高效液相色譜法測定汽水中的苯甲酸

林薇薇《衛(wèi)生化學(xué)》實(shí)驗(yàn)中山大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院高效液相色譜法測定汽水中的苯甲酸食品添加劑——苯甲酸食品添加劑是指為改善食品色、香、味以及為防腐和加工工藝的需要而參加到食品中的化學(xué)合成物質(zhì)或天然物質(zhì)苯甲酸是我國目前最常用的食品防腐劑，主要作用是防止由微生物活動而引起的食品變質(zhì)化學(xué)方程式C6H5COOH溶解性：微溶于水，乙醇，乙醚酸性：弱酸俗名：

安息香酸

食品添加劑——苯甲酸中國〔食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》〔GB2760－1996〕碳酸飲料，最大使用量為0.2g/kg；低鹽醬菜、醬類、蜜餞，0.5g/kg；葡萄酒、果酒、軟糖，0.8g/kg；苯甲酸和苯甲酸鈉同時使用時，以苯甲酸計(jì)不得超過最大使用量中國日本美國歐盟調(diào)味糖漿1.0g/kg0.6g/kg500mg/kg500mg/kg醬油1.0g/kg0.6g/kg無酒精飲料1.0g/kg0.6g/kg150mg/kg150mg/kgHPLC分析模式選擇樣品種類模式固定相流動相Neutrals中性WeakAcids弱酸WeakBases弱堿ReversedPhase反相C18,C8,C4cyano,aminoWater/OrganicModifiersIonics,Bases,AcidsIonPairC-18,C-8Water/OrganicIon-PairReagentCompoundsnotsolubleinwaterNormalPhaseSilica,Amino,Cyano,DiolOrganicsIonicsInorganicIonsIonExchangeAnionorCationExchangeResinAqueous/BufferCounterIonHighMolecularWeightCompoundsPolymersSizeExclusionPolystyreneSilicaGelFiltration-AqueousGelPermeation-Organic泵進(jìn)樣器檢測器餾分收集器流動相HPLC高壓輸液系統(tǒng)不包括：A.貯液器B.高壓輸液泵C.六通閥D.梯度洗脫裝置六個局部1.高壓輸液系統(tǒng);2.進(jìn)樣系統(tǒng)3.別離系統(tǒng);4.檢測系統(tǒng);5.數(shù)據(jù)記錄與處理系統(tǒng);6.輔助裝置C8屬于正相化學(xué)鍵合固定相，C18屬于反相化學(xué)鍵合固定相？HPLC通過改變流動相的組成和極性，可調(diào)整出峰時間并改善別離度？紫外-可見檢測器利用物質(zhì)吸收受紫外-可見光輻射的性質(zhì)來進(jìn)行檢測？實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜PLC操作條件的選擇，以到達(dá)化合物的良好別離效果掌握HPLC測定汽水中苯甲酸的方法實(shí)驗(yàn)原理樣品超聲去CO2和乙醇，調(diào)pH至中性，過濾后進(jìn)HPLC進(jìn)行分析。使用C18柱作為分析柱，甲醇及乙酸銨溶液作為流動相，別離汽水中的苯甲酸。利用紫外檢測器在230nm波長處進(jìn)行檢驗(yàn)，以色譜峰的保存時間定性，峰面積定量。儀器及試劑高效液相色譜儀(Waters2695)+紫外檢測器(Waters2998)千分之一電子天枰〔型號〕高速離心機(jī)〔型號〕甲醇〔優(yōu)級純〕〔1+1〕氨水0.02mol/L乙酸銨溶液1mg/ml苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲藏液0.1mg/ml苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液Waters2695流動相紫外檢測器柱溫箱可視化面板Waters2695自動進(jìn)樣器運(yùn)行樣品數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)步驟1.樣品處理稱量：①翻開天平側(cè)門，放入小燒杯，讀書穩(wěn)定后，TARE/POWER鍵歸零②用吸管吸取汽水約10g于小燒杯中，讀書穩(wěn)定后，記錄讀數(shù)攪拌除去二氧化碳使用氨水〔約1～2滴，1.5滴為佳〕調(diào)pH至約7，使用pH試紙判定加超純水定容至25ml8000轉(zhuǎn)/min離心5min取上清液轉(zhuǎn)移至HPLC進(jìn)樣瓶TAREPOWER實(shí)驗(yàn)步驟2.流動相配置甲醇、0.02mol/L乙酸銨溶液；流動相使用前用0.5μm濾膜過濾后，超聲脫氣3.HPLC條件設(shè)置C18色譜柱甲醇：0.02mol/L乙酸銨溶液=10：90流速：1ml/min進(jìn)樣量：20μL紫外檢測器波長：230nm實(shí)驗(yàn)步驟4.標(biāo)準(zhǔn)樣測定及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別吸取苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液〔0.1mg/ml〕2，4，6，8，10ml于10ml比色管中，用超純水定容至刻度，混勻。過濾后分別吸取20μL進(jìn)樣，測定不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積。以苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.樣品測定各組將HPLC進(jìn)樣瓶放入HPLC樣品盤中，記錄各自樣品盤中對應(yīng)的號碼，在HPLC進(jìn)樣方法指令中輸入相應(yīng)的號碼，20μL進(jìn)樣，記錄目標(biāo)峰的保存時間和峰面積結(jié)果記錄及討論1.數(shù)據(jù)記錄2.標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制3.樣品中苯甲酸含量〔計(jì)算結(jié)果保存2位有效數(shù)字〕x=CV/mx：樣品中苯甲酸含量，g/kgC：從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到的樣品濃度,mg/mlm：樣品質(zhì)量,gV：樣品稀釋液總體積,ml0.02mg/ml0.04mg/ml0.06mg/ml0.08mg/ml0.10mg/ml樣品保留時間（分）峰面積(微伏×秒）結(jié)果記錄及討論1.對實(shí)驗(yàn)