核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)同科生物培訓(xùn)核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)主要包括：1.環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(Loop-mediatedisothermalamplification，LAMP)

2.依賴核酸序列的擴(kuò)增(Nucleicacidsequence-basedamplification，NASBA)

3.滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)(Rollingcircleamplification，RCA)

4.單引物等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Singleprimerisothermalamplification，SPIA)

5.依賴解旋酶DNA等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Helicase-dependentisothermalDNAamplification，HDA)

6.重組酶聚合酶擴(kuò)增(RecombinasePolymeraseAmplification，RPA)

7.鏈替代擴(kuò)增(Stranddisplacementamplification，SDA)

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(Loop-mediatedisothermalamplification，LAMP)

原理：基于靶基因3'和5'端的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)3對(duì)特異性引物，包括1對(duì)外引物、1對(duì)環(huán)狀引物和1對(duì)內(nèi)引物，3種特異引物依靠鏈置換BstDNA聚合酶，使得鏈置換DNA合成不停地自我循環(huán)，從而實(shí)現(xiàn)快速擴(kuò)增。反應(yīng)1h后可根據(jù)擴(kuò)增副產(chǎn)物焦磷酸鎂沉淀形成的濁度或者熒光染料進(jìn)行判斷擴(kuò)增情況。此反應(yīng)先形成啞鈴狀模板，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段，再進(jìn)行伸長(zhǎng)、循環(huán)擴(kuò)增，共3個(gè)階段。關(guān)鍵酶：鏈置換型DNA聚合酶擴(kuò)增對(duì)象為雙鏈DNA時(shí)，同時(shí)一條鏈解離的同時(shí)進(jìn)行鏈延長(zhǎng)LAMP法的引物設(shè)計(jì)LAMP法擴(kuò)增所需要試劑：LAMP方法簡(jiǎn)本操作步驟依賴核酸序列的擴(kuò)增(Nucleicacidsequence-basedamplification，NASBA)

原理：它是一項(xiàng)以核酸序列中RNA為模板，由兩個(gè)引物介導(dǎo)的、連續(xù)均一的特異性體外等溫?cái)U(kuò)增核苷酸序列的酶促過程。整個(gè)反應(yīng)由非循環(huán)相和循環(huán)相組成:首先進(jìn)行非循環(huán)相，在AMV逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，引物I與模板RNA退火后合成cDNA，形成RNA/DNA雜合體，隨即RNaseH降解RNA，引物Ⅱ與cDNA退火，合成第二條DNA互補(bǔ)鏈。形成的DNA雙鏈由T7RNA聚合酶識(shí)別啟動(dòng)子序列，催化合成RNA，進(jìn)入循環(huán)相，對(duì)模板進(jìn)行大量擴(kuò)增。

滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)(Rollingcircleamplification，RCA)原理：以環(huán)狀DNA為模板，通過一個(gè)短的DNA引物（與部分環(huán)狀模板互補(bǔ)），在phi29DNA聚合酶催化下將dNTPs轉(zhuǎn)變成單鏈DNA，此單鏈DNA包含成百上千個(gè)重復(fù)的模板互補(bǔ)片段。這種方法不僅可以直接擴(kuò)增DNA和RNA，還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)靶核酸的信號(hào)放大，靈敏度達(dá)到一個(gè)拷貝的核酸分子，因此在核酸檢測(cè)中具有很大的應(yīng)用價(jià)值和潛力。因其高靈敏度、高特異性和可操作性，RCA技術(shù)在基礎(chǔ)研究、實(shí)際檢測(cè)、醫(yī)療診斷及納米材料等方面都有很好的應(yīng)用，結(jié)合細(xì)胞原位檢測(cè)