細胞工程講義-2023年高考生物二輪復習訓練（新教材）

解密23細胞工程

考點熱度★★★★★

名容易錯解密

1.植物的每個細胞在植物體內和體外都能表現(xiàn)出細胞的全能性。（X）

分析:只有離體的植物細胞才能表現(xiàn)出全能性。

2.利用物理法或化學法可以直接將兩個植物細胞進行誘導融合?（×）

分析:植物細胞只有去掉細胞壁才能誘導融合

3.再生出細胞壁是原生質體融合成功的標志。（√）

4.制備肝細胞懸液時先用剪刀剪碎肝組織,再用胃蛋白酶處理。（X）

分析:動物細胞分散細胞時用胰蛋白酶處理,胃蛋白酶適合在強酸性環(huán)境中發(fā)揮作用。

5.肝細胞培養(yǎng)過程中通常在培養(yǎng)液中通入5%的C02刺激細胞呼吸。（X）

分析:5%的二氧化碳的作用是維持培養(yǎng)液pHo

6.克隆動物的性狀與供體動物不完全相同。（√）

7.與“多利”羊等克隆哺乳動物相關的技術有胚胎移植、動物細胞培養(yǎng)和核移植技術。（√）

8.雜交瘤細胞進行體內培養(yǎng),是為了獲得能產(chǎn)生單克隆抗體的胚胎。（X）

分析:雜交瘤細胞進行體內培養(yǎng)是為了獲得大量單克隆抗體。

9.B淋巴細胞和骨髓瘤細胞經(jīng)細胞融合后有三種細胞類型（若僅考慮兩兩融合的情況）。（√）

10.胚胎分割移植實現(xiàn)同卵多胎的成功率較低。（√）

11.胚胎分割時需將原腸胚的內細胞團均等分割。（X）

分析:胚胎分割時需將囊胚期的內細胞團均等分割。

12.雄性動物剛剛排出的精子并不具有受精能力,必須獲能后才具備受精能力。（√）

13.胚胎干細胞在體外培養(yǎng)條件下具有增殖而不發(fā)生分化的特點.（√）

14.胚胎干細胞具有細胞核大、核仁小和蛋白質合成旺盛等特點。（X）

分析:胚胎干細胞核仁較為明顯。

15.胚胎干細胞在分化誘導因子的作用下可以向不同類型的組織細胞分化。（√）

16.中國政府禁止生殖性克隆,但不反對治療性克隆。（√）

乍醇易混解密

I易混1A:脫分化和再分化都需要在光照下進行。（X）

B:再分化需要一定的光照條件誘導葉綠素和葉綠體的形成。N）

A:誘導細胞融合的目的是獲得雜交個體。（X）

________________________________________________________________________

易混2

B:動物細胞融合主要應用于單克隆抗體的制備。（X）

_____________

A:可以向動物體中反復注射某種抗原獲得大量單克隆抗體。(X)

易混3B:單克隆抗體是單個B淋巴細胞經(jīng)過克隆化培養(yǎng)后獲得化學性質單一、特異性

強的抗體。N）

A:動物體細胞核移植比胚胎細胞核移植成功率低。N）

易混4

B:分化程度較低的胚胎細胞細胞核的全能性相對較低。（X）

【對點解密】

1.比較植物組織培養(yǎng)與動物細胞培養(yǎng):

項目植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)

取材植物幼嫩部位動物胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織

「高物胚而幼藍1

;動物的組織、器官i

K_________________?

剪碎胰蛋白酶

再南東處理

脫:單個細胞j

分

化］力西養(yǎng)液

:愈傷組織二；胚狀體:

、

一

二一?'原代培養(yǎng)11~10代

再和

過程分

光Zll種

化照胚?≡?????']

一皮

乳

一11-50

日式管苗等［人工種子，傳代培養(yǎng)

代左右

移I栽j一…舒芬細庖曲……：

f??>——;細胞核型發(fā)生變化：

傳代培養(yǎng)〔50代后

：細胞獲得不死性：

;（遺傳物質發(fā)生改變）I

結果獲得完整植株個體,可以體現(xiàn)全能性獲得新的細胞,不形成個體,無法體現(xiàn)全能性

①無菌①無菌、無毒

②營養(yǎng)物質②營養(yǎng)物質

條件

③適宜條件③適宜的溫度和PH

④植物激素④氣體環(huán)境：。2、CO2

①植株快速繁殖

①蛋白質生物制品的生產(chǎn)

②脫毒植株的培養(yǎng)

②皮膚移植材料的培育

應用③人工種子

③檢測有毒物質

④生產(chǎn)藥物、殺蟲劑等

④生理、病理、藥理等方面的研究

⑤轉基因植物的培育

2.明確克隆動物培育流程:

雌性動

卵

物卵母/。0

◎蜴。、融合

細胞鬻漏早期.A雌性

胚胎動I物

分娩I

注射）細胞

新個體

3.比較植物體細胞雜交與動物細胞融合:

項目植物體細胞雜交動物細胞融合

細胞膜的流動性、

原理細胞膜的流動性

細胞的全能性

細胞A、B

I去壁

細胞A、B

原生質體A、B

［融合

］融合

雜交細胞

過程融合的原生質體

］有絲分裂

i

多個相同

雜種細胞

雜交細胞

I植物組

I織培養(yǎng)

雜種植株

相關酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶

融合物理法:離心、電激、振動；除物理法和化學法外,還可以用滅活的病毒

方法化學法:聚乙二醇等試劑誘導誘導

結果雜種植株雜交細胞

意義克服了遠緣雜交的不親和性,獲得雜種植株突破了有性雜交方法的局限,使遠緣雜交成

為可能

4.記憶單克隆抗體的制備過程及其特點:

(1)制備過程:

滅活

給小鼠注從脾臟中病毒

未融合細

射特定的分離B淋巴誘導

胞、同種融

細胞一

抗原蛋白融合

合細胞、雜

提取骨髓擴大一骨??■瘤'交瘤細胞

瘤細胞I培養(yǎng)［嚶一I篩

I選

薪青「體內培養(yǎng)、產(chǎn)生特定

抗體版蒲

抗體IL體外培養(yǎng)」—捶住的雜

檢測細胞

交瘤細胞

(2)單克隆抗體的特點：

特異性強、靈敏度高、可大量制備。

5.記住早期胚胎發(fā)育過程：

受精卵分裂方式：有絲分裂

分裂特點：只分裂、不生長,每個細

胞體積逐漸變小,總體積

卵裂

基本不變

卵裂形成的細胞數(shù)目達到32個左右時

(桑相胚二

的胚胎,每個細胞都屬于錘細胞

I組成:內細胞團、港卷屋細胞、囊

?H胚腔

特點:細胞已分化，內細胞團將來

_I發(fā)育為胎兒的各種組織

(原腸胚卜-出現(xiàn)三個胚層和原腸腔

6.熟知胚胎工程的操作流程:

(1)胚胎移植過程中兩次使用激素,第一次常用生邀素對供、受體進行同期發(fā)情處理:第二次用促性腺激素對

供體做超數(shù)排卵處理。

(2)胚胎移植過程中的兩次檢查:第一次對收集的胚胎進行檢查:第二次對受體母畜是否妊娠進行檢查。

(3)胚胎移植是有性生殖還是無性生殖,取決于胚胎是由受精卵形成的(有性生殖),還是由核移植技術形成的

重組細胞發(fā)育而成或胚胎分割形成的(無性生殖)。

7.試管嬰兒和設計試管嬰兒：

(1)設計試管嬰兒比試管嬰兒多出的是過程④(填序號)。

(2)試管嬰兒主要是解決不孕夫婦的生育問題;設計試管嬰兒用于白血病、貧血癥等疾病的治療。

(3)兩者都需體外受精,并進行體外早期胚胎培養(yǎng).都要經(jīng)過胚胎移植,都是有性生殖。

8.轉基因生物的安全性問題：

(1)食物安全方面:可能合成毒蛋白、出現(xiàn)新的過敏原、改變食物的營養(yǎng)成分等。

(2)生物安全方面:有可能造成“基因污染”,危害生物的多樣性。

(3)環(huán)境安全方面:有可能打破物種的原有界限,改變生態(tài)系統(tǒng)的能量流動和物質循環(huán);造成二次污染或產(chǎn)生

危害動植物和人類的病原微生物。

2［考法解密］

［典例分析1】（2020?山東等級考）經(jīng)遺傳改造的小鼠胚胎干細胞注入囊胚,通過胚胎工程的相關技術可以獲

得具有不同遺傳特性的實驗小鼠。下列說法錯誤的是（）

A.用促性腺激素處理雌鼠可以獲得更多的卵子

B.體外受精前要對小鼠的精子進行獲能處理

C.胚胎移植前要檢查胚胎質量并在囊胚或原腸胚階段移植

D.遺傳改造的小鼠胚胎干細胞可以通過轉基因等技術獲得

【信息提取與轉化】

關鍵信息轉化成解題突破口

用促性腺激選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體,有健康的體質和正常繁殖能力的受體。供體和受

素處理雌鼠體是同一物種,并用激素進行同期發(fā)情處理,用促性腺激素對供體母牛做超數(shù)排卵處理。

體外受精體外受精主要包括:卵母細胞的采集和培養(yǎng)、精子的采集和獲能、受精過程。

胚胎移植的基本程序：對供、受體的選擇和處理一配種或人工授精T對胚胎的收集、

胚胎移植

檢查、培養(yǎng)或保存一對胚胎進行移植一移植后的檢查。

【答案】C

【解析】本題主要考查胚胎工程。為了獲得更多卵子,需要用促性腺激素對雌性個體進行超數(shù)排卵,A項正

確;剛排出的精子不能與卵子受精,必須進行獲能處理即發(fā)生相應的生理變化后才能獲得受精能力,因此在體

外受精前要對小鼠的精子進行獲能處理,B項正確;胚胎移植前要檢查胚胎質量,一般動物在桑根胚或囊胚階

段移植,C項錯誤;可以通過轉基因技術對小鼠胚胎干細胞進行遺傳改造,D項正確。

【典例分析2】（2021?浙江等級考節(jié)選）斑馬魚是一種模式動物,體外受精發(fā)育,胚胎透明、便于觀察,可用于

水質監(jiān)測,基因功能分析以及藥物毒性與安全性評價等。請回答：

（1）由于人類活動產(chǎn)生的生活污水日益增多,大量未經(jīng)處理的污水直接排入河流、湖泊會引起水體,導

致藻類大量繁殖形成水華。取水樣喂養(yǎng)斑馬魚,可用斑馬魚每周的體重和死亡率等指標監(jiān)測水體污染程度。

（2）為了研究某基因在斑馬魚血管發(fā)育過程中的分子調控機制,用DNA連接醐將該基因連接到質粒載體形

成,導入到大腸桿菌菌株DH5α中。為了能夠連接上該目的基因、并有利于獲得含該目的基因的

DH5a陽性細胞克隆,質粒載體應含有（答出2點即可）。提取質粒后,采用法,將該基因導入

到斑馬魚受精卵細胞中,培養(yǎng)并觀察轉基因斑馬魚胚胎血管的發(fā)育情況。

（3）為了獲取大量斑馬魚胚胎細胞用于藥物篩選,可用分散斑馬魚囊胚的內細胞團,取分散細胞作為初

始材料進行培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶中添加成纖維細胞作為,以提高斑馬魚胚胎細胞克隆的形成率。

【信息提取與轉化】

關鍵信息轉化成已有知識

當水體中富含N、P等無機物時,水體富含營養(yǎng)化,導致大量藻類繁殖。在淡水中形成水華

水華現(xiàn)象

現(xiàn)象,在海洋中造成赤潮現(xiàn)象。

質粒作為基因工程的常用載體,需要與目的基因連接,并將含有目的基因的受體細胞篩選

基因工程

出來。其有與目的基因兩側相同的限制酶切割序列,其中的標記基因的表達有利于篩選出

常用載體

已成功導入目的基因的受體細胞。

動物細動物細胞培養(yǎng)需要將動物組織用胰蛋白酶處理分散為單個細胞,先進行原代培養(yǎng)。當細胞

胞培養(yǎng)出現(xiàn)接觸抑制后再進行傳代培養(yǎng)。

【解析】(1)生活污水流入會導致水體含大量無機鹽,稱為富營養(yǎng)化。

(2)目的基因連接到質粒載體形成重組DNA分子。質粒載體應含有限制性核酸內切酶的識別序列以便切割,

含有抗生素抗性基因以便篩選含目的基因的細胞。將目的基因導入動物受精卵細胞采用顯微注射法。

(3)用胰蛋白酶分散動物細胞,從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞,初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng),培養(yǎng)瓶中

添加成纖維細胞作為飼養(yǎng)層細胞,以維持細胞不分化。

【答案】(1)富營養(yǎng)化

(2)重組DNA分子限制性核酸內切醐的識別序列、抗生素抗性基因顯微注射

(3)胰蛋白酶原代飼養(yǎng)層細胞

C【變式解密】

【真題探究1](2021福建)科研人員利用植物體細胞雜交技術培育矮牽牛新品種，技術流程示意圖如下。

下列敘述正確的是()

A.愈傷組織是幼嫩葉片通過細胞分化形成的

B.獲得的雜種植株都能表現(xiàn)雙親的優(yōu)良性狀

C.可用聚乙二醇誘導原生質體甲和乙的融合和細胞壁再生

D.用纖維素酶和果膠酶處理愈傷組織以獲得原生質體

【答案】D

【解析】

【分析】分析題圖：首先用酶解法去壁，一般使用纖維素酶和果膠酶處理；然后誘導原生質體融合，采用

的方法一般包括物理法（離心、振蕩、電激）、化學法（用聚乙二醉處理）；培養(yǎng)融合的原生質體再生出新

的細胞壁，形成雜種細胞。然后雜種細胞經(jīng)過植物組織培養(yǎng)技術可以培養(yǎng)形成雜種植株。

【詳解】A、愈傷組織是幼嫩葉片通過細胞脫分化形成的，A錯誤；

B、由于基因的選擇性表達和基因間的互作效應，獲得的雜種植株不一定能夠表現(xiàn)親本的優(yōu)良性狀，B錯

誤；

C、可用聚乙二醇誘導原生質體甲和乙的融合，但不能誘導細胞壁的再生，C錯誤；

D、山于植物細胞壁的成分主要是纖維素和果膠，故可以用纖維素酶和果膠酶處理愈傷組織以獲得原生質

體，D正確。

故選D。

【真題探究2］（2021?l月浙江選考）下圖為動物成纖維細胞的培養(yǎng)過程示意圖。下列敘述正確的是（）

①切取組織②制備細胞懸浮液③原代培養(yǎng)④傳代培養(yǎng)

A.步驟①的操作不需要在無菌環(huán)境中進行

B.步驟②中用鹽酸溶解細胞間物質使細胞分離

C.步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理

D.步驟④培養(yǎng)過程中不會發(fā)生細胞轉化

【答案】C

【分析】

動物細胞培養(yǎng)過程：取動物組織塊一剪碎組織一用胰蛋白酶處理分散成單個細胞T制成細胞懸液一轉入培

養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）一放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)T貼滿瓶壁的細胞用醐分散為單個細胞，制成細胞懸液一

轉入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）T放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

【詳解】

A、動物細胞培養(yǎng)過程需要無菌操作，故步驟①的操作需要在無菌環(huán)境中進行，A錯誤；

B、動物細胞培養(yǎng)過程需要用胰蛋白醐或膠原蛋白酣處理動物組織，分散成單個細胞，制成細胞懸液，B

錯誤；

C、傳代培養(yǎng)時需要用胰蛋白酶處理貼壁生長的細胞，使之分散成單個細胞，再分瓶培養(yǎng)，C正確；

D、步驟④為傳代培養(yǎng)過程，該過程中部分細胞可能發(fā)生細胞轉化，核型改變，D錯誤。

故選C。

【真題探究3］（2021遼寧）下圖是利用體細胞核移植技術克隆優(yōu)質奶牛的簡易流程圖，有關敘述正確的

是（）

重組胚胎箜?代T牛

乙牛生出后代丁牛

A.后代丁的遺傳性狀由甲和丙的遺傳物質共同決定

B.過程①需要提供95%空氣和5%CO2的混合氣體

C.過程②常使用顯微操作去核法對受精卵進行處理

D.過程③將激活后的重組細胞培養(yǎng)至原腸胚后移植

【答案】B

【解析】

【分析】分析圖解：圖示過程為體細胞克隆過程，取乙牛體細胞，對處于減數(shù)第二次分裂中期的卵母細胞

去核，然后進行細胞核移植：融合后的細胞激活后培養(yǎng)到早期胚胎，再進行胚胎移植，最終得到克隆牛。

【詳解】A、后代丁的細胞核的遺傳物質來自甲，細胞質的遺傳物質來自于乙牛，則丁的遺傳性狀由甲和

乙的遺傳物質共同決定，A錯誤；

B、動物細胞培養(yǎng)中需要提供95%空氣（保證細胞的有氧呼吸）和5%Co2（維持培養(yǎng)液的PH）的混合氣

體，B正確；

C、過程②常使用顯微操作去核法對卵母細胞進行處理，C錯誤；

D、過程③將激活后的重組細胞培養(yǎng)至囊胚或桑根胚后移植，D錯誤。

故選B。

【真題探究4］（2021山東高考15）一個抗原往往有多個不同的抗原決定簇，一個抗原決定簇只能刺激機體

產(chǎn)生一種抗體，由同一抗原刺激產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。將非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72注入小鼠體

內，可利用該小鼠的免疫細胞制備抗p72的單抗，也可以從該小鼠的血清中直接分離出多抗。下列說法

正確的是（）

A.注入小鼠體內的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響大

B.單抗制備過程中通常將分離出的漿細胞與骨髓瘤細胞融合

C.利用該小鼠只能制備出一種抗p72的單抗

D.p72部分結構改變后會出現(xiàn)原單抗失效而多抗仍有效的情況

【答案】D

【解析】根據(jù)題干信息“一個抗原往往有多個不同的抗原決定簇，一個抗決定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗

體”，非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72上有多個抗原決定簇，所以可以刺激機體產(chǎn)生多種抗體。每個抗原決定

簇刺激產(chǎn)生的抗體是單抗。單抗的制作需要篩選，而多抗不需要篩選，抗原純度越高，產(chǎn)生的多抗純度越

高，因此原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響小，A錯誤；單抗制備過程中通常將分離出的B淋巴

細胞與骨髓瘤細胞融合，B錯誤；

非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72上有多種抗原決定簇，一個抗決定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體，所以向小

鼠體內注入p72后，可以刺激小鼠產(chǎn)生多種抗p72的單抗，C錯誤；p72部分結構改變只改變了部分抗原決

定簇，因此由這部分抗原決定簇產(chǎn)生的抗體失效，但由于還存在由其他抗原決定簇刺激機體產(chǎn)生的抗體，

所以多抗仍有效，D正確。

【真題探究5］（2020?山東等級考?T13）兩種遠緣植物的細胞融合后會導致一方的染色體被排出。若其中一

個細胞的染色體在融合前由于某種原因斷裂,形成的染色體片段在細胞融合后可能不會被全部排出,未排出

的染色體片段可以整合到另一個細胞的染色體上而留存在雜種細胞中。依據(jù)該原理,將普通小麥與耐鹽性強

的中間偃麥草進行體細胞雜交獲得了耐鹽小麥新品種,過程如下圖所示。下列說法錯誤的是（）

普通小麥_?.普通小麥

細胞――原生質體、③雜種培雜種篩耐#

中間偃麥巫中間偃麥草χ2一"細胞養(yǎng)植株苗小麥

草細胞原生質體

不同劑量的-?j

紫外線照射

A.過程①需使用纖維素酶和果膠酶處理細胞

B.過程②的目的是使中間偃麥草的染色體斷裂

C.過程③中常用滅活的病毒誘導原生質體融合

D.耐鹽小麥的染色體上整合了中間偃麥草的染色體片段

【答案】C

【解析】本題主要考查植物體細胞雜交技術。由題圖信息可知,①為細胞去掉細胞壁獲得原生質體的過程,

去掉細胞壁一般用纖維素醒和果膠酶處理細胞,A項正確;兩種遠緣植物的細胞融合后會導致一方的染色體

被排出,需要將中間偃麥草細胞染色體斷裂,所以②為用不同劑量的紫外線照射斷裂中間偃麥草細胞的染色

體,B項正確;圖中③為兩種原生質體的融合,常用融合手段為物理法和化學法,滅活的病毒通常用來融合動物

細胞,C項錯誤;普通小麥不具有耐鹽性狀,因此篩選出的耐鹽小麥中控制耐鹽性狀的基因來自中間偃麥草的

染色體片段,D項正確。

【真題探究6］（2020?山東等級考?T14）經(jīng)遺傳改造的小鼠胚胎干細胞注入囊胚,通過胚胎工程的相關技術可

以獲得具有不同遺傳特性的實驗小鼠。下列說法錯誤的是（）

A.用促性腺激素處理雌鼠可以獲得更多的卵子

B.體外受精前要對小鼠的精子進行獲能處理

C胚胎移植前要檢查胚胎質量并在囊胚或原腸胚階段移植

D.遺傳改造的小鼠胚胎干細胞可以通過轉基因等技術獲得

【答案】C

【解析】本題主要考查胚胎工程。為了獲得更多卵子,需要用促性腺激素對雌性個體進行超數(shù)排卵,A項正

確;剛排出的精子不能與卵子受精,必須進行獲能處理即發(fā)生相應的生理變化后才能獲得受精能力,因此在體

外受精前要對小鼠的精子進行獲能處理,B項正確;胚胎移植前要檢查胚胎質量,一般動物在桑棋胚或囊胚階

段移植,小鼠可在更早的階段移植,C項錯誤;可以通過轉基因技術對小鼠胚胎干細胞進行遺傳改造,D項正確。

【真題探究7](2022?全國甲卷?高考真題)某牧場引進一只產(chǎn)肉性能優(yōu)異的良種公羊，為了在短時間內獲

得具有該公羊優(yōu)良性狀的大量后代，該牧場利用胚胎工程技術進行了相關操作。回答下列問題，

(1)為了實現(xiàn)體外受精需要采集良種公羊的精液，精液保存的方法是o在體外受精前要對精子

進行獲能處理，其原因是;精子體外獲能可采用化學誘導法，誘導精子獲能的藥物是

(答出1點即可)。利用該公羊的精子進行體外受精需要發(fā)育到一定時期的卵母細胞，因為卵

母細胞達到時才具備與精子受精的能力。

(2)體外受精獲得的受精卵發(fā)育成囊胚需要在特定的培養(yǎng)液中進行，該培養(yǎng)液的成分除無機鹽、激素、血清

外，還含的營養(yǎng)成分有(答出3點即可)等。將培養(yǎng)好的良種囊胚保存?zhèn)溆谩?/p>

(3)請以保存的囊胚和相應數(shù)量的非繁殖期受體母羊為材料進行操作，以獲得具有該公羊優(yōu)良性狀的后代。

主要的操作步驟是o

【答案】(1)冷凍保存剛排出的精子必須在雌性生殖道內發(fā)生相應生理變化后才能獲得受精能

力肝素或鈣離子載體A23187MH中期

(2)維生素、氨基酸、核甘酸

(3)時受體母羊進行發(fā)情處理，將保存的囊胚進行胚胎移植，對受體母羊進行是否妊娠的檢查，一段時間后

受體母羊產(chǎn)卜具有該公羊優(yōu)良性狀的后代

【解析】

【分析】

試管動物技術是指通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精，并通過培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，

再經(jīng)移植后產(chǎn)生后代的技術。

(1)精液可以冷凍保存，使用前再將精液解凍離心分離。剛排出的精子必須在雌性生殖道內發(fā)生相應生理變

化后才能獲得受精能力，故在體外受精前要對精子進行獲能處理。通常采用的體外獲能方法有培養(yǎng)法和化

學誘導法，化學誘導法是將精子放在一定濃度的肝素或鈣離子載體A23187溶液中，用化學藥物誘導精子

獲能。卵母細胞需要培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期（Mn中期）才能具備與精子受精的能力。

（2）進行早期胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)液中，除了無機鹽、激素、血清外，還含有維生素、氨基酸、核甘酸等。

（3）要利用保存的囊胚和相應數(shù)量的非繁殖期受體母羊為材料，獲得具有該公羊優(yōu)良性狀的后代，主要是利

用胚胎移植技術，即對受體母羊進行發(fā)情處理，將保存的囊胚進行胚胎移植，對受體母羊進行是否妊娠的

檢查，一段時間后受體母羊產(chǎn)下具有該公羊優(yōu)良性狀的后代。

【真題探究8］（2021?湖南高考真題）M基因編碼的M蛋白在動物A的肝細胞中特異性表達。現(xiàn)設計實

驗，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術獲得M基

因失活的轉基因克隆動物A,流程如圖所示。回答下列問題：

T?

成纖維細胞去核卵母細胞

I核移植

［胚胎培養(yǎng)

早期胚胎

!胚胎移植

代孕母親

1

克隆動物A

（1）在構建含有片段F的重組質粒過程中，切割質粒DNA的工具酶是,這類酶能將特定部位

的兩個核甘酸之間的斷開。

（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進行動物A成纖維細胞的原代和傳代培養(yǎng)時，需要定期更換培養(yǎng)液，目

的是0

（3）與胚胎細胞核移植技術相比，體細胞核移植技術的成功率更低，原因是?從早期胚胎中分

離獲得的胚胎干細胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為（答出兩點即可），功能上具有。

（4）鑒定轉基因動物：以免疫小鼠的淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合，篩選融合雜種細胞，制

備M蛋白的單克隆抗體。簡要寫出利用此抗體確定克隆動物A中M基因是否失活的實驗思路。

【答案】（1）限制性核酸內切醐（限制酶）磷酸二酯鍵

（2）清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害

（3）動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易，動物體細胞分化程度高，恢復其全能性卜分困

難細胞體積小，細胞核大，核仁明顯（任選兩點作答）發(fā)育的全能性

（4）B用特定抗原刺激小鼠，然后取出已免疫的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，看篩選出雜交瘤細胞

能否產(chǎn)生M蛋白的單克隆抗體，如果不能產(chǎn)生，說明M基因在克隆動物A中己失活

【分析】

1、基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成；

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標

記基因等；

（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的

方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；

將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法；

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因

-DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA-分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成

蛋白質-抗原-抗體雜交技術，個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

2、核移植:

（1）概念：將動物的一個細胞的細胞核移入一個己經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個

新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物；

（2）原理：動物細胞核的全能性；

（3）動物細胞核移植可分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植。體細胞核移植的難度明顯高于胚胎細胞核

移植。原因：動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易，動物體細胞分化程度高，恢復其全能性

十分困難。

【詳解】

（1）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸內切酶（限制酶），故在構建含有片段F的重組質粒過

程中，切割質粒DNA的工具酶是限制性核酸內切酶（限制酶）。限制性內切核酸內切酶是作用于其所識別

序列中兩個脫氧核苜酸之間的磷酸二酯鍵。不同的限制酶可以獲得不同的末端，主要分為黏性末端和平末

端。

（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進行動物A成纖維細胞的原代和傳代培養(yǎng)時，需要定期更換培養(yǎng)液，目

的是清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害。

（3）由于動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易，動物體細胞分化程度高，恢復其全能性十

分困難，故與胚胎細胞核移植技術相比，體細胞核移植技術的成功率低。胚胎干細胞在形態(tài)上表現(xiàn)為細胞

體積小，細胞核大，核仁明顯；在功能上具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動物體內任何一種組織細胞。

另外，在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，可進行冷凍保存，也可進行遺傳改造。

（4）先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B

細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，制備M蛋白的單克隆抗體；若要利用此抗體

確定克隆動物A中M基因是否失活，如果M基因已經(jīng)失活，則克隆動物A中無法產(chǎn)生M蛋白的單克隆

抗體，則可利用抗原一抗體雜交技術進行檢測。用特定抗原刺激小鼠，然后取出已免疫的B淋巴細胞與骨

髓瘤細胞融合，看篩選出雜交瘤細胞能否產(chǎn)生M蛋白的單克隆抗體，如果不能產(chǎn)生，說明M基因在克隆

動物A中已失活。

【點睛】

本題結合圖示考查基因工程、核移植、胚胎移植、單克隆抗體的相關知識，涉及知識點較多，但難度不大，

要求考生掌握基礎知識，屬于考綱中識記與理解層次。

【真題探究9］（2021?l月浙江高考真題）回答下列（二）小題：

（二）三葉青為蔓生的藤本植物，以根入藥。由于野生三葉青對生長環(huán)境要求非?？量?，以及生態(tài)環(huán)境的

破壞和過度的采挖，目前我國野生三葉青已十分珍稀。

（1）為保護三葉青的多樣性和保證藥材的品質，科技工作者依據(jù)生態(tài)工程原理，利用

技術，實現(xiàn)了三葉青的林下種植。

（2）依據(jù)基因工程原理，利用發(fā)根農(nóng)桿菌侵染三葉青帶傷口的葉片，葉片產(chǎn)生酚類化合物，誘導發(fā)根農(nóng)

桿菌質粒上Vir系列基因表達形成和限制性核酸內切酶等，進而從質粒上復制并切割出一段可轉

移的DNA片段（T-DNA）。T-DNA進入葉片細胞并整合到染色體上，T-DNA上系列基因表達，產(chǎn)生相

應的植物激素，促使葉片細胞持續(xù)不斷地分裂形成,再分化形成毛狀根。

（3）剪取毛狀根，轉入含頭胞類抗生素的固體培養(yǎng)基上進行多次培養(yǎng)，培養(yǎng)基中添加抗生素的

主要目的是。最后取毛狀根轉入液體培養(yǎng)基、置于搖床上進行懸浮培養(yǎng)，通過控制搖床的

和溫度，調節(jié)培養(yǎng)基成分中的,獲得大量毛狀根，用于提取藥用成分。

【答案】（二