高效液相色譜的應(yīng)用與展望

高效液相色譜的應(yīng)用與展望一、本文概述高效液相色譜（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）是一種廣泛應(yīng)用于化學(xué)、生物、醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域的重要分離分析技術(shù)。自上世紀(jì)60年代問(wèn)世以來(lái)，隨著科技的不斷進(jìn)步，HPLC已發(fā)展成為一種高效、快速、靈敏且重現(xiàn)性好的分離分析方法。本文旨在探討HPLC技術(shù)的最新應(yīng)用，包括在藥物分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全、生物大分子分析等領(lǐng)域的應(yīng)用，同時(shí)展望其未來(lái)的發(fā)展趨勢(shì)和可能面臨的挑戰(zhàn)。通過(guò)本文的闡述，我們期望能夠?yàn)樽x者提供一個(gè)全面、深入的HPLC應(yīng)用與發(fā)展的視圖，為推動(dòng)HPLC技術(shù)在各個(gè)領(lǐng)域的進(jìn)一步應(yīng)用和發(fā)展提供參考。二、高效液相色譜技術(shù)的基本原理和特點(diǎn)高效液相色譜（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）是一種基于液-固吸附色譜原理的分離分析技術(shù)。其基本原理是將待測(cè)樣品溶液注入色譜柱，通過(guò)高壓輸液系統(tǒng)，以流動(dòng)相將樣品帶入色譜柱內(nèi)進(jìn)行分離，隨后進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中各組分的定性和定量分析。高分離效能：HPLC采用特殊設(shè)計(jì)的色譜柱和微粒填料，大大提高了柱效和分離度，使得復(fù)雜樣品中的各組分能夠得到良好的分離。高靈敏度：配合紫外、熒光、質(zhì)譜等檢測(cè)器，HPLC能夠?qū)崿F(xiàn)痕量組分的檢測(cè)，滿足對(duì)低濃度成分的分析需求。高選擇性：通過(guò)選擇不同的固定相和流動(dòng)相，HPLC可以根據(jù)樣品的化學(xué)和物理性質(zhì)進(jìn)行有針對(duì)性的分離分析。操作簡(jiǎn)便：HPLC具有自動(dòng)化程度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，使得實(shí)驗(yàn)操作更為簡(jiǎn)便、快捷。應(yīng)用廣泛：HPLC廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)學(xué)、環(huán)境、食品等領(lǐng)域，是分析化學(xué)中不可或缺的分離分析手段。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，高效液相色譜技術(shù)也在不斷進(jìn)步和完善，如色譜柱材料的改進(jìn)、檢測(cè)器的更新?lián)Q代、聯(lián)用技術(shù)的開(kāi)發(fā)等，使得HPLC在復(fù)雜樣品分析中的應(yīng)用前景更加廣闊。三、高效液相色譜在化學(xué)工業(yè)中的應(yīng)用隨著科技的飛速發(fā)展，高效液相色譜（HPLC）作為一種先進(jìn)的分離和分析技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于化學(xué)工業(yè)的多個(gè)領(lǐng)域，成為現(xiàn)代化學(xué)分析的重要工具。在化學(xué)合成領(lǐng)域，高效液相色譜技術(shù)常被用于監(jiān)控化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)程和純度分析。其高分辨率和快速分析的特點(diǎn)，使得研究人員能夠及時(shí)了解反應(yīng)物與產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化情況，從而優(yōu)化反應(yīng)條件，提高合成效率。在藥物研發(fā)中，高效液相色譜發(fā)揮著舉足輕重的作用。無(wú)論是藥物的分離純化、雜質(zhì)分析，還是藥物的穩(wěn)定性研究，都離不開(kāi)高效液相色譜的精確分析。其對(duì)于藥物質(zhì)量控制和藥物研發(fā)過(guò)程中的問(wèn)題診斷具有重要的指導(dǎo)意義。在環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域，高效液相色譜也扮演著重要的角色。它可以用于檢測(cè)和分析水體、土壤、空氣等環(huán)境樣品中的痕量有機(jī)物，為環(huán)境保護(hù)和污染治理提供科學(xué)依據(jù)。隨著科技的不斷進(jìn)步，高效液相色譜技術(shù)也在不斷更新?lián)Q代。未來(lái)，隨著儀器性能的提升、分析方法的優(yōu)化以及數(shù)據(jù)處理技術(shù)的革新，高效液相色譜在化學(xué)工業(yè)中的應(yīng)用將更加廣泛和深入。我們有理由相信，高效液相色譜技術(shù)將在未來(lái)的化學(xué)工業(yè)中發(fā)揮更加重要的作用，為化學(xué)工業(yè)的可持續(xù)發(fā)展做出更大的貢獻(xiàn)。四、高效液相色譜在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用高效液相色譜（HPLC）作為一種強(qiáng)大的分離和分析工具，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。其高靈敏度、高分辨率和高分離效能使得HPLC在生物樣本的復(fù)雜成分分析中表現(xiàn)出色，對(duì)生物醫(yī)學(xué)研究的發(fā)展起到了重要的推動(dòng)作用。在藥物研發(fā)過(guò)程中，HPLC被廣泛應(yīng)用于藥物的分離、純化和定量分析。通過(guò)對(duì)藥物成分的精確測(cè)量，研究人員可以更好地理解藥物的作用機(jī)制，優(yōu)化藥物設(shè)計(jì)，提高藥物的療效和安全性。HPLC還可以用于藥物的體內(nèi)代謝研究，揭示藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)化過(guò)程，為藥物的合理使用提供科學(xué)依據(jù)。在臨床診斷領(lǐng)域，HPLC的應(yīng)用同樣重要。例如，在疾病標(biāo)志物的檢測(cè)中，HPLC可以幫助醫(yī)生準(zhǔn)確地檢測(cè)出生物樣本中的微量成分，為疾病的早期發(fā)現(xiàn)和治療提供有力支持。HPLC還可以用于監(jiān)測(cè)藥物治療效果，及時(shí)調(diào)整治療方案，提高患者的康復(fù)率。隨著生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的快速發(fā)展，HPLC在基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)等前沿領(lǐng)域也發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。通過(guò)HPLC分離和檢測(cè)生物大分子和代謝物，研究人員可以更好地理解生物體內(nèi)的分子機(jī)制和代謝過(guò)程，為疾病的預(yù)防和治療提供新的思路和方法。展望未來(lái)，隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和創(chuàng)新，HPLC在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用將更加廣泛和深入。例如，通過(guò)結(jié)合其他先進(jìn)技術(shù)如質(zhì)譜、核磁共振等，HPLC可以實(shí)現(xiàn)更快速、更準(zhǔn)確的生物樣本分析。隨著生物醫(yī)學(xué)研究的深入，HPLC在個(gè)性化醫(yī)療、精準(zhǔn)治療等領(lǐng)域的應(yīng)用也將不斷拓展，為人類的健康事業(yè)做出更大的貢獻(xiàn)。五、高效液相色譜在食品安全和質(zhì)量控制中的應(yīng)用隨著人們對(duì)食品安全和質(zhì)量的日益關(guān)注，高效液相色譜（HPLC）技術(shù)在食品安全和質(zhì)量控制領(lǐng)域的應(yīng)用也愈發(fā)廣泛。HPLC以其高分離效能、高靈敏度以及良好的重現(xiàn)性，為食品安全檢測(cè)提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支持。在食品成分分析中，HPLC常被用于檢測(cè)食品添加劑、營(yíng)養(yǎng)成分以及有害物質(zhì)。例如，通過(guò)HPLC技術(shù)可以準(zhǔn)確測(cè)定食品中的防腐劑、甜味劑、色素等添加劑的含量，從而判斷食品是否符合相關(guān)的安全標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，HPLC還可以用于檢測(cè)食品中的蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素等營(yíng)養(yǎng)成分，為食品的營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)提供準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。在食品中有害物質(zhì)的檢測(cè)方面，HPLC同樣發(fā)揮著重要作用。例如，利用HPLC技術(shù)可以檢測(cè)食品中的農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、重金屬等有害物質(zhì)，從而確保食品的安全性。HPLC還可以用于檢測(cè)食品中的霉菌毒素、生物毒素等有害物質(zhì)，為食品安全監(jiān)測(cè)提供有力保障。在食品質(zhì)量控制方面，HPLC技術(shù)同樣具有廣泛的應(yīng)用。通過(guò)HPLC可以對(duì)食品的生產(chǎn)過(guò)程進(jìn)行監(jiān)控，確保食品的質(zhì)量符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。HPLC還可以用于食品保質(zhì)期的研究，為食品的貯藏和運(yùn)輸提供科學(xué)依據(jù)。展望未來(lái)，隨著HPLC技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，其在食品安全和質(zhì)量控制領(lǐng)域的應(yīng)用將更加廣泛和深入。相信在不遠(yuǎn)的將來(lái)，HPLC技術(shù)將成為食品安全和質(zhì)量控制領(lǐng)域不可或缺的重要工具。六、高效液相色譜技術(shù)的挑戰(zhàn)與未來(lái)發(fā)展方向高效液相色譜（HPLC）技術(shù)自問(wèn)世以來(lái)，已在諸多領(lǐng)域展現(xiàn)出了強(qiáng)大的分析能力和廣泛的應(yīng)用前景。然而，隨著科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，HPLC技術(shù)也面臨著一些挑戰(zhàn)，并需要不斷探索未來(lái)的發(fā)展方向。挑戰(zhàn)一：技術(shù)限制。盡管HPLC已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了高靈敏度、高分辨率的分析，但在某些特殊樣品的分析中，如高分子量、高極性、高疏水性化合物等，仍存在分離效果不佳的問(wèn)題。這需要我們深入研究新的色譜材料、色譜柱和檢測(cè)器等，以突破這些技術(shù)限制。挑戰(zhàn)二：儀器成本與維護(hù)。HPLC儀器的購(gòu)置成本和維護(hù)成本相對(duì)較高，對(duì)于一些科研資金有限的研究機(jī)構(gòu)或企業(yè)來(lái)說(shuō)，可能構(gòu)成一定的經(jīng)濟(jì)壓力。因此，如何降低儀器成本，提高儀器的耐用性和穩(wěn)定性，是HPLC技術(shù)需要解決的重要問(wèn)題。挑戰(zhàn)三：數(shù)據(jù)處理與分析。隨著HPLC技術(shù)的發(fā)展，產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量越來(lái)越大，如何有效地處理和分析這些數(shù)據(jù)，提取有用的信息，成為了新的挑戰(zhàn)。這需要借助計(jì)算機(jī)技術(shù)、人工智能等現(xiàn)代信息技術(shù)，開(kāi)發(fā)更加智能、高效的數(shù)據(jù)處理和分析軟件。方向一：新材料與新技術(shù)的研發(fā)。研發(fā)新型色譜材料、色譜柱和檢測(cè)器等，以提高HPLC的分離效果、靈敏度和分辨率，滿足更多類型樣品的分析需求。方向二：儀器的小型化與智能化。通過(guò)改進(jìn)儀器結(jié)構(gòu)、優(yōu)化制造工藝、降低材料成本等方式，實(shí)現(xiàn)HPLC儀器的小型化、低成本化。同時(shí)，借助現(xiàn)代信息技術(shù)，實(shí)現(xiàn)儀器的智能化、自動(dòng)化，降低操作難度，提高分析效率。方向三：數(shù)據(jù)處理與分析技術(shù)的創(chuàng)新。利用計(jì)算機(jī)技術(shù)等技術(shù)手段，開(kāi)發(fā)更加智能、高效的數(shù)據(jù)處理和分析軟件，實(shí)現(xiàn)對(duì)HPLC數(shù)據(jù)的快速、準(zhǔn)確處理和分析，提高分析結(jié)果的可靠性和實(shí)用性。HPLC技術(shù)在未來(lái)的發(fā)展中仍具有廣闊的應(yīng)用前景和巨大的發(fā)展?jié)摿ΑＭㄟ^(guò)不斷克服技術(shù)挑戰(zhàn)、創(chuàng)新發(fā)展方向，HPLC技術(shù)將在更多領(lǐng)域發(fā)揮重要作用，為科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和社會(huì)進(jìn)步做出更大貢獻(xiàn)。七、結(jié)論隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，高效液相色譜（HPLC）作為一種重要的分離分析技術(shù)，在多個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用日益廣泛，且在過(guò)去的幾十年中取得了顯著的進(jìn)步。HPLC以其高分辨率、高靈敏度、快速分析等特點(diǎn)，為生命科學(xué)、藥物研發(fā)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全等領(lǐng)域提供了強(qiáng)大的技術(shù)支持。在生命科學(xué)領(lǐng)域，HPLC在蛋白質(zhì)、核酸、多肽等生物大分子的分離分析方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，為生命科學(xué)研究提供了有力工具。在藥物研發(fā)領(lǐng)域，HPLC不僅用于藥物的純化與鑒定，還在藥物代謝動(dòng)力學(xué)、藥物相互作用等方面發(fā)揮著重要作用，為新藥的開(kāi)發(fā)和臨床用藥提供了重要依據(jù)。隨著環(huán)境污染問(wèn)題的日益嚴(yán)重，HPLC在環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用也愈發(fā)重要。通過(guò)HPLC技術(shù)，可以對(duì)水體、土壤、空氣等環(huán)境樣品中的痕量污染物進(jìn)行高效、準(zhǔn)確的檢測(cè)，為環(huán)境保護(hù)提供了技術(shù)支持。在食品安全領(lǐng)域，HPLC在食品添加劑、農(nóng)藥殘留、獸藥殘留等方面的檢測(cè)中發(fā)揮著重要作用，為食品安全監(jiān)管提供了有力保障。展望未來(lái)，隨著HPLC技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，其在各領(lǐng)域的應(yīng)用將更加廣泛。一方面，隨著新型檢測(cè)器、高性能色譜柱等硬件設(shè)備的不斷涌現(xiàn)，HPLC的分辨率、靈敏度、分析速度等性能將進(jìn)一步提升，為各領(lǐng)域的研究提供更加準(zhǔn)確、高效的技術(shù)支持。另一方面，隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)等技術(shù)的不斷發(fā)展，HPLC數(shù)據(jù)處理和自動(dòng)化程度將進(jìn)一步提高，使得HPLC分析更加便捷、智能。高效液相色譜作為一種重要的分離分析技術(shù)，在各領(lǐng)域的應(yīng)用中發(fā)揮著重要作用。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和發(fā)展，相信HPLC將在未來(lái)的科學(xué)研究和實(shí)際應(yīng)用中發(fā)揮更加重要的作用，為人類社會(huì)的科技進(jìn)步和可持續(xù)發(fā)展做出更大的貢獻(xiàn)。參考資料：高效液相色譜法（HPLC）是一種常用的分離分析技術(shù)，自20世紀(jì)60年代問(wèn)世以來(lái)，經(jīng)過(guò)數(shù)十年的發(fā)展，已經(jīng)成為許多領(lǐng)域不可或缺的分析工具。它的出現(xiàn)極大地推動(dòng)了色譜分析技術(shù)的發(fā)展，并在化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域發(fā)揮了重要作用。HPLC的發(fā)展可以追溯到20世紀(jì)60年代初期。當(dāng)時(shí)，為了解決氣相色譜法在分離復(fù)雜混合物時(shí)的困難，科學(xué)家們開(kāi)始探索使用液體作為流動(dòng)相的可能性。1960年，馬丁和辛格提出了液固吸附色譜法，這是HPLC的雛形。在此基礎(chǔ)上，科學(xué)家們不斷優(yōu)化分離介質(zhì)和流動(dòng)相，逐漸發(fā)展出了高效液相色譜法。1965年，戈雷利克等人引入了微粒固定相的概念，并成功地分離了氨基酸和胺類化合物。這一突破使得HPLC的分離效率大大提高，為該技術(shù)的廣泛應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。隨著技術(shù)的不斷完善，高效液相色譜法逐漸成為一種可靠、高效的分離分析方法。進(jìn)入20世紀(jì)70年代，隨著高分子合成技術(shù)的發(fā)展，科學(xué)家們開(kāi)始研究使用有機(jī)聚合物作為固定相。這一進(jìn)展使得HPLC的分離性能得到進(jìn)一步提升，能夠更好地適應(yīng)復(fù)雜混合物的分離分析。20世紀(jì)80年代，隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)和檢測(cè)器技術(shù)的發(fā)展，高效液相色譜法的自動(dòng)化程度和靈敏度得到了顯著提高。這為HPLC在生命科學(xué)、藥物開(kāi)發(fā)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域的應(yīng)用提供了有力支持。進(jìn)入21世紀(jì)以來(lái)，高效液相色譜法在理論、技術(shù)和應(yīng)用方面都取得了重要進(jìn)展。新型固定相和流動(dòng)相的研發(fā)、超高壓液相色譜技術(shù)的發(fā)展以及與質(zhì)譜等檢測(cè)技術(shù)的聯(lián)用，進(jìn)一步拓展了高效液相色譜法的應(yīng)用范圍。高效液相色譜法自20世紀(jì)60年代誕生以來(lái)，經(jīng)歷了數(shù)十年的發(fā)展歷程。從最初的液固吸附色譜法到現(xiàn)代的高效、高靈敏度液相色譜技術(shù)，HPLC不斷克服技術(shù)瓶頸，逐步成為一種廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域的分離分析工具。高效液相色譜法（HighPerformanceLiquidChromatography\HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。1903年俄國(guó)植物化學(xué)家茨維特（Tswett）首次提出“色譜法”（Chromatography）和“色譜圖”（Chromatogram）的概念。茨維特使用色譜法chromatography（來(lái)自希臘字，chroma意思是顏色，graphy意思是記錄-直譯為顏色記錄）來(lái)描述他的彩色試驗(yàn)。（令人好奇的是,俄羅斯名字茨維特意思是顏色。）他在論文中寫到：“（原文）一植物色素的石油醚溶液從一根主要裝有碳酸鈣吸附劑的玻璃管上端加入，沿管濾下，后用純石油醚淋洗，結(jié)果按照不同色素的吸附順序在管內(nèi)觀察到它們相應(yīng)的色帶，就象光譜一樣，稱之為色譜圖。”1930年以后，相繼出現(xiàn)了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術(shù)。1952年，英國(guó)學(xué)者M(jìn)artin和Synge基于他們?cè)诜峙渖V方面的研究工作，提出了關(guān)于氣－液分配色譜的比較完整的理論和方法，把色譜技術(shù)向前推進(jìn)了一大步，這是氣相色譜在此后的十多年間發(fā)展十分迅速的原因。1958年，基于Moore和Stein的工作，離子交換色譜的儀器化導(dǎo)致了氨基酸分析儀的出現(xiàn)，這是近代液相色譜的一個(gè)重要嘗試，但分離效率尚不理想。1960年中后期，氣相色譜理論和實(shí)踐發(fā)展，以及機(jī)械、光學(xué)、電子等技術(shù)上的進(jìn)步，液相色譜又開(kāi)始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了HPLC。1970年中期以后，微處理機(jī)技術(shù)用于液相色譜，進(jìn)一步提高了儀器的自動(dòng)化水平和分析精度。1990年以后，生物工程和生命科學(xué)在國(guó)際和國(guó)內(nèi)的迅速發(fā)展，為高效液相色譜技術(shù)提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題，如人類基因組計(jì)劃，蛋白質(zhì)組學(xué)有HPLC作預(yù)分離等。①高壓：流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過(guò)色譜柱，必須對(duì)載液加高壓。②高速：分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時(shí)。③高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。⑤應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢(shì)。⑦樣品量少、容易回收：樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有缺點(diǎn)，與氣相色譜相比各有所長(zhǎng)，相互補(bǔ)充。高效液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測(cè)器之間，除了柱子以外的任何死空間（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)池等）中，如果流動(dòng)相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會(huì)顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測(cè)器的靈敏度不及氣相色譜。1．吸附色譜法(AdsorptionChromatography)2．分配色譜法(PartitionChromatography)4．分子排阻色譜法/凝膠色譜法(SizeExclusionChromatography)5．鍵合相色譜法（bonded-phasechromatography）6．親和色譜法(AffinityChromatography)可分為“高壓輸液泵”、“色譜柱”、“進(jìn)樣器”、“檢測(cè)器”、“餾分收集器”以及“數(shù)據(jù)獲取與處理系統(tǒng)”等部分。液相色譜和質(zhì)譜連接，可以增加額外的分析能力，能夠準(zhǔn)確鑒定和定量像細(xì)胞和組織裂解液，血液，血漿，尿液和口腔液等復(fù)雜樣品基質(zhì)中的微量化合物。高效液相色譜質(zhì)譜系統(tǒng)（ABSciexEksigentLC/MS和LC/MS/MS）提供了一些獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，包括：流量穩(wěn)定（±1)，耐高壓(30～60Mpa)，耐各種流動(dòng)相：例如：有機(jī)溶劑、水和緩沖液；如果所進(jìn)行的色譜分離不是為了純粹的色譜分析，而是為了做其它波譜鑒定，或獲取少量試驗(yàn)樣品的小型制備，餾分收集是必要的；(Liquid-liquidPartitionChromatography)及化學(xué)鍵合相色譜(ChemicallyBondedPhaseChromatography)流動(dòng)相和固定相都是液體。流動(dòng)相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個(gè)明顯的分界面。當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時(shí)，服從于高效液相色譜計(jì)算公式：式中，cs—溶質(zhì)在固定相中濃度；cm—溶質(zhì)在流動(dòng)相中的濃度；Vs—固定相的體積；Vm—流動(dòng)相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決于K，K大的組分保留值大；但也有不同之處，GPC中，流動(dòng)相對(duì)K影響不大，LLPC流動(dòng)相對(duì)K影響較大。a.正相液-液分配色譜法(NormalPhaseliquidChromatography):流動(dòng)相的極性小于固定液的極性。b.反相液-液分配色譜法(ReversePhaseliquidChromatography):流動(dòng)相的極性大于固定液的極性。c.液-液分配色譜法的缺點(diǎn)：盡管流動(dòng)相與固定相的極性要求完全不同，但固定液在流動(dòng)相中仍有微量溶解；流動(dòng)相通過(guò)色譜柱時(shí)的機(jī)械沖擊力，會(huì)造成固定液流失。上世紀(jì)70年代末發(fā)展的化學(xué)鍵合固定相（見(jiàn)后），可克服上述缺點(diǎn)。流動(dòng)相為液體，固定相為吸附劑（如硅膠、氧化鋁等）。這是根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來(lái)進(jìn)行分離的。其作用機(jī)制是：當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱時(shí)，溶質(zhì)分子()和溶劑分子(S)對(duì)吸附劑表面活性中心發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)吸附（未進(jìn)樣時(shí)，所有的吸附劑活性中心吸附的是S)，可表示如下：mnSa======anSm式中：m--流動(dòng)相中的溶質(zhì)分子；Sa--固定相中的溶劑分子；a--固定相中的溶質(zhì)分子；Sm--流動(dòng)相中的溶劑分子。IEC是以離子交換劑作為固定相。IEC是基于離子交換樹脂上可電離的離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子進(jìn)行可逆交換，依據(jù)這些離子以交換劑具有不同的親和力而將它們分離。以陰離子交換劑為例，其交換過(guò)程可表示如下：-（溶劑中）(樹脂-R4NCl-)===（樹脂-R4N-)Cl-（溶劑中）凡是在溶劑中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法來(lái)進(jìn)行分離。離子對(duì)色譜法是將一種(或多種)與溶質(zhì)分子電荷相反的離子(稱為對(duì)離子或反離子)加到流動(dòng)相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水型離子對(duì)化合物，從而控制溶質(zhì)離子的保留行為。其原式中：水相--流動(dòng)相中待分離的有機(jī)離子（也可是陽(yáng)離子）；Y-水相--流動(dòng)相中帶相反電荷的離子對(duì)（如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等）；Y---形成的離子對(duì)化合物。離子對(duì)色譜法（特別是反相）解決了以往難以分離的混合物的分離問(wèn)題，諸如酸、堿和離子、非離子混合物，特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等分離。用離子交換樹脂為固定相，電解質(zhì)溶液為流動(dòng)相。以電導(dǎo)檢測(cè)器為通用檢測(cè)器，為消除流動(dòng)相中強(qiáng)電解質(zhì)背景離子對(duì)電導(dǎo)檢測(cè)器的干擾，設(shè)置了抑制柱。試樣組分在分離柱和抑制柱上的反應(yīng)原理與離子交換色譜法相同。以陰離子交換樹脂(R-OH)作固定相，分離陰離子（如Br-）為例。當(dāng)待測(cè)陰離子Br-隨流動(dòng)相(NaOH)進(jìn)入色譜柱時(shí)，發(fā)生如下交換反應(yīng)（洗脫反應(yīng)為交換反應(yīng)的逆過(guò)程）：可見(jiàn)，通過(guò)抑制柱將洗脫液轉(zhuǎn)變成了電導(dǎo)值很小的水，消除了本底電導(dǎo)的影響；試樣陰離子Br-則被轉(zhuǎn)化成了相應(yīng)的酸HBr-，可用電導(dǎo)法靈敏的檢測(cè)。(StericExclusionChromatography)空間排阻色譜法以凝膠(gel)為固定相。它類似于分子篩的作用，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多，一般為數(shù)納米到數(shù)百納米。溶質(zhì)在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來(lái)進(jìn)行分離，而是按分子大小進(jìn)行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質(zhì)的流動(dòng)力學(xué)體積或分子大小有關(guān)。試樣進(jìn)入色譜柱后，隨流動(dòng)相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過(guò)。在試樣中一些太大的分子不能進(jìn)入膠孔而受到排阻，因此就直接通過(guò)柱子，首先在色譜圖上出現(xiàn)，一些很小的分子可以進(jìn)入所有膠孔并滲透到顆粒中，這些組分在柱上的保留值最大，在色譜圖上最后出現(xiàn)。流程：如圖1所示，溶劑貯器⑴中的流動(dòng)相被泵⑵吸入，經(jīng)〔3〕梯度控制器按一定的梯度進(jìn)行混合然后輸出，經(jīng)⑷測(cè)其壓力和流量，導(dǎo)入(5進(jìn)樣閥（器）經(jīng)⑹保護(hù)柱、⑺分離柱后到⑻檢測(cè)器檢測(cè)，由⑽數(shù)據(jù)處理設(shè)備處理數(shù)據(jù)或⑾記錄儀記錄色譜圖，⑿餾分收集器收集餾分，⒀為廢液。色譜圖(chromatogram)——樣品流經(jīng)色譜柱和檢測(cè)器，所得到的信號(hào)-時(shí)間曲線，又稱色譜流出曲線(elutionprofile)?；€(baseline)——經(jīng)流動(dòng)相沖洗，柱與流動(dòng)相達(dá)到平衡后，檢測(cè)器測(cè)出一段時(shí)間的流出曲線。一般應(yīng)平行于時(shí)間軸。噪音(noise)——基線信號(hào)的波動(dòng)。通常因電源接觸不良或瞬時(shí)過(guò)載、檢測(cè)器不穩(wěn)定、流動(dòng)相含有氣泡或色譜柱被污染所致。漂移(drift)——基線隨時(shí)間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動(dòng)相及流量的不穩(wěn)定所引起，柱內(nèi)的污染物或固定相不斷被洗脫下來(lái)也會(huì)產(chǎn)生漂移。色譜峰(peak)——組分流經(jīng)檢測(cè)器時(shí)響應(yīng)的連續(xù)信號(hào)產(chǎn)生的曲線。流出曲線上的突起部分。正常色譜峰近似于對(duì)稱形正態(tài)分布曲線（高斯Gauss曲線）。不對(duì)稱色譜峰有兩種：前延峰(leadingpeak)和拖尾峰(tailingpeak)。前者少見(jiàn)。《中國(guó)藥典》規(guī)定fn=95~05為正常峰，fn<95為前延峰，fn>05為拖尾峰。峰寬（peakwidth，W)—峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作兩條切線與基線的兩個(gè)交點(diǎn)間的距離。W=4σ半峰寬（peakwidthathalf-height，Wh/2)—峰高一半處的峰寬。Wh/2=355σ保留時(shí)間(retentiontime，tR)——從進(jìn)樣開(kāi)始到某個(gè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時(shí)間。理論塔板數(shù)(theoreticalplatenumber，N)——用于定量表示色譜柱的分離效率（簡(jiǎn)稱柱效）。分離度(resolution，R)——相鄰兩峰的保留時(shí)間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。R≥5稱為完全分離。拖尾因子(tailingfactor，T)——T=，用以衡量色譜峰的對(duì)稱性。也稱為對(duì)稱因子(symmetryfactor)或不對(duì)稱因子(asymmetryfactor)。應(yīng)按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，常用的色譜柱填料有硅膠和化學(xué)鍵合硅膠。后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用辛基鍵合硅膠次之，氰基或氨基鍵合硅膠也有使用；離子交換填料用于離子交換色譜；凝膠或玻璃微球等，用于分子排阻色譜等。注樣量一般為數(shù)微升。除另有規(guī)定外，柱溫為室溫，檢測(cè)器為紫外吸收檢測(cè)器。在用紫外吸收檢測(cè)器時(shí)，所用流動(dòng)相應(yīng)符合紫外分光光度法項(xiàng)下對(duì)溶劑的要求。正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定相種類、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類型不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、固定相牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、混合流動(dòng)相各組分的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變。以適應(yīng)具體品種并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。一般色譜圖約于20分鐘內(nèi)記錄完畢。按各品種項(xiàng)下要求對(duì)儀器進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求；或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度和拖尾因子.在選定的條件下，注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時(shí)間t(R)和半高峰寬W(h/2)，按n=54^2計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)，如果測(cè)得理論板數(shù)低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最小理論板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某些條件（如柱長(zhǎng)、載體性能、色譜柱充填的優(yōu)劣等），使理論板數(shù)達(dá)到要求。定量分析時(shí)，為便于準(zhǔn)確測(cè)量，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰之間有較好的分離度。分離度(R)的計(jì)算公式為：R=2(tR2-tR1)/(W1+W2)，式中t(R2)為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間；t(R1)為相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間；W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。除另外有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于5。為保證測(cè)量精度，特別當(dāng)采用峰高法測(cè)量時(shí)，應(yīng)檢查待測(cè)峰的拖尾因子(T)是否符合各品種項(xiàng)下的規(guī)定或不同濃度進(jìn)樣的校正因子誤差是否符合要求。拖尾因子計(jì)算公式為：T(拖尾因子)=W05h/2d1式中W(05h)為05峰高處的峰寬；d1為峰極大至峰前沿之間的距離。除另有規(guī)定外,T應(yīng)在95～05間。也可按各品種校正因子測(cè)定項(xiàng)下，配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成三種不同濃度的溶液，分別注樣3次，計(jì)算平均校正因子，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于0%。定量測(cè)定時(shí)，可根據(jù)樣品的具體情況采用峰面積法或峰高法。但用歸一法或內(nèi)標(biāo)法測(cè)定雜質(zhì)總量時(shí)，須采用峰面積法。測(cè)定供試品（或經(jīng)衍生化處理的供試品）中各雜質(zhì)及雜質(zhì)的總量限度采用不加校正因子的峰面積歸一法。計(jì)算各雜質(zhì)峰面積及其總和，并求出占總峰面積的百分率。但溶劑峰不計(jì)算在內(nèi)。色譜圖的記錄時(shí)間應(yīng)根據(jù)各品種所含雜質(zhì)的保留時(shí)間決定，除另有規(guī)定外可為該品種項(xiàng)下主成分保留時(shí)間的倍數(shù)。當(dāng)雜質(zhì)峰面積與成分峰面積相差懸殊時(shí)，采用主成分自身對(duì)照法。在測(cè)定前，先按各品種項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品稀釋成一定濃度的溶液作為對(duì)照溶液，進(jìn)樣，調(diào)節(jié)檢測(cè)器的靈敏度或進(jìn)樣量，使對(duì)照溶液中的主成分色譜峰面積滿足準(zhǔn)確測(cè)量要求。然后取供試品溶液，進(jìn)樣，記錄時(shí)間，除另有規(guī)定外，應(yīng)為主成分保留時(shí)間的倍數(shù)。根據(jù)測(cè)得的供試品溶液的各雜質(zhì)峰面積及其總和并和對(duì)照溶液主成分的峰面積比較，計(jì)算雜質(zhì)限度。采用不加校正因子的峰面積法。取供試品，按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法配制不含內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖Ⅰ；再配制含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，在同樣的條件下注樣，記錄色譜圖Ⅱ。記錄的時(shí)間除另有規(guī)定外，應(yīng)為該品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)峰保留時(shí)間的倍數(shù)，色譜圖上內(nèi)標(biāo)峰高應(yīng)為記錄儀滿標(biāo)度的30%以上，否則應(yīng)調(diào)整注樣量或檢測(cè)器靈敏度。如果色譜圖Ⅰ中沒(méi)有與色譜圖Ⅱ上內(nèi)標(biāo)峰保留時(shí)間相同的雜質(zhì)峰，則色譜圖Ⅱ中各雜質(zhì)峰面積之和應(yīng)小于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積（溶劑峰不計(jì)在內(nèi)）。如果色譜圖Ⅰ中有與色譜圖Ⅱ上內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰保留時(shí)間相同的雜質(zhì)峰，應(yīng)將色譜圖Ⅱ上的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積減去色譜圖Ⅰ中此雜質(zhì)峰面積，即為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的校正面積；色譜圖Ⅱ中各雜質(zhì)峰總面積加色譜圖Ⅰ中此雜峰面積，即為各雜質(zhì)峰的校正總面積，各雜質(zhì)峰的校正總面積應(yīng)小于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的校正面積。按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液，取一定量注入儀器，記錄色譜圖，測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算校正因子：As/ms]校正因子f=-Ar/mr式中As為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高,Ar為對(duì)照品的峰面積或峰高；ms為加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量mr為加入對(duì)照品的量。再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖，測(cè)量供試品（或其雜質(zhì)）峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算含量：Ax含量(mx)=f×-As/ms式中Ax為供試品（或其雜質(zhì)）峰面積或峰高；mx為供試品（或其雜質(zhì)）的量。f、As和ms的意義同上。當(dāng)配制校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液和含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液使用同一分內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液時(shí)，則配制內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液不必精密稱（量）取。按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對(duì)照品和供試品，配制成溶液，分別精密取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測(cè)量對(duì)照品和供試品待測(cè)成分的峰面積（或峰高），按下式計(jì)算含量：由于微量注射器不易精確控制進(jìn)樣量，當(dāng)采用外標(biāo)法測(cè)定供試品中某雜質(zhì)或主成分含量時(shí)，以定量環(huán)進(jìn)樣為好。要正確地選擇色譜分離方法，首先必須盡可能多的了解樣品的有關(guān)性質(zhì)，其次必須熟悉各種色譜方法的主要特點(diǎn)及其應(yīng)用范圍。選擇色譜分離方法的主要根據(jù)是樣品的相對(duì)分子質(zhì)量的大小，在水中和有機(jī)溶劑中的溶解度，極性和穩(wěn)定程度以及化學(xué)結(jié)構(gòu)等物理、化學(xué)性質(zhì)。對(duì)于相對(duì)分子質(zhì)量較低（一般在200以下），揮發(fā)性比較好，加熱又不易分解的樣品，可以選擇氣相色譜法進(jìn)行分析。相對(duì)分子質(zhì)量在200~2000的化合物，可用液固吸附、液-液分配和離子交換色譜法。相對(duì)分子質(zhì)量高于2000，則可用空間排阻色譜法。水溶性樣品最好用離子交換色譜法和液液分配色譜法；微溶于水，但在酸或堿存在下能很好電離的化合物，也可用離子交換色譜法；油溶性樣品或相對(duì)非極性的混合物，可用液-固色譜法。若樣品中包含離子型或可離子化的化合物，或者能與離子型化合物相互作用的化合物（例如配位體及有機(jī)螯合劑），可首先考慮用離子交換色譜，但空間排阻和液液分配色譜也都能順利地應(yīng)用于離子化合物；異構(gòu)體的分離可用液固色譜法；具有不同官能團(tuán)的化合物、同系物可用液液分配色譜法；對(duì)于高分子聚合物，可用空間排阻色譜法。HPLC的出現(xiàn)不過(guò)三十多年的時(shí)間，但這種分離分析技術(shù)的發(fā)展十分迅猛，應(yīng)用十分廣泛。其儀器結(jié)構(gòu)和流程多種多樣。典型的高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)和流程可用下列方框圖表示(SeeFig.3-4)。高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置（用雙泵）、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、恒溫器、記錄儀等主要部件。高效液相色譜更適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對(duì)分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛應(yīng)用于核酸、肽類、內(nèi)酯、稠環(huán)芳烴、高聚物、藥物、人體代謝產(chǎn)物、表面活性劑，抗氧化劑、殺蟲劑、除銹劑的分析等物質(zhì)的分析。HPLC使用的色譜柱是很細(xì)的(1~6mm)，所用固定相的粒度也非常?。◣爪蘭到幾十μm)，所以流動(dòng)相在柱中流動(dòng)受到的阻力很大，在常壓下，流動(dòng)相流速十分緩慢，柱效低且費(fèi)時(shí)。為了達(dá)到快速、高效分離，必須給流動(dòng)相施加很大的壓力，以加快其在柱中的流動(dòng)速度。為此，須用高壓泵進(jìn)行高壓輸液。高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。HPLC使用的高壓泵應(yīng)滿足下列條件：a.流量恒定，無(wú)脈動(dòng)，并有較大的調(diào)節(jié)范圍（一般為1~10mL/min)；c.有較高的輸液壓力；對(duì)一般分離，60×10^5Pa的壓力就滿足了，對(duì)高效分離，要求達(dá)到150~300×10^5Pa。當(dāng)柱塞推入缸體時(shí)，泵頭出口（上部）的單向閥打開(kāi)，同時(shí)，流動(dòng)相進(jìn)入的單向閥（下部）關(guān)閉，這時(shí)就輸出少量的流體。反之，當(dāng)柱塞向外拉時(shí)，流動(dòng)相入口的單向閥打開(kāi)，出口的單向閥同時(shí)關(guān)閉，一定量的流動(dòng)相就由其儲(chǔ)液器吸入缸體中。這種泵的特點(diǎn)是不受整個(gè)色譜體系中其余部分阻力稍有變化的影響，連續(xù)供給恒定體積的流動(dòng)相。其工作原理是：壓力為p1的低壓氣體推動(dòng)大面積（SA）活塞A，則在小面積（SB）活塞B輸出壓力增大至p2的液體。壓力增大的倍數(shù)取決于A和B兩活塞的面積比，如果A與B的面積之比為50:1，則壓力為5×Pa的氣體就可得到壓力為250×Pa的輸出液體。這是一種恒壓泵。類似于GC中的程序升溫。已成為現(xiàn)代高效液相色譜中不可缺少的部分。梯度洗提，就是載液中含有兩種（或更多）不同極性的溶劑，在分離過(guò)程中按一定的程序連續(xù)改變載液中溶劑的配比和極性，通過(guò)載液中極性的變化來(lái)改變被分離組分的分離因素，以提高分離效果。梯度洗提可以分為兩種：a.低壓梯度（也叫外梯度）：在常壓下，預(yù)先按一定程序?qū)煞N或多種不同極性的溶劑混合后，再用一臺(tái)高壓泵輸入色譜柱。b.高壓梯度(或稱內(nèi)梯度系統(tǒng))：利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按設(shè)定的比例送入梯度混合室，混合后，進(jìn)入色譜柱。⑴注射器進(jìn)樣裝置：進(jìn)樣所用微量注射器及進(jìn)樣方式與GC法一樣。進(jìn)樣壓力150×10^5Pa時(shí)，必須采用停流進(jìn)樣。⑵高壓定量進(jìn)樣閥：與GC法用的流通法相似，能在高壓下進(jìn)樣。色譜柱是色譜儀最重要的部件（心臟）。通常用厚壁玻璃管或內(nèi)壁拋光的不銹鋼管制作的，對(duì)于一些有腐蝕性的樣品且要求耐高壓時(shí)，可用銅管、鋁管或聚四氟乙烯管。柱子內(nèi)徑一般為1～6mm。常用的標(biāo)準(zhǔn)柱型是內(nèi)徑為6或9mm，長(zhǎng)度為15～30cm的直形不銹鋼柱。填料顆粒度5～10μm，柱效以理論塔板數(shù)計(jì)大約7000～10000。它的作用原理是基于被分析試樣組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度的關(guān)系遵守比爾定律。最常用的檢測(cè)器，應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。a.靈敏度高：其最小檢測(cè)量10-9g·mL-1,故即使對(duì)紫外光吸收很弱的物質(zhì)，也可以檢測(cè)；c.流通池可做的很小(1mm×10mm，容積8μL)；e.波長(zhǎng)可選，易于操作：如，使用裝有流通池的可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)（可變波長(zhǎng)檢測(cè)器）。缺點(diǎn)：對(duì)紫外光完全不吸收的試樣不能檢測(cè)；同時(shí)溶劑的選擇受到限制。紫外檢測(cè)器的重要進(jìn)展；陣列由1024個(gè)光電二極管陣列，每個(gè)光電二極管寬僅50μm，各檢測(cè)一窄段波長(zhǎng)。在檢測(cè)器中，光源發(fā)出的紫外或可見(jiàn)光通過(guò)液相色譜流通池，在此流動(dòng)相中的各個(gè)組分進(jìn)行特征吸收，然后通過(guò)狹縫，進(jìn)入單色其進(jìn)行分光，最后由光電二極管陣列檢測(cè)，得到各個(gè)組分的吸收信號(hào)。經(jīng)計(jì)算機(jī)快速處理，得三維立體譜圖。對(duì)多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應(yīng)。差示折光檢測(cè)器是借連續(xù)測(cè)定流通池中溶液折射率的方法來(lái)測(cè)定試樣濃度的檢測(cè)器。溶液的折射率是純?nèi)軇鲃?dòng)相）和純?nèi)苜|(zhì)（試樣）折射率乘以各物質(zhì)的濃度之和。因此溶有試樣的流動(dòng)相和純流動(dòng)相之間折射率之差表示試樣在流動(dòng)相中的濃度。其作用原理是根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生電導(dǎo)變化來(lái)測(cè)定電離物質(zhì)含量。采用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。一般用非極性固定相（如CC8)；流動(dòng)相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用最為廣泛，據(jù)統(tǒng)計(jì)，它占整個(gè)HPLC應(yīng)用的80%左右。高效液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要?dú)饣虼瞬皇茉嚇訐]發(fā)性的限制。對(duì)于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子量大（大于400以上）的有機(jī)物（這些物質(zhì)幾乎占有機(jī)物總數(shù)的75%～80%）原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來(lái)進(jìn)行分離、分析。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在已知化合物中，能用氣相色譜分析的約占20%，而能用液相色譜分析的約占70～80%。流動(dòng)相：20%甲醇-水～100%甲醇；線性梯度淋洗2%/min流動(dòng)相：003mol·L-1NaHCO3/0024mol·L-1Na2CO3，流量138mL/hr。七種陰離子在20分鐘內(nèi)基本上得到完全分離，各組分含量在3～50ppm。液相色譜法開(kāi)始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時(shí)間長(zhǎng)（常有幾個(gè)小時(shí)）。高效液相色譜法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會(huì)引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱高壓液相色譜法(HighPressureLiquidChromatography，HPLC)。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法(HighSpeedLiquidChromatography，HSLP)。也稱現(xiàn)代液相色譜。高效液相色譜技術(shù)（HPLC）是一種常用的分析方法，在化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。本文將介紹高效液相色譜技術(shù)的應(yīng)用。高效液相色譜技術(shù)的基本原理是利用不同物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間的分配平衡，實(shí)現(xiàn)對(duì)混合物的分離和分析。該技術(shù)具有高分辨率、高靈敏度和自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)，因此在多個(gè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。常規(guī)高壓液相色譜法（HPLC）：該方法是最常用的高效液相色譜技術(shù)之一，通過(guò)使用顆粒狀的固定相，以高