論六章藥物含量測(cè)定

1第六章

藥物的含量測(cè)定藥物分析學(xué)總論2024/3/192本章要求熟悉藥物及其制劑的含量限度表示方法掌握容量分析法的特點(diǎn)、原理與含量計(jì)算方法掌握UV法測(cè)定藥物含量的原理、測(cè)定方法與計(jì)算掌握HPLC法和GC法的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、含量計(jì)算熟悉常用HPLC、GC色譜柱、檢測(cè)器、條件的選擇熟悉藥物含量測(cè)定分析方法的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)了解熒光分光光度法和原子吸收分光光度法的應(yīng)用2024/3/193評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的三種分析手段：鑒別（identification）檢查（testforpurity）含量測(cè)定（assay）——準(zhǔn)確測(cè)定有效成分的含量?jī)?yōu)劣度第一節(jié)概述含量測(cè)定（assay）——理化方法測(cè)定效價(jià)測(cè)定（assayofpotency）——生物學(xué)方法或酶學(xué)方法測(cè)定原料藥：強(qiáng)調(diào)方法的精密度、準(zhǔn)確度制劑：偏重方法的選擇性2024/3/194含量限度的表示方法原料藥：以百分含量表示（一般以干燥品計(jì)）地塞米松磷酸鈉

——按干燥品計(jì)算，含C22H28FNaO8P應(yīng)為96.0%-102.0%。硫酸慶大霉素

——按無水物計(jì)算，每1mg的效價(jià)不得少于590慶大霉素單位。阿司匹林——含C9H6O4不得少于99.5%

氫氧化鋁——含氫氧化鋁按Al2O3計(jì)算，不得少于48.0。例子≤101.0%干燥失重測(cè)定水分測(cè)定2024/3/195①以標(biāo)示量%表示②直接用%含量規(guī)定范圍③以重量規(guī)定含量范圍 標(biāo)示量=規(guī)格量=處方量例：維生素B1注射液含維生素B1

應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%～105.0%例：復(fù)方碘溶液含I應(yīng)為4.50%～5.50%

含KI應(yīng)為9.5%～10.5%例：復(fù)方磺胺甲噁唑片磺胺甲噁唑0.360～0.440g/片甲氧芐氨嘧啶72.0～88.0mg/片制劑：按標(biāo)示量計(jì)算（一般以干燥品計(jì)）2024/3/196常用含量測(cè)定方法(2005年版ChP）儀器法容量法其他法HPLC29.4%非水法15.3%生物學(xué)8.1%VIS-UV21%酸堿法7.5%重量法0.8%旋光0.5%銀量法3.4%原子吸收0.3%碘量法3.3%GC0.3%EDTA法2.9%熒光0.1%亞硝酸鈉法2.1%其他容量法5%2024/3/197特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、快速、實(shí)驗(yàn)條件易實(shí)現(xiàn)，但是靈敏度低，專屬性差通常用于高含量和中含量的原料藥物

(只要求準(zhǔn)確度和精密度)滴定方式：

直接滴定法剩余滴定法置換滴定法7第二節(jié)容量分析法（滴定）2024/3/198滴定類型：關(guān)鍵問題：滴定終點(diǎn)的把握被測(cè)物與滴定液定量關(guān)系

滴定液消耗的體積

酸堿滴定法非水滴定法氧化還原滴定法（碘量法）溴量法——反應(yīng)的化學(xué)計(jì)量點(diǎn)——指示劑顯示的滴定終點(diǎn)2024/3/199直接滴定法含量％＝√含量的計(jì)算2024/3/1910定量關(guān)系：

aAbB

被測(cè)藥物滴定液化學(xué)計(jì)量關(guān)系nA/a＝nB/bWA/aMA＝WB/bMB2024/3/1911滴定度：1mL某物質(zhì)的量濃度的滴定液相當(dāng)于被測(cè)藥物的重量，中國(guó)藥典用mg表示。滴定度的計(jì)算：T→滴定度(mg/ml)c→滴定液濃度(mol/L)M→被測(cè)物質(zhì)分子量√2024/3/1912以I2（0.05mol/l）計(jì)，反應(yīng)摩爾比1∶1例子2024/3/1913濃度校正因子F：實(shí)際工作中配制的滴定液濃度與藥典中的規(guī)定濃度不一致，須對(duì)滴定液濃度校正含量計(jì)算公式含量％＝×100％F＝含量％＝2024/3/1914√剩余滴定法

加入滴定液A與被測(cè)藥物完全反應(yīng)，再以滴定液B回滴剩余的滴定液A

滴定液A

與滴定液B

的濃度是相當(dāng)?shù)?，根?jù)消耗回滴的滴定液體積進(jìn)行計(jì)算本法需進(jìn)行空白試驗(yàn)校正含量％＝×100％2024/3/1915稱取異煙肼約0.25g，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取25mL，加水50mL與鹽酸20mL，加甲基橙指示液1滴，用溴酸鉀滴定液(0.01667mol/L)緩緩滴定至粉紅色消失。已知：異煙肼取樣0.2545g，消耗溴酸鉀滴定液(F=1.005)18.30mL，每1mL溴酸鉀滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于3.429mg異煙肼。百分含量%=V×T×F/W×100%

例子18.30×3.429×1.0050.2545×25/100×103

×100%=99.1%=2024/3/1916取阿司匹林約0.3g，精密稱定（0.2908g），加中性乙醇20ml溶解后，精密加入0.1mol/LNaOH40ml，置水浴中加熱煮沸15分鐘，放冷，用0.05mol/LH2SO4滴定至終點(diǎn)，同時(shí)用空白試驗(yàn)進(jìn)行校正。每1ml0.1mol/LNaOH相當(dāng)于18.02mg阿司匹林。已知：供試品消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L）23.84ml，空白試驗(yàn)消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L）39.88ml。百分含量%=(V0-V)×T×F/W×100%

(39.88-23.84)×18.020.2908×103100%=99.4%例子+2NaOH

2NaOH（過量）＋H2SO4＝Na2SO4＋2H2OH2024/3/1917含量％＝含量％＝×100％直接滴定法剩余滴定法F＝課前回顧2024/3/1918原料藥——百分含量制劑——標(biāo)示量百分含量片劑：每片含量相當(dāng)于標(biāo)示量的%每g實(shí)際含量區(qū)分每mL實(shí)際含量注射劑：每mL含量相當(dāng)于標(biāo)示量的%片粉重注射液體積2024/3/1919取阿司匹林片10片，稱總重，研細(xì)后稱取適量，精密稱定，加中性乙醇20ml后，迅速用0.1mol/LNaOH滴定至終點(diǎn)

。精密加入0.1mol/LNaOH40ml，置水浴中加熱煮沸15分鐘，放冷，用0.05mol/LH2SO4滴定至終點(diǎn)，同時(shí)用空白試驗(yàn)進(jìn)行校正。每1ml0.1mol/LNaOH相當(dāng)于18.02mg阿司匹林。例子已知：10片重3.0840g，取片粉0.2908g，供試品及空白試驗(yàn)分別消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L）23.84ml、39.88ml，規(guī)格0.3g/片標(biāo)示量％＝×100％(39.88-23.84)×18.020.2908×103×100%0.30840.32024/3/1920利用物質(zhì)的光譜特性進(jìn)行定量（吸光度、發(fā)光強(qiáng)度與濃度成正比關(guān)系）紫外－可見分光光度法熒光分光光度法原子吸收紫外吸收光譜圖第三節(jié)光譜分析法2024/3/1921波長(zhǎng)范圍200－760nm定量分析基本原理：朗伯-比爾定律

A=ECL特點(diǎn)：靈敏度高(10-4～10-7g/mL)；準(zhǔn)確度高；儀器便宜；易操作專屬性稍差紫外－可見分光光度法2024/3/1922（一）對(duì)溶劑的要求列出名稱、A盡量?。ǘ┤軇┛瞻自囼?yàn)校零（四）測(cè)定波長(zhǎng)確證±2nm（三）供試液的濃度A=0.3~0.7吸收度的測(cè)定要求2024/3/1923測(cè)定方法對(duì)照品比較法:配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，相同條件下測(cè)定吸收度

C供試＝C對(duì)照×要求：對(duì)照品與供試品溶液中的被測(cè)成分濃度應(yīng)一致（標(biāo)示量的±10%）√含量％＝×100％=2024/3/1924標(biāo)準(zhǔn)曲線法（多點(diǎn)對(duì)照）繪制對(duì)照液濃度－吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線（至少5點(diǎn)）擬合回歸方程，求出供試液濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線2024/3/1925吸收系數(shù)法（不需要對(duì)照品）測(cè)定λ處吸收度，以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算（E值小于100的一般不宜采用）√含量％＝×100％=2024/3/1926鹽酸氯丙嗪含量測(cè)定:精密稱取0.2368g，置500ml量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置100ml量瓶中，加同一溶劑稀釋至刻度，搖勻，在254nm波長(zhǎng)處測(cè)得吸收度為0.435，按吸收系數(shù)為915計(jì)算，求其百分含量。例子2024/3/1927制劑——標(biāo)示量百分含量片劑：g/片區(qū)分注射劑：g/mLV注射2024/3/1928維生素B12注射液規(guī)格為0.1mg／m1，含量測(cè)定如下：精密量取本品7.5m1，置25ml量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，混勻，置lcm石英池中，以蒸餾水為空白，在361±1nm波長(zhǎng)處吸收度為0.593，按為207計(jì)算維生素B12按標(biāo)示量計(jì)算的百分含量為例子2024/3/1929計(jì)算分光光度法多波長(zhǎng)校正計(jì)算分光光度法雙波長(zhǎng)分光光度法（復(fù)方磺胺類藥物的測(cè)定）三波長(zhǎng)分光光度法（維生素A的測(cè)定）導(dǎo)數(shù)光譜法解聯(lián)立方程法2024/3/1930比色法加入適當(dāng)顯色劑顯色后可見波長(zhǎng)處測(cè)定酸性染料比色法（硫酸阿托品片）四氮唑比色法、異煙肼比色法Kober反應(yīng)法（甾體激素類藥物）蛋白質(zhì)的雙縮脲反應(yīng)（硫酸軟骨素的測(cè)定）總黃酮、總生物堿的測(cè)定（中藥制劑）2024/3/1931測(cè)定的是物質(zhì)分子的發(fā)射光譜定量分析：物質(zhì)的低溶液濃度熒光（發(fā)射光）強(qiáng)度特點(diǎn)：靈敏度高(10-10～10-12g/mL)；專屬性好適于低濃度溶液分析（自熄滅）干擾因素多（空白試驗(yàn)）衍生后測(cè)定（利血平）熒光分光光度法正比關(guān)系2024/3/1932Cx=Rx－RxbRr－Rrb×Cr藥物的濃度與相應(yīng)的熒光讀數(shù)之間的線性范圍較窄，故(Rx－Rxb)/(Rr－Rrb)應(yīng)在0.5～2測(cè)定方法對(duì)照品對(duì)照法:配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，相同條件下測(cè)定兩者及其空白的熒光強(qiáng)度測(cè)定前，常用基準(zhǔn)溶液（硫酸奎寧、藍(lán)色熒光）校正儀器靈敏度2024/3/1933測(cè)定呈原子狀態(tài)的金屬元素和部分非金屬元素定量分析：測(cè)定該特征譜線輻射光強(qiáng)度減弱的程度，求出供試品中待測(cè)元素的含量特點(diǎn)：靈敏度高、專屬性好測(cè)定方法：標(biāo)準(zhǔn)曲線法、標(biāo)準(zhǔn)加入法

原子吸收分光光度法2024/3/1934特點(diǎn)：高靈敏度、高專屬性、分析速度快適用于藥物制劑或復(fù)雜樣品高效液相色譜法（HPLC）氣相色譜法（GC）第四節(jié)色譜分析法分離分析方法2024/3/1935

類型特點(diǎn)HPLCGC分離效能高（理論板數(shù)n）104～105填充柱>103毛細(xì)管柱=106分析速度快幾分鐘～幾十分鐘幾分鐘～幾十分鐘靈敏度高（最小檢出量）UVD10-9gFD10-13gTCD10-8gFID10-13g適用范圍寬80%有機(jī)化合物20%有機(jī)化合物儀器化程度高智能化智能化絕大部分藥物2024/3/1936固定相、流動(dòng)相及檢測(cè)器的選擇常用系統(tǒng)（反相體系RP-HPLC）固定相：非極性色譜柱流動(dòng)相：極性溶劑檢測(cè)器：紫外吸收檢測(cè)器適用于中等極性、弱極性的藥物高效液相色譜法2024/3/1937應(yīng)用情況HPLC法是藥物制劑、多組分樣品分析的首選方法，是各國(guó)藥典收載的方法中應(yīng)用最廣的方法在原料藥的含量測(cè)定中，HPLC法主要用于多組分抗生素或生化藥品，或因所含雜質(zhì)干擾測(cè)定的化學(xué)品種。如：慶大霉素的組分測(cè)定，

-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類等抗生素甾體激素類藥物2024/3/1938色譜柱：十八烷基及其他化學(xué)鍵合硅膠結(jié)構(gòu)示意圖蒲公英圖2024/3/1939分析型色譜柱最常用：C18/ODS、C8內(nèi)徑：4.6mm長(zhǎng)度：15mm、25mm柱填料粒度：2～10μmpH：2~82024/3/1940流動(dòng)相：極性溶劑過濾脫氣多元體系緩沖鹽甲醇-水乙腈-水四氫呋喃-水2024/3/1941流動(dòng)相選擇調(diào)洗脫力強(qiáng)弱：四氫呋喃

乙腈

甲醇

水用過緩沖鹽或酸堿流動(dòng)相后，色譜柱必須用低濃度甲醇溶液沖洗，再用甲醇沖洗例如

×乙腈（30）乙腈-甲醇(15:15)乙腈-四氫呋喃(15:15)2024/3/1942燈室流通池檢測(cè)器

紫外檢測(cè)器（UVD最常用）、二極管陣列（DVD）、以及熒光、電化學(xué)、示差折光、蒸發(fā)光散射（ELSD）和質(zhì)譜檢測(cè)器（MS）紫外檢測(cè)器外觀圖2024/3/1943系統(tǒng)適用性試驗(yàn)★

理論板數(shù)（n）分離度（R）重復(fù)性（RSD）拖尾因子（T）√√√√用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整2024/3/19441）色譜柱的理論板數(shù)（n）

n值越大柱效越高，應(yīng)高于規(guī)定的最小理論板數(shù)tR

保留時(shí)間Wh/2

半高峰寬2024/3/19452）分離度（R）

R值越大分離效果越好

在規(guī)定的條件下，注入對(duì)照液或供試液，記錄色譜圖，計(jì)算待測(cè)峰（定量峰）與相鄰峰的分離度，應(yīng)大于1.5。

=2024/3/1946

3）重復(fù)性

考察測(cè)量的精密度在規(guī)定條件下，取一定量的對(duì)照液，連續(xù)進(jìn)樣3～5次，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不大于2.0％。系統(tǒng)的精密度：每次開機(jī)后，首先要做的日常工作，不能作為分析方法學(xué)研究中的精密度試驗(yàn)2024/3/1947份號(hào)12345A20617.2519663.0719543.3020412.4119254.30

例題取某對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄各次色譜峰峰面積如下，試判斷色譜系統(tǒng)重復(fù)性是否符合規(guī)定。X=19898.1S=586.789RSD=2.9%不符合規(guī)定—2024/3/1948

4）拖尾因子（T）

考察色譜峰的對(duì)稱性

T值越接近于1.0色譜峰的對(duì)稱性越好，測(cè)量的準(zhǔn)確度越高。T應(yīng)在0.95～1.05之間。W0.05h為0.05峰高處的峰寬d1為峰極大至峰前沿之間的距離為滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，可以改變一些條件，如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、組成比例、柱溫等，但不能改變固定相種類，流動(dòng)相組成和檢測(cè)器類型2024/3/1949組成復(fù)雜、多成分內(nèi)標(biāo)法需要內(nèi)標(biāo)物外標(biāo)法對(duì)照品能夠精確進(jìn)樣量面積歸一化法所有組分都出峰測(cè)定方法2024/3/1950被測(cè)成分與其峰面積成正比關(guān)系要求供試液與對(duì)照液濃度相近（相同條件）=A供A對(duì)C供Ｃ對(duì)供試C供=C對(duì)×A供A對(duì)對(duì)照

外標(biāo)法含量計(jì)算公式同紫外如：某注射液規(guī)格0.5mg/mL，精密量取1mL，配制成100mL——供試液對(duì)照品用相同溶劑配制成5g/mL——對(duì)照液2024/3/1951外標(biāo)法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法）

繪制對(duì)照液濃度－峰面積(峰高)標(biāo)準(zhǔn)曲線；擬合回歸方程并計(jì)算擬合常數(shù)；測(cè)定供試品峰面積(峰高)，帶入方程，求濃度。2024/3/1952▲選擇適宜的物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，以待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物的峰高比或峰面積比求算試樣含量的方法稱為內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是選擇合適的內(nèi)標(biāo)物▲校正因子（f）其含義為：內(nèi)標(biāo)物峰面積與其濃度之比（As/Cs）是對(duì)照品峰面積與其濃度之比（AR/CR）的多少倍f=As/CsAR/CR內(nèi)標(biāo)加校正因子法2024/3/1953對(duì)照+內(nèi)標(biāo)樣品+內(nèi)標(biāo)供試內(nèi)標(biāo)對(duì)照內(nèi)標(biāo)C供

=f·A供/(A’內(nèi)/C內(nèi))校正因子f=(A內(nèi)/C內(nèi))/(A對(duì)/C對(duì))校正因子f=(A內(nèi)’/C內(nèi))/(A供/C供)2024/3/1954醋酸氫化可的松的含量測(cè)定取對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇定量稀釋成每1mL中約含0.35mg的溶液。精密量取該溶液和內(nèi)標(biāo)溶液（精密稱取30.0mg，配制成0.30mg/mL炔諾酮甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取10

L注入液相色譜儀。另取本品適量，同法測(cè)定，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量。5221345/61228455467824/612584336.2mg35.5mg××100%=97.4%例子已知：對(duì)照品取樣36.2mg，樣品取樣35.5mg，測(cè)得對(duì)照液中醋酸氫