位置不結(jié)合在寄主染色體特定位置上結(jié)合在寄主染色體特定位置上獲得轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體的方法通過敏感菌的裂解或溶源菌的誘導(dǎo)紫外線誘導(dǎo)溶源菌裂解轉(zhuǎn)導(dǎo)子非溶源性1/10穩(wěn)定的完全轉(zhuǎn)導(dǎo)子9/10不穩(wěn)定流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)子缺陷溶源性1/3穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)子2/3不穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)子普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)和局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)的比較64Conjugationisthemechanismbywhichgeneticmaterialistransferredbetweentwocellsbyplasmids.供體與受體細胞直接接觸，借性纖毛傳遞DNA，在受體細胞中發(fā)生交換、整合，使之獲得供體菌的遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為接合。通過接合而獲得新性狀的受體細胞就是接合子（conjugant）第三節(jié)接合Conjugation65可能：①細菌接合以后發(fā)生基因重組；②發(fā)生了轉(zhuǎn)化；③通過交換了養(yǎng)料而互養(yǎng)；④回復(fù)突變；⑤接合后形成異核體1:1混合物A+B+原養(yǎng)型菌落一、細菌接合現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)和證實1、發(fā)現(xiàn)：1946，J.Lederberg和E.T.Tatum對象：E.coliK12662、證實(1)轉(zhuǎn)化作用的排除

1950，Davis的

U型管試驗

67(2)互養(yǎng)的排除：噴噬菌體殺死敏感型菌株68(3)回復(fù)突變的排除69(4)異核體的排除70(5)基因重組的證實7172二、F因子1、性因子的發(fā)現(xiàn)1952，W.Hayes73說明：遺傳物質(zhì)單方向傳遞A→B在MM+str上：A-strs×B-strr,獲重組菌落

A-strr×B-strs,無重組菌落雄性：供體(donor),提供DNA雌性：受體(recipient)，接受DNA在MM上：A-strs×B-strr,獲重組菌落

A-strr×B-strs,獲重組菌落74cccDNA(covalentlyclosedcircular)，95kb，1~2個/cell2、F因子（致育因子fertilityfactor）753、F因子的特性①F因子可以轉(zhuǎn)移；②F因子可自發(fā)失去；③F因子可經(jīng)吖啶橙等處理而失去；④F因子一旦消失不能再現(xiàn)，除非與另外的F+細胞接觸而獲得；⑤F因子可自體復(fù)制

4、F因子的存在狀態(tài)自主態(tài)：cccDNA,游離于細胞質(zhì)中整合態(tài)：整合在染色體DNA上76三、F-

、F+、Hfr菌株1、F+菌株：細胞內(nèi)有自主態(tài)F因子細胞表面具有性纖毛（F-pilus）77含有整合態(tài)F因子，有性纖毛3、Hfr（高頻重組，highfrequencyrecombination）菌株2、F-菌株：不含有F因子，也沒有性纖毛78四、細菌接合作用1、F+×F-結(jié)果：F-轉(zhuǎn)變?yōu)镕+，兩個細胞都為F+798081822、Hfr×F-（1）HfrDNA的轉(zhuǎn)移83（2）形成部分雜合子84形成lac+ade+重組體形成lac-ade+重組體Hfr×F-結(jié)果：受體菌獲得供體菌染色體基因，通過重組形成重組體——接合子（3）通過雙交換形成重組體853、F+×F+，Hfr×Hfr

由于存在于細胞表面的由tra基因編碼的蛋白質(zhì)賦予細胞的表面排異(surfaceexclusion)作用，使F+×F+、Hfr×Ffr不能雜交86相同點

含有F因子，都具有性纖毛，都具有接合作用不同點Hfr細菌F+

細菌對于吖啶橙處理穩(wěn)定F因子易失去傳遞供體染色體基因高頻(10-3~10-4)低頻(10-6~10-7)F因子本身轉(zhuǎn)移基本不能頻率70%以上F因子復(fù)制隨細菌染色體復(fù)制獨立復(fù)制4、F+與Hfr菌株的異同點87五、中斷雜交試驗與染色體圖88原理：接合試驗的DNA轉(zhuǎn)移過程存在著嚴格的順序性，在接合進行中采用定時人為中斷的方法，可以獲得呈現(xiàn)不同數(shù)量Hfr性狀的F–接合子，據(jù)此，可以選定幾種有特定整合位點的Hfr菌株，使之與F–菌株進行接合，并在不同時間使其中斷，最后，根據(jù)F–中出現(xiàn)Hfr菌株中各種性狀的時間順序（分鐘），可以繪出較為完整的環(huán)狀染色體圖（chromosomemap）。891、中斷雜交實驗

1956，Wollman和JacobHfr:thr+leu+azisTonslac+gal+strsF-:thr-leu-azirTonrlac-gal-strr選擇標記：thr+leu+反選擇標記：strr非選擇標記：azisTonslac+gal+①選擇培養(yǎng)：MM+str，選擇thr+leu+strr

重組體②單獨分析：azisTonslac+gal+性狀

90方法：（1）雜交：Hfr×F-

在CM中雜交（2）中斷：定時取樣，通過劇烈攪拌而中斷雜交（3）選擇：洗滌后涂布MM+str選擇性培養(yǎng)基上，長出thr+leu+strr重組體（4）分析：用不同的選擇性培養(yǎng)基分析azisTonslac+gal+等基因的重組情況。9192到1983年E.coli染色體上已定位1027個基因2、連鎖分析93六、F因子轉(zhuǎn)導(dǎo)1、F’因子細胞中含有游離的、帶小段染色體基因的環(huán)狀F因子，可與F–

菌株接合，使其成為F’菌株。表示：F-lac，F(xiàn)-gal，F(xiàn)-pro…942、F’因子的形成由