新藥評(píng)價(jià)課件

GLPGLP是英文GoodLaboratoryPracticeforNonclinicalSafetyStudies的縮寫(xiě)，根據(jù)其內(nèi)容，可譯為藥品非臨床研究質(zhì)量規(guī)范GLP產(chǎn)生的歷史60年代震驚世界的“反應(yīng)停”事件1972,

1973年，新西蘭、丹麥?zhǔn)紫冗M(jìn)行了GLP立法其它藥害事件30年代，美國(guó)“磺胺酏劑”

50年代，法國(guó)的“有機(jī)錫”60年代，日本的“氯碘喹林”等等 GLP產(chǎn)生的歷史美國(guó)FDA對(duì)幾個(gè)安全性評(píng)價(jià)研究實(shí)驗(yàn)室檢查，發(fā)現(xiàn)存在許多問(wèn)題。主要有：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不充分，實(shí)施不仔細(xì)，分析、報(bào)告不準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)記錄不及時(shí)、準(zhǔn)確，不完整，原始記錄及受試樣品的保存欠妥當(dāng)沒(méi)有實(shí)施保證數(shù)據(jù)可靠的質(zhì)量保證工作，也沒(méi)有適當(dāng)?shù)谋O(jiān)督人員GLP產(chǎn)生的歷史沒(méi)有保證研究人員具有資格并按受培訓(xùn)不注意遵守方案的實(shí)施，動(dòng)物飼養(yǎng)管理、數(shù)據(jù)管理的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）沒(méi)有充分監(jiān)督全部或部分合同實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的研究提交報(bào)告前，未核對(duì)報(bào)告中數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和完整性GLP產(chǎn)生的歷史工業(yè)生物測(cè)試實(shí)驗(yàn)室（IBT）和生物統(tǒng)計(jì)測(cè)試公司的問(wèn)題最嚴(yán)重FDA檢查處理結(jié)果：IBT有4人被控犯詐騙罪FDA審查的66個(gè)研究項(xiàng)目中有24個(gè)無(wú)效檢查結(jié)果促使FDA于1976年11月頒布了GLP法規(guī)GLP產(chǎn)生的歷史1981，國(guó)際經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）制定了GLP原則80年代中，日本、韓國(guó)、瑞士、瑞典、德國(guó)、加拿大、荷蘭等國(guó)家制定了自己的GLPGLP產(chǎn)生的歷史我國(guó)GLP起步于90年代初91－93考察美、英、日等國(guó)的GLP實(shí)驗(yàn)室國(guó)內(nèi)多次專(zhuān)家會(huì)研討93年12月，國(guó)家科委發(fā)布了＜藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)定＞99年10月，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局根據(jù)國(guó)務(wù)院賦予的職能，對(duì)GLP進(jìn)行了修改后重新發(fā)布GLP制定的目的(1)

提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量，避免偶發(fā)變動(dòng)絕對(duì)變動(dòng)人類(lèi)無(wú)法控制的機(jī)體及環(huán)境本身的變動(dòng)如季節(jié)性、性周期、24h節(jié)律、伴隨營(yíng)養(yǎng)成長(zhǎng)變動(dòng)等相對(duì)變動(dòng)實(shí)驗(yàn)處置、操作而產(chǎn)生的肌體反應(yīng)性變動(dòng)如給藥、手術(shù)、實(shí)驗(yàn)感染、禁食等偶發(fā)變動(dòng)偶發(fā)變動(dòng)、沒(méi)有規(guī)律是引起實(shí)驗(yàn)誤差的主要原因動(dòng)物自發(fā)感染、試驗(yàn)操作誤差、藥品調(diào)配及記錄錯(cuò)誤等GLP制定的目的(2)保證原始數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性評(píng)估某一商品的質(zhì)量是憑它的外觀、造型、功能及耐受性。而生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告則不同，其實(shí)體是原始數(shù)據(jù)，只有保證原始數(shù)據(jù)準(zhǔn)確的基礎(chǔ)上，才能保證生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告的質(zhì)量GLP制定的目的(3)提高國(guó)際間安全性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)相互利用率經(jīng)過(guò)近二十年的發(fā)展，GLP已成為國(guó)際間新藥安全性實(shí)驗(yàn)研究共同遵循的法規(guī)。凡在國(guó)際公認(rèn)的GLP實(shí)驗(yàn)室實(shí)施的安全性實(shí)驗(yàn)，加上采用ICH國(guó)際協(xié)調(diào)一致的指導(dǎo)原則，其數(shù)據(jù)具有通用性，這樣節(jié)省了人力、物力及新藥開(kāi)發(fā)時(shí)間，同時(shí)也降低了新藥價(jià)格GLP涉及的范圍范圍：在實(shí)驗(yàn)室條件下,為評(píng)價(jià)藥品安全性,用實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行的各種毒性試驗(yàn)單次給藥的毒性試驗(yàn)反復(fù)給藥的毒性試驗(yàn)三致試驗(yàn)（生殖毒性、致突變、致癌試驗(yàn)）各種刺激性試驗(yàn)依賴(lài)性試驗(yàn)評(píng)價(jià)藥品安全性有關(guān)的其它毒性試驗(yàn)GLP為保證數(shù)據(jù)質(zhì)量所采措施(1)構(gòu)成要素的全體保證人－－－－工作人員、組織機(jī)構(gòu)設(shè)備－－－設(shè)施、設(shè)備、儀器材料－－－實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?、受試物、試劑、飼料、飲用水方法－－－?shí)驗(yàn)方案、SOPGLP為保證數(shù)據(jù)質(zhì)量所采措施(2)文書(shū)化的保證實(shí)驗(yàn)方案、實(shí)驗(yàn)實(shí)施至實(shí)驗(yàn)總結(jié)報(bào)告的全過(guò)程必須以文書(shū)的形式記錄、實(shí)驗(yàn)操作必須以實(shí)驗(yàn)方案及SOP為依據(jù)，使任意一個(gè)實(shí)驗(yàn)操作細(xì)節(jié)都有據(jù)可查GLP為保證數(shù)據(jù)質(zhì)量所采措施(3)QAU（第三者）確認(rèn)保證這是GLP主要采取保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量的措施。由實(shí)驗(yàn)單位的質(zhì)量保證部門(mén)（QAU）和上級(jí)有關(guān)部門(mén)以“第三者”的身份及立場(chǎng)客觀地對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)施、GLP運(yùn)轉(zhuǎn)狀態(tài)、實(shí)驗(yàn)操作及原始數(shù)據(jù)進(jìn)行審查GLP主要內(nèi)容我國(guó)GLP分九章37條。主要內(nèi)容有:人員素質(zhì)實(shí)驗(yàn)設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)管理監(jiān)督人員素質(zhì)是關(guān)鍵,實(shí)驗(yàn)設(shè)施是保證,SOP很重要,管理監(jiān)督不可少工作人員應(yīng)符條件(1)（一）具備嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)和良好的職業(yè)道德以及相應(yīng)的學(xué)歷，經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，具備完成所承擔(dān)的研究工作需要的知識(shí)結(jié)構(gòu)、工作經(jīng)驗(yàn)和業(yè)務(wù)能力；（二）熟悉本規(guī)范的基本內(nèi)容，嚴(yán)格履行各自職責(zé)，熟練掌握并嚴(yán)格執(zhí)行與所承擔(dān)工作有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程；（三）研究人員應(yīng)及時(shí)、準(zhǔn)確和清楚地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察記錄，對(duì)實(shí)驗(yàn)中發(fā)生的可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的任何情況應(yīng)及時(shí)向?qū)ｎ}負(fù)責(zé)人書(shū)面報(bào)告；工作人員應(yīng)符條件(2)（四）研究人員應(yīng)根據(jù)工作崗位的需要著裝，遵守個(gè)人衛(wèi)生和健康預(yù)防規(guī)定,確保供試品、對(duì)照品和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)不受污染；（五）研究人員應(yīng)定期進(jìn)行體檢,患有影響研究結(jié)果可靠性的疾病者,不得參加研究工作

機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)人職責(zé)(1)（一）全面負(fù)責(zé)和實(shí)施對(duì)非臨床研究機(jī)構(gòu)的建設(shè)和組織管理；（二）建立和保存反映工作人員學(xué)歷、專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)及專(zhuān)業(yè)工作經(jīng)歷的檔案材料；（三）確保具備符合本規(guī)范要求的各種設(shè)施、設(shè)備和實(shí)驗(yàn)條件（四）確保有足夠數(shù)量的合格人員,職責(zé)明確，能按本規(guī)范的要求開(kāi)展工作；（五）聘任質(zhì)量保證部門(mén)的負(fù)責(zé)人，并確保其行使本規(guī)范規(guī)定的職責(zé)；（六）制定主計(jì)劃表；掌握各項(xiàng)研究工作的進(jìn)展；機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)人職責(zé)(2)（七）組織制定和修改標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，并促使工作人員掌握與各自工作有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程；（八）每項(xiàng)研究工作開(kāi)始前,聘任專(zhuān)題負(fù)責(zé)人；有必要更換時(shí)，應(yīng)記錄更換的原因和時(shí)間；（九）審查批準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方案和總結(jié)報(bào)告；（十）及時(shí)處理質(zhì)量保證部門(mén)的報(bào)告,詳細(xì)記錄采取的措施；（十一）確保供試品、對(duì)照品的質(zhì)量和穩(wěn)定性符合要求；（十二）與協(xié)作或委托單位簽訂書(shū)面合同。質(zhì)量保證部門(mén)職責(zé)(1)（一）保存非臨床研究機(jī)構(gòu)的主計(jì)劃表、實(shí)驗(yàn)方案和總結(jié)報(bào)告的副本；（二）根據(jù)本規(guī)范的要求，審核實(shí)驗(yàn)方案、實(shí)驗(yàn)記錄和總結(jié)報(bào)告；（三）對(duì)每項(xiàng)研究實(shí)施檢查和監(jiān)督，并根據(jù)其內(nèi)容和持續(xù)時(shí)間制定審查和檢查計(jì)劃。詳細(xì)記錄檢查的內(nèi)容、存在的問(wèn)題、采取的措施等,并在記錄上簽名,保存?zhèn)洳椋?/p>

質(zhì)量保證部門(mén)職責(zé)(2)（四）定期檢查動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施、實(shí)驗(yàn)儀器和檔案管理；（五）及時(shí)向機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)人和專(zhuān)題負(fù)責(zé)人報(bào)告檢查發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題,提出解決問(wèn)題的建議,并寫(xiě)出檢查報(bào)告；（六）參與標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的制定，保存標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的副本。專(zhuān)題負(fù)責(zé)人職責(zé)(1)（一）全面負(fù)責(zé)該項(xiàng)研究工作的運(yùn)行管理；（二）制定實(shí)驗(yàn)方案，提出修訂或補(bǔ)充相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的建議，分析研究結(jié)果，撰寫(xiě)總結(jié)報(bào)告；（三）嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)方案的規(guī)定，若有修改，應(yīng)經(jīng)本機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)；（四）確保參與該項(xiàng)研究的工作人員明確所承擔(dān)的工作，并掌握相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程；專(zhuān)題負(fù)責(zé)人職責(zé)(2)（五）掌握研究工作的進(jìn)展；檢查各種實(shí)驗(yàn)記錄，確保其及時(shí)、直接、準(zhǔn)確和清楚；（六）詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況和采取的補(bǔ)救措施；（七）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,將實(shí)驗(yàn)方案、原始資料、應(yīng)保存的標(biāo)本、

各種有關(guān)記錄文件和總結(jié)報(bào)告等,送資料檔案室保存；（八）確保研究工作各環(huán)節(jié)符合本規(guī)范的要求實(shí)驗(yàn)設(shè)施(1)保持清潔衛(wèi)生。各類(lèi)設(shè)施應(yīng)布局合理，防止交叉污染，并根據(jù)不同設(shè)施的需要調(diào)控環(huán)境條件

動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施不同種屬動(dòng)物或不同實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的飼養(yǎng)和管理設(shè)施；動(dòng)物的檢疫和患病動(dòng)物的隔離治療設(shè)施；收集和處置試驗(yàn)廢棄物的設(shè)施；清洗消毒設(shè)施；供試品和對(duì)照品含有揮發(fā)性、放射性和生物危害性等物質(zhì)時(shí)，應(yīng)設(shè)置相應(yīng)的飼養(yǎng)和管理設(shè)施

實(shí)驗(yàn)設(shè)施(2)動(dòng)物用品的存放設(shè)施

供試品和對(duì)照品的處置設(shè)施

保管實(shí)驗(yàn)方案、各類(lèi)標(biāo)本、原始記錄、總結(jié)報(bào)告及有關(guān)文件檔案的設(shè)施

環(huán)境調(diào)控和管理設(shè)施

儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)材料(1)

專(zhuān)人負(fù)責(zé)保管,

定期檢查、清潔保養(yǎng)、測(cè)試和校正，確保儀器設(shè)備性能穩(wěn)定可靠

對(duì)儀器設(shè)備的使用、檢查、測(cè)試、校正及故障修理,應(yīng)詳細(xì)記錄日期、有關(guān)情況及操作人員的姓名

儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)材料(2)供試品和對(duì)照品的管理應(yīng)符合下列要求：（一）專(zhuān)人保管，完善的接收、登記和分發(fā)手續(xù)，正確記錄批號(hào)、穩(wěn)定性、含量或濃度、純度和其它化學(xué)特征。對(duì)照品為市售商品時(shí),可用其標(biāo)簽或其它標(biāo)示內(nèi)容代替有關(guān)實(shí)驗(yàn)測(cè)定；（二）貯存保管條件應(yīng)適當(dāng)。貯存的容器應(yīng)貼有標(biāo)簽,標(biāo)明品名、縮寫(xiě)名、代號(hào)、批號(hào)、有效期和貯存條件；儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)材料(3)（三）分發(fā)過(guò)程中應(yīng)避免污染或變質(zhì)。分發(fā)的供試品和對(duì)照品應(yīng)及時(shí)貼上準(zhǔn)確的標(biāo)簽,并按批號(hào)記錄分發(fā)、歸還的日期和重量；（四）需要將供試品和對(duì)照品與介質(zhì)混合時(shí),應(yīng)在給藥前測(cè)定其混合的均勻性,必要時(shí)還應(yīng)定期測(cè)定混合物中供試品和對(duì)照品的濃度和穩(wěn)定性。混合物中任一組分有失效期的,應(yīng)在容器標(biāo)簽上載明，兩種以上組分均有失效日期的，以最早的失效日期為準(zhǔn)

儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)材料(4)試劑和溶液等均應(yīng)貼有標(biāo)簽,標(biāo)明品名、濃度、貯存條件、配制日期及有效期等。試驗(yàn)中不得使用變質(zhì)或過(guò)期的試劑和溶液。選用合格的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼料動(dòng)物飼養(yǎng)室內(nèi)使用的清潔劑、消毒劑及殺蟲(chóng)劑等，不得影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,并應(yīng)詳細(xì)記錄其名稱(chēng)、濃度、使用方法及使用的時(shí)間等。動(dòng)物的飼料和飲水應(yīng)定期檢驗(yàn),確保其符合營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn),污染因素低于規(guī)定限度,檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)作為原始資料保存

標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程英文為StandardOperatingProcedures，縮寫(xiě)SOP是記述GLP實(shí)驗(yàn)室內(nèi)常規(guī)試驗(yàn)有關(guān)的各種工作程序、技術(shù)方法及管理措施等的一套具有內(nèi)部法規(guī)性文件標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程目的：使GLP系統(tǒng)內(nèi)各項(xiàng)工作有章有可循，工作有序，互相銜接，緊密配合，確保試驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性、完整性和可重復(fù)性，出現(xiàn)異常現(xiàn)象時(shí)便于查尋原因范圍：很廣，很細(xì)(十四個(gè)方面)內(nèi)容：可操作性強(qiáng)，簡(jiǎn)單明確，以能使具備專(zhuān)業(yè)知識(shí)，經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的人員能理解和掌握為原則。SOP的管理：編號(hào)，編寫(xiě)，審批確認(rèn)，分發(fā)，保管，檢查和修改等等SOP涉及內(nèi)容(1)（一）供試品和對(duì)照品的接收、標(biāo)識(shí)、保存、處理、配制、領(lǐng)用及取樣分析；（二）動(dòng)物房和實(shí)驗(yàn)室的準(zhǔn)備及環(huán)境因素的調(diào)控；（三）實(shí)驗(yàn)設(shè)施和儀器設(shè)備的維護(hù)、保養(yǎng)、校正、使用和管理；（四）計(jì)算機(jī)系統(tǒng)的操作和管理；

SOP涉及內(nèi)容(2)

（五）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的運(yùn)輸、檢疫、編號(hào)及飼養(yǎng)管理；（六）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的觀察記錄及實(shí)驗(yàn)操作；（七）各種實(shí)驗(yàn)樣品的采集、各種指標(biāo)的檢查和測(cè)定等操作技術(shù)；（八）瀕死或已死亡動(dòng)物的檢查處理；（九）動(dòng)物的尸檢以及組織病理學(xué)檢查；SOP涉及內(nèi)容(3)（十）實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的采集、編號(hào)和檢驗(yàn)；（十一）各種實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理；（十二）工作人員的健康檢查制度；（十三）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的編輯和管理；（十四）非臨床研究機(jī)構(gòu)認(rèn)為需要制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的其它工作

SOP的制訂首先制訂編輯和管理SOP的規(guī)范根據(jù)需要提出需制訂的SOP題目指定熟悉業(yè)務(wù)的工作人員執(zhí)筆撰寫(xiě)組織有關(guān)人員討論修改確?？茖W(xué)性、準(zhǔn)確性和可操作性制訂者、審核者、確認(rèn)者及批準(zhǔn)者分別簽字SOP的管理嚴(yán)格執(zhí)行SOP的制訂、編輯和管理規(guī)范SOP原件交資料檔案室保管，復(fù)印件分發(fā)給有關(guān)部門(mén)或者人員，并登記備案存檔任何人不得私自復(fù)印任何一份SOP檔案室保存一套SOP原件，QAU保存一套復(fù)印件，其他人只保存與自己工作有關(guān)的SOP廢棄不用的SOP統(tǒng)一燒毀，并通知檔案室備案除檔案室外，任何人不得保存或復(fù)印廢棄不用的SOP實(shí)驗(yàn)方案(1)

1研究專(zhuān)題的名稱(chēng)或代號(hào)及研究目的；2非臨床研究機(jī)構(gòu)和委托單位的名稱(chēng)及地址；3專(zhuān)題負(fù)責(zé)人和參加實(shí)驗(yàn)的工作人員姓名；4供試品和對(duì)照品的名稱(chēng)、縮寫(xiě)名、代號(hào)、批號(hào)、有關(guān)理化性質(zhì)及生物特性；5實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)及選擇理由；6實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種、系、數(shù)量、年齡、性別、體重范圍、來(lái)源和等級(jí)；7實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的識(shí)別方法；8實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理的環(huán)境條件；實(shí)驗(yàn)方案(2)9飼料名稱(chēng)或代號(hào)；10實(shí)驗(yàn)用的溶媒、乳化劑及其它介質(zhì)；11供試品和對(duì)照品的給藥途徑、方法、劑量、頻率和用藥期限及選擇的理由；12所用毒性研究指導(dǎo)原則的文件名稱(chēng)；13各種指標(biāo)的檢測(cè)頻率和方法；14數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理方法；15實(shí)驗(yàn)資料的保存地點(diǎn)?？偨Y(jié)報(bào)告(1)1研究專(zhuān)題的名稱(chēng)或代號(hào)及研究目的；2非臨床研究機(jī)構(gòu)和委托單位的名稱(chēng)和地址；3研究起止日期；4供試品和對(duì)照品的名稱(chēng)、縮寫(xiě)名、代號(hào)、

批號(hào)、穩(wěn)定性、含量、濃度、純度、組分及其它特性；5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種、系、數(shù)量、年齡、性別、體重范圍、來(lái)源、動(dòng)物合格證號(hào)及發(fā)證單位、接收日期和飼養(yǎng)條件；6供試品和對(duì)照品的給藥途徑、劑量、方法、頻率和給藥期限；總結(jié)報(bào)告(2)7供試品和對(duì)照品的劑量設(shè)計(jì)依據(jù)；8影響研究可靠性和造成研究工作偏離實(shí)驗(yàn)方案的異常情況；9各種指標(biāo)檢測(cè)的頻率和方法；10專(zhuān)題負(fù)責(zé)人和所有參加工作的人員姓名和承擔(dān)的工作；11分析數(shù)據(jù)所用的統(tǒng)計(jì)方法；12實(shí)驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論；13原始資料和標(biāo)本的貯存處。

臨床前毒理學(xué)評(píng)價(jià)目的意義

新藥評(píng)價(jià)的核心內(nèi)容之一

目的:確保臨床用藥安全超過(guò)限量、改變應(yīng)用范圍或用藥途徑

變成毒物

1985--1994,收審新藥近四千種,已批準(zhǔn)上市

約占50%,而另外50%未被批準(zhǔn)上市新藥中,有相當(dāng)一部分就是因毒理學(xué)評(píng)價(jià)沒(méi)有通過(guò)毒—無(wú)處不在

1274宋慈指出萬(wàn)物皆毒

美國(guó)“化學(xué)文摘”登記化學(xué)品約有一千萬(wàn)種,美國(guó)每年投放市場(chǎng)新化學(xué)品約一千五百種左右

1992年聯(lián)合國(guó)環(huán)境與發(fā)展大會(huì)將有毒化學(xué)品列為二十一世紀(jì)全球七大環(huán)境問(wèn)題之一

藥害事件

1935-1937

美國(guó)

二硝基酚

減肥

白內(nèi)障、骨髓抑制,死亡

177人

1937

美國(guó)磺胺酏劑

消炎尿毒癥、腎衰，死亡107人1954-56法國(guó)有機(jī)錫抗感染207人視力障礙、其中102人死亡1959-62歐日反應(yīng)停鎮(zhèn)靜畸胎，12000多人1966-72日本氯碘喹啉腸道感染萬(wàn)余人失明或下肢癱瘓1937-59美國(guó)黃體酮先兆流產(chǎn)男性化,

600多人臨床前毒理學(xué)評(píng)價(jià)成功例子

化學(xué)物質(zhì)致癌、反應(yīng)停致畸、己烯雌酚防流產(chǎn)而使子代女性出現(xiàn)陰道癌

致癌、致畸、生殖及三代生殖試驗(yàn)青霉素嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)

動(dòng)物模型—豚鼠

臨床前毒理學(xué)評(píng)價(jià)的局限性

新藥本身

新藥不斷地改變著化學(xué)結(jié)構(gòu)和藥理毒理學(xué)特征,不同于已有的老藥,因而也往往超出人們?cè)械闹R(shí)、經(jīng)驗(yàn)和評(píng)價(jià)手段所達(dá)到的預(yù)測(cè)能力

臨床前毒理學(xué)評(píng)價(jià)的局限性現(xiàn)有評(píng)價(jià)手段不能完全適應(yīng)“新藥”評(píng)價(jià)需要

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)缺點(diǎn)

種屬差異

數(shù)量有限

品種單一

健康模型劑量太大臨床前毒理學(xué)評(píng)價(jià)總的要求

找出毒性劑量

確定安全劑量范圍

發(fā)現(xiàn)毒性反應(yīng)

毒性靶器官的尋找

毒性的可逆與否

解救措施

確保臨床用藥安全急性毒性試驗(yàn)?zāi)康囊饬x基本內(nèi)容和要求急性毒性LD50常用計(jì)算方法有關(guān)問(wèn)題急性毒性試驗(yàn)

目的意義

了解新藥急性毒性強(qiáng)度

計(jì)算新藥相對(duì)毒性參數(shù)

為臨床毒副反應(yīng)監(jiān)護(hù)提供參考依據(jù)

為長(zhǎng)期毒性、蓄積性毒性和特殊毒性試驗(yàn)選擇劑量提供依據(jù)

其它方面

新藥急性毒性的強(qiáng)度

表.化學(xué)物質(zhì)的急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(WHO,1977)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━毒性分級(jí)ig大、小鼠LD50

吸入大、小鼠LC50

涂皮兔LD50

人口服可能的

(mg/kg)(ppm)(mg/kg)致死量(g)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━極毒<1<10<50.06劇毒1-5010-1005-444中等毒51-500101-100045-35030低毒501-50001001-10000351-2180250實(shí)際無(wú)毒>5000>10000>2180>1200━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*吸入毒性LC50指中毒欄中的濃度,一次中毒2-4小時(shí),觀察24天

新藥急性毒性的強(qiáng)度

表.歐共體對(duì)化學(xué)物的毒性分級(jí)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━動(dòng)物及給藥途徑劇毒毒有害━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━大鼠LD50ig(mg/kg)≤2525-200200-2000大鼠或兔經(jīng)皮LD50(mg/kg)≤5050-400400-2000大鼠LC50(mg/L/4hr)≤0.50.2-22-20━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

相對(duì)毒性參數(shù)

治療指數(shù)TI=LD50/ED50安全系數(shù)SF=LD5/ED95可靠或確實(shí)安全系數(shù)CSF=LD1/ED99安全范圍SM=(LD1/ED99-1)X100%SED50/ED50,越大越安全LD5基本無(wú)害量ED95基本有效量LD1肯定無(wú)害量

ED99肯定有效量為臨床毒副反應(yīng)監(jiān)護(hù)提供參考

中毒癥狀起始時(shí)間持續(xù)時(shí)間恢復(fù)時(shí)間對(duì)抗試驗(yàn)為臨床急救提供依據(jù)

急性毒性試驗(yàn)觀察動(dòng)物反應(yīng)指標(biāo)

中毒部位毒性癥狀表現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)

呆滯:對(duì)刺激反應(yīng)遲緩、減弱、消失；不安：對(duì)刺激反應(yīng)過(guò)敏、興奮；強(qiáng)直：對(duì)行動(dòng)姿勢(shì)改變、叫聲異常、震顫、共濟(jì)失調(diào)

植物神經(jīng)系統(tǒng)瞳孔縮小、放大、分泌增多，如流涎、流淚

呼吸系統(tǒng)鼻孔流鼻涕、呼吸緩慢、困難、潮式呼吸、速率加快等心血管系統(tǒng)心動(dòng)過(guò)速、緩慢、心律不齊、心跳過(guò)強(qiáng)、微弱胃腸系統(tǒng)氣脹、腹瀉、便秘、糞便不成形、糞便黑色生殖系統(tǒng)乳腺膨脹、會(huì)陰部污濁、陰囊下垂等皮膚、毛皮膚發(fā)紅、松弛、皮疹、毛豎起粘膜口腔流粘液、充血、潰瘍、出血性紫紺眼睛上瞼下垂、眼球突出混濁其他直腸溫度升高、降低；消瘦；拒食等

為長(zhǎng)毒、蓄毒試驗(yàn)選擇劑量提供依據(jù)

長(zhǎng)期毒性劑量設(shè)計(jì)LD50法(1/10,1/50,1/100)MTD法(1,1/3,1/10)蓄積性毒性劑量設(shè)計(jì)1/10LD50,然后按等比級(jí)數(shù)1.5倍逐漸遞增為特殊毒性試驗(yàn)選擇劑量提供依據(jù)

生殖毒性試驗(yàn)高劑量為母鼠MTD致突變?cè)囼?yàn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物微核試驗(yàn)高劑量為1/2LD50果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)的高、低劑量分別為1/2LD50和1/4LD50精原細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)高劑量應(yīng)為1/2LD50

動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)高劑量應(yīng)是MTD主要藥效學(xué)劑量限度、一般藥理學(xué)和藥動(dòng)學(xué)劑量設(shè)計(jì)也要參考急性毒性的LD50

其它方面

系列化合物的合格率分析(除理化性質(zhì)為主外)也參考LD50復(fù)方中藥物的相互作用,有時(shí)也通過(guò)拆方及合用的LD50來(lái)判別相互作用的性質(zhì)基本內(nèi)容和要求---動(dòng)物嚙齒類(lèi)----小鼠或大鼠非嚙齒類(lèi)----犬或其它一類(lèi)藥至少必須用二種動(dòng)物(嚙齒類(lèi)及非嚙齒類(lèi)各一種,其中非嚙齒類(lèi)宜用Beagle犬);其它類(lèi)酌情用二種動(dòng)物小鼠18-22g,同次體重相差不超過(guò)4g;大鼠120-150g,同次體重不超過(guò)20g;犬用成年犬♀♂各半

基本內(nèi)容和要求---給藥途徑一類(lèi)藥及可溶于水的至少用兩種給藥途徑,其中一種必須是臨床給藥途徑其它類(lèi)至少有一種臨床給藥途徑實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上無(wú)法進(jìn)行時(shí),則作特殊說(shuō)明,可用別的給藥途徑基本內(nèi)容和要求---劑量和分組

小動(dòng)物一般分4-6個(gè)劑量組,組距0.65-0.85,求出LD50大動(dòng)物可用50%等量遞升法,一般用6條犬,求出ALD和MTD

基本內(nèi)容和要求---給藥容積

不等濃度等容量給藥常規(guī)給藥容量為:小鼠ig0.2-0.4ml/10g,ip、sc和iv0.1-0.2ml/10g大鼠ig1-1.5ml/100g,ip、sc和iv為0.5-1ml/100g

基本內(nèi)容和要求---觀察記錄

給藥當(dāng)天,尤其是藥后4h內(nèi)應(yīng)嚴(yán)密觀察并記錄,然后每天上下午各一次,連續(xù)觀察7-14天詳細(xì)記錄動(dòng)物毒性反應(yīng)情況和死亡情況,中毒癥狀,中毒發(fā)生時(shí)間、持續(xù)時(shí)間、恢復(fù)期及動(dòng)物最短死亡時(shí)間、最長(zhǎng)死亡時(shí)間和平均死亡時(shí)間

死亡動(dòng)物應(yīng)及時(shí)進(jìn)行尸檢,記錄病變情況;若肉眼可見(jiàn)變化時(shí)則需進(jìn)行病理檢查基本內(nèi)容和要求---結(jié)果處理

實(shí)驗(yàn)資料按下表列出,用Bliss法計(jì)算LD50。必要時(shí)求出不同性別LD50

表.XXX急性毒性結(jié)果及LD50計(jì)算━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━劑量對(duì)數(shù)劑量動(dòng)物數(shù)死亡動(dòng)物數(shù)死亡率機(jī)率單位LD50及可信限(mg/kg)(X)(只)(只)%(Y)(mg/kg)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━基本內(nèi)容和要求---MTD測(cè)定

最大允許濃度和最大允許容積仍未測(cè)出LD50,可只求MTD值。方法：一次給20只動(dòng)物,連續(xù)觀察7-14天,未見(jiàn)任何動(dòng)物死亡,則MTD＞XXg/kg。若僅有個(gè)別死亡,則宜寫(xiě)成LD50>XXg/kg。iv要求

pH5-8，速度：大、小鼠

10-20s。ig時(shí)空腹,即禁食12-16h左右表.急性毒性試驗(yàn)常用容量和最大容量(ml)

━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━給藥途徑小鼠大鼠豚鼠家兔狗

ig0.2-1.01-41-55-1050-100ip0.2-1.01-32-55-105-15im0.1-0.20.2-0.50.2-0.50.5-12-5iv0.2-0.51-21-53-1035-50sc0.1-0.50.5-10.5-21-33-10━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*小鼠指20g,大鼠200g,豚鼠200g,兔2.5kg,狗10kg,前者為常用量,后者為最大容量急性毒性LD50常用的統(tǒng)計(jì)方法白侖氏法(Behren'smethod)(累計(jì)法)密勒和滕特爾二氏法(MillerandTaninter'smethod),也叫目測(cè)法、概率法(對(duì)數(shù)機(jī)率單位繪圖法,1944年)寇氏法(Karber'smethod),也叫克貝爾法點(diǎn)斜法(孫瑞元孜良寇氏法)改良寇氏法(顧漢頤改進(jìn)寇氏法)維爾氏法(Weil'smethod),機(jī)率單位法Bliss法(Bliss'method)Finney法(改進(jìn)Bliss法),概率單位加權(quán)回歸法有關(guān)問(wèn)題---毒理學(xué)界對(duì)LD50的看法

LD50只是急毒試驗(yàn)結(jié)果（信息）的一部分從安全性評(píng)價(jià)角度來(lái)講，主要是毒性信息，而非精確的LD50LD50測(cè)定的不足：動(dòng)物消耗量大獲得信息有限測(cè)得數(shù)值不準(zhǔn)急性毒性研究中應(yīng)注意的問(wèn)題（一）

動(dòng)物品系寫(xiě)清楚、

♀♂各半、體重和鼠齡要符合要求分組應(yīng)隨機(jī)

藥物濃度、給藥容量、給藥途徑應(yīng)交待清楚

詳細(xì)記錄中毒情況注意溶媒對(duì)照其它毒性試驗(yàn)腔道用藥毒性試驗(yàn)眼刺激試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗(yàn)滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)直腸、陰道用藥急性毒性試驗(yàn)直腸、陰道用藥刺激試驗(yàn)其它毒性試驗(yàn)藥物依賴(lài)性試驗(yàn)身體依賴(lài)性試驗(yàn)自然戒斷試驗(yàn)替代試驗(yàn)催促試驗(yàn)誘導(dǎo)試驗(yàn)精神依賴(lài)性試驗(yàn)

皮膚給藥急性毒性試驗(yàn)

目的:觀察短期接觸受試物后皮膚的毒性反應(yīng)動(dòng)物:家兔、豚鼠或大鼠，♀♂各半，家兔體重２kg,豚鼠300g,大鼠200g左右,給藥前24h將動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)毛脫掉,去毛范圍約相當(dāng)于體表面積的10%左右,(家兔約150cm2左右,豚鼠、大鼠約40cm2左右）藥物：膏劑、液體或粉末。粉末需用賦形劑（如羊毛脂、凡士林等）混勻，以保證受試物與皮膚有良好的接觸皮膚給藥急性毒性試驗(yàn)劑量：3個(gè)，組距0.65－0.85。家兔每組４只，豚鼠或大鼠每組10只并設(shè)賦形劑或空白對(duì)照組方法：將受試物均勻涂敷于脫毛區(qū)，破損皮膚則在脫毛區(qū)劃破皮膚后再涂敷受試物。24h后去除，每日觀察，連續(xù)7-14天。觀察動(dòng)物體重、皮膚、毛發(fā)、眼睛和粘膜的變化，呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)等變化。若有死亡則進(jìn)行尸檢，當(dāng)有肉眼可見(jiàn)病變，則需進(jìn)行病檢判斷：試驗(yàn)結(jié)果與對(duì)照組比較判斷皮膚給藥的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)?zāi)康模河^察經(jīng)皮滲透產(chǎn)生的異常反應(yīng)和可逆程度，找到靶器官動(dòng)物：家兔(2kg,6只/組)，豚鼠(300g，10只/組)或大鼠(200g，10只/組)，♀♂各半。給藥前24h動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)脫毛，面積同急毒受試物：同急性毒性試驗(yàn)劑量：３個(gè)，要求同大鼠口服長(zhǎng)毒試驗(yàn)，并設(shè)賦形劑或空白對(duì)照組，若用受試物劑量超過(guò)有效濃度20倍以上，仍未見(jiàn)動(dòng)物有不良反應(yīng)或死亡時(shí)，則只須設(shè)一個(gè)高劑量組皮膚給藥的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)方法：將受試物均勻涂敷,每日一次，每次至少接觸６h，臨床用藥療程的３倍以上時(shí)間連續(xù)給藥。若出現(xiàn)毒性反應(yīng)，部分動(dòng)物應(yīng)于停藥后繼續(xù)觀察１-２周，以確定毒性反應(yīng)可逆程度檢測(cè)指標(biāo)：除每日觀察皮膚、臨床變化及皮膚病理學(xué)檢查外，其血液學(xué)、血液生化指標(biāo)和病理學(xué)檢查項(xiàng)目同大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)要求判斷：實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)寫(xiě)明安全劑量、中毒劑量、中毒表現(xiàn)、中毒靶器官及中毒的可逆程度等皮膚刺激試驗(yàn)?zāi)康模河^察刺激反應(yīng)情況動(dòng)物：首選家兔(2kg左右)，其次為豚鼠(300g左右)。藥前24h脫毛，家兔每側(cè)脫約50cm2，豚鼠每側(cè)脫約20cm2受試物：同急性毒性試驗(yàn)方法：≥３只家兔或５只豚鼠，在受試物區(qū)、對(duì)照區(qū)和破損皮膚區(qū)（脫毛后），一次或多次將受試物１ml或1g涂于受試物區(qū)，賦形劑則涂于對(duì)照區(qū)。24h后去除。觀察1、24、48和72h涂抹部位有無(wú)紅斑和水腫等，變化的恢復(fù)情況和時(shí)間皮膚刺激試驗(yàn)多次給藥則每日涂抹一次，連續(xù)一周，其余均與一次給受試物的方法和要求一致結(jié)果評(píng)價(jià)：每只動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行刺激反應(yīng)評(píng)分，計(jì)算出平均分值進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

刺激反應(yīng)

分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━紅斑:

無(wú)紅斑

0

勉強(qiáng)可見(jiàn)

1

中度紅斑

2

嚴(yán)重紅斑

3

紫紅色紅斑并有焦痂形成

4水腫:

無(wú)水腫

0

勉強(qiáng)可見(jiàn)

1

皮膚隆起輪廓清楚

2

水腫隆起約1mm并范圍擴(kuò)大

4━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━強(qiáng)度分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━無(wú)刺激性<0.5

輕度刺激性<2.0

中度刺激性<6.0

強(qiáng)度刺激性>6.0━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━皮膚過(guò)敏試驗(yàn)?zāi)康?觀察免疫系統(tǒng)反應(yīng)在皮膚上的表現(xiàn)動(dòng)物：豚鼠♀♂各半(250-300g)。給藥前24h背部?jī)蓚?cè)脫毛，脫毛區(qū)每側(cè)約3x3cm2受試物：若受試物是膏劑或液體，直接試驗(yàn)。若為固體粉末，則用水或賦形劑（如羊毛脂、凡士林、橄欖油等）混勻以保證受試物與皮膚良好接觸陽(yáng)性致敏物：2,4-二硝基氯代苯配成1%的致敏濃度和0.1%的激發(fā)濃度皮膚過(guò)敏試驗(yàn)方法：分受試物組，空白對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只（♀♂各半）1.致敏接觸：將受試物0.1-0.2ml(ｇ)涂在左側(cè)脫毛區(qū)，持續(xù)6h。第７天和第14天，同法各重復(fù)一次2.激發(fā)接觸：末次致敏后14天，將受試物0.1-0.2ml(ｇ)涂于右側(cè)脫毛區(qū)，陽(yáng)性對(duì)照用0.1%2,4—二硝基氯代苯，６h后去除，即刻觀察，然后于24、48、72h再次觀察過(guò)敏反應(yīng)情況結(jié)果評(píng)價(jià)：試驗(yàn)結(jié)果按皮膚反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分后，根據(jù)試驗(yàn)組與對(duì)照組豚鼠皮膚反應(yīng)的差別，按表判斷受試物對(duì)皮膚過(guò)敏反應(yīng)性質(zhì)可用致敏率(紅斑或水腫的動(dòng)物例數(shù)/受試動(dòng)物總數(shù))判斷致敏強(qiáng)度皮膚過(guò)敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)皮膚反應(yīng)分值紅斑形成：無(wú)紅斑０輕度紅斑１中度紅斑２重度紅斑３水腫性紅斑４水腫形成：無(wú)水腫０輕度水腫１中度水腫２重度水腫３致敏率分類(lèi)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━致敏率（%）反應(yīng)強(qiáng)度━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━０－10弱致敏性

20－30輕度致敏性

40－60中度致敏性

70－80高度致敏性

90－100極度致敏性━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━光敏試驗(yàn)有些受試物皮膚涂抹后遇光照可引起光敏反應(yīng)若其化學(xué)結(jié)構(gòu)或某些組成（包括藥物和賦形劑）文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)有光敏作用者應(yīng)作光敏試驗(yàn)其化學(xué)結(jié)構(gòu)和已知光敏劑相似者也應(yīng)做光敏試驗(yàn)皮膚給藥毒性試驗(yàn)有關(guān)問(wèn)題賦形劑對(duì)照組的設(shè)立很重要，不能忽略賦形劑對(duì)照，更要重視賦形劑的選擇，其各種指標(biāo)、規(guī)格等均應(yīng)符合藥用規(guī)格方能用若用于各種受損皮膚時(shí)，急毒、長(zhǎng)毒等毒性試驗(yàn)也宜以模擬破損皮膚進(jìn)行高劑量的設(shè)計(jì)應(yīng)符合制劑工藝要求，宜以劑型允許配制濃度和允許給藥容量為宜。不能將外用藥厚厚地涂在皮膚上，以增加劑量是不妥的眼刺激試驗(yàn)?zāi)康模河^察眼睛接觸受試物后產(chǎn)生的刺激反應(yīng)動(dòng)物：家兔≥４只，體重2－3kg受試物：液體或膏劑均可直接滴入或涂敷劑量：用原液或原膏劑，不必稀釋?zhuān)恐谎劬Φ稳?.1ml或涂敷0.1g以?xún)?nèi)方法：滴入或涂敷于動(dòng)物一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)作為空白（或賦形劑）對(duì)照。給藥后使眼睛被動(dòng)閉合5－10分。記錄給藥后6、24、48、72h至7天眼的局部反應(yīng)情況眼刺激試驗(yàn)臨床用藥超過(guò)一周的受試物要進(jìn)行多次給藥刺激試驗(yàn)，連續(xù)給藥一周以上結(jié)果評(píng)價(jià)：將每只動(dòng)物的眼角膜、虹膜和結(jié)膜的刺激反應(yīng)的分值相加，即是一只受試動(dòng)物眼刺激反應(yīng)的總積分。把每個(gè)受試動(dòng)物的刺激反應(yīng)積分的總和除以動(dòng)物數(shù)，就是該受試物對(duì)眼刺激性的最后分值，以此判定受試物刺激程度眼刺激試驗(yàn)--角膜評(píng)分

無(wú)混濁０散在或彌漫性混濁，虹膜清晰可見(jiàn)1

半透明區(qū)易分辨，虹膜模糊不清2

出現(xiàn)灰白色半透明區(qū)，虹膜細(xì)節(jié)不清，瞳孔大小勉強(qiáng)看清3

角膜不透明，由于混濁，虹膜無(wú)法辨認(rèn)

4

眼刺激試驗(yàn)--虹膜評(píng)分

正常０皺褶明顯加深，充血，腫脹，角膜周?chē)p度充血，瞳孔對(duì)光仍有反應(yīng)１出血，肉眼可見(jiàn)壞死，對(duì)光無(wú)反應(yīng)（或出現(xiàn)其中一種反應(yīng)）２眼刺激試驗(yàn)--結(jié)膜評(píng)分Ａ.充血（指瞼結(jié)膜、球結(jié)膜部位）血管正常０血管充血呈鮮紅色１血管充血呈深紅色，血管不易分辨２彌漫性充血呈紫紅色３Ｂ.水腫無(wú)水腫０輕微水腫（包括瞬膜）１明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻２水腫至眼瞼近半閉合３水腫至眼瞼超半閉合４Ｃ.分泌物無(wú)分泌物０少量分泌物１分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著２分泌物使整個(gè)眼區(qū)潮濕或粘著３

眼刺激性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━刺激程度積分━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━無(wú)刺激性０－３輕度刺激性４－８中度刺激性９－１２強(qiáng)度刺激性１３－１６━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗(yàn)?zāi)康模河^察一次滴入或吸入后所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況動(dòng)物：大鼠、豚鼠或家兔。♀♂各半，大鼠、豚鼠體重在250-300g、家兔在2.5kg左右愛(ài)試物：液體或粉末劑劑量：３個(gè)劑量，組距0.65-0.85為宜。設(shè)賦形劑或空白對(duì)照組。若大劑量組（超過(guò)臨床預(yù)計(jì)用量的50倍以上）未出現(xiàn)死亡情況時(shí)，則只須設(shè)一個(gè)高劑量組滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗(yàn)方法：大鼠或豚鼠每組10只，家兔每組４只，♀♂各半。滴入或吸入藥后，至少接觸４小時(shí)，給藥后即刻觀察及7-14天觀察動(dòng)物全身狀況、體重、呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)等變化，若出現(xiàn)死亡則病檢結(jié)果判斷：試驗(yàn)結(jié)果與對(duì)照組比較。如能測(cè)出LD50值則按急性毒性試驗(yàn)要求計(jì)算滴鼻劑和吸入劑刺激試驗(yàn)?zāi)康模河^察滴入或吸入后產(chǎn)生的刺激反應(yīng)動(dòng)物：同上述急性毒性試驗(yàn)受試物：液體或粉末劑分組：給藥組、賦形劑組及空白對(duì)照組，每組家兔３只，或大鼠或豚鼠５只方法：將藥滴入或噴霧于動(dòng)物。和粘膜接觸至少４h。于24h處死動(dòng)物，觀察有無(wú)充血、紅腫等現(xiàn)象。若有變化則需進(jìn)行病檢多次給藥則每天滴入或吸入一次,連續(xù)７天，于末次給藥24h后處死動(dòng)物結(jié)果判斷：試驗(yàn)結(jié)果與對(duì)照組比較進(jìn)行判斷直腸、陰道用藥急毒試驗(yàn)?zāi)康模河^察直腸或陰道一次接觸受試物后，由吸敷所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況受試物：栓劑、液體或膏劑。劑量：３個(gè)，組距0.65-0.85，須設(shè)賦形劑或空白對(duì)照組方法：家兔每組４只，大鼠每組10只。將受試物置入≥４h。即刻觀察7-14天，觀察全身狀況，體重、呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)等變化。若出現(xiàn)死亡時(shí)應(yīng)做病檢結(jié)果判斷：與對(duì)照組比較判斷。必要時(shí)算LD50

直腸、陰道用藥刺激試驗(yàn)?zāi)康模河^察直腸、陰道的刺激反應(yīng)動(dòng)物：同上述急性毒性試驗(yàn)受試物：栓劑、液體或膏劑分組：給藥組、賦形劑組和空白對(duì)照組。每組家兔４只，大鼠６只方法：受試物置入≥４h，24h后處死動(dòng)物。取出局部直腸或陰道組織。觀察有無(wú)充血、紅腫等現(xiàn)象，若有變化需進(jìn)行病檢直腸、陰道用藥刺激試驗(yàn)多次給受試物則一般每日一次，連續(xù)７天，于末次給藥后24h處死動(dòng)物并觀察結(jié)果判斷：試驗(yàn)結(jié)果與對(duì)照組比較判斷腔道用藥毒性試驗(yàn)要特別注意既要符合劑型要求，又要考慮腔道可給容量身體依賴(lài)性試驗(yàn)--自然戒斷試驗(yàn)連續(xù)給藥后突然停藥，觀察戒斷癥狀，與同類(lèi)的代表藥作對(duì)比，判斷受試藥的依賴(lài)性潛力動(dòng)物：小、大鼠和猴。小鼠體重20-24g，每組≥20只，大鼠體重180-220g，每組≥10只,猴體重3-5kg，每組3～5只，♂♀各半劑量：2～3，須設(shè)賦形劑對(duì)照和陽(yáng)性藥對(duì)照(嗎啡，苯巴比妥或巴比妥)。低劑量用ACD；高劑量組依賴(lài)性潛力低的藥物應(yīng)選用接近毒性反應(yīng)的劑量，毒性低的藥物選用MTD。藥物可采用恒量或劑量遞增的方式給予身體依賴(lài)性試驗(yàn)--自然戒斷試驗(yàn)給藥途徑：1～2種給藥途徑，必須有一種與臨床用藥途徑相同給藥期限：鎮(zhèn)痛藥在小、大鼠需給藥30天，猴需給藥90天；鎮(zhèn)靜催眠藥在小、大鼠需給藥60～90天，猴需給藥180天。每天上下午各一次身體依賴(lài)性試驗(yàn)--自然戒斷試驗(yàn)觀察指標(biāo)：鎮(zhèn)痛藥在停藥前24h及停藥后48h內(nèi)每隔4h觀察記錄外觀體征和行為活動(dòng)、植物神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能變化，并稱(chēng)重。鎮(zhèn)靜催眠藥在停藥前一天及停藥后的1至2周內(nèi)每天觀察動(dòng)物的外觀體征和行為活動(dòng)及自發(fā)驚厥發(fā)生率外觀體征和行為活動(dòng)包括：應(yīng)激性、神情過(guò)敏(猴)、飲食、睡眠、自發(fā)運(yùn)動(dòng)活動(dòng)、攻擊性、警覺(jué)程度、神經(jīng)反射、豎尾、震顫、驚厥、呼吸、體溫、體重植物神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能變化：腹瀉、流涎、流淚、惡心、嘔吐、瞳孔大小身體依賴(lài)性試驗(yàn)--自然戒斷試驗(yàn)資料記錄及整理：①動(dòng)物應(yīng)寫(xiě)明種屬、性別、生產(chǎn)合格證號(hào)、記錄體重、實(shí)驗(yàn)室溫度及濕度②受試物應(yīng)寫(xiě)明生產(chǎn)批號(hào)、配制方法③戒斷癥狀用記分法統(tǒng)計(jì)，對(duì)檢測(cè)指標(biāo)和體重、驚厥發(fā)生率等應(yīng)設(shè)計(jì)合理的圖表顯示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理身體依賴(lài)性試驗(yàn)--替代試驗(yàn)給予動(dòng)物代表藥(如嗎啡、巴比妥或苯巴比妥)產(chǎn)生身體依賴(lài)性后，停止給藥，替之以受試藥，觀察記錄動(dòng)物是否發(fā)生戒斷癥狀及發(fā)作程度動(dòng)物：參照“自然戒斷試驗(yàn)”劑量：參照“自然戒斷試驗(yàn)”給藥途徑：腹腔注射、灌胃或“藥摻食”(drugadmixedfood,DAF)法給予代表藥使產(chǎn)生身體依賴(lài)性，然后停止給代表藥，以同樣給藥方式給予不同劑量的受試藥,觀察及記錄替代期間動(dòng)物的戒斷行為和體重變化身體依賴(lài)性試驗(yàn)--替代試驗(yàn)鎮(zhèn)痛藥的觀察期為停止嗎啡前24h和停藥后48h內(nèi)，每4h觀察一次；鎮(zhèn)靜催眠藥的觀察為停止代表藥前一天和停藥后的1～2周內(nèi)，每天觀察一次采用1～2種給藥途徑，必須有一種與臨床用藥途徑相同觀察指標(biāo)：參照“自然戒斷試驗(yàn)”資料記錄與整理：參照“自然戒斷試驗(yàn)”身體依賴(lài)性試驗(yàn)--催促試驗(yàn)短時(shí)期內(nèi)給予動(dòng)物大劑量受試藥，然后注射受體對(duì)抗劑，觀察和記錄是否出現(xiàn)戒斷癥狀及其程度。此法只適用于有竟?fàn)幮允荏w對(duì)抗劑的阿片類(lèi)藥物動(dòng)物：參照“自然戒斷試驗(yàn)”劑量：除低劑量組一般采用臨床劑量的1至2倍外，余同“自然戒斷試驗(yàn)”給藥途徑：猴的實(shí)驗(yàn)應(yīng)采用與臨床給藥途徑相同；大、小鼠的實(shí)驗(yàn)選用二種給藥途徑，其中必須有一種與臨床用藥途徑相同身體依賴(lài)性試驗(yàn)--催促試驗(yàn)給藥期限：猴連續(xù)給藥30～60天，上、下午各一次，大、小鼠連續(xù)給藥3～5天停藥后給予阿片受體對(duì)抗劑，常用鈉洛酮，亦可用環(huán)丙羥丙嗎啡。觀察給受體對(duì)抗劑后1～2h內(nèi)動(dòng)物出現(xiàn)的戒斷癥狀及體重變化觀察指標(biāo)：參照“自然戒斷試驗(yàn)”。小鼠適應(yīng)觀察記錄跳躍次數(shù)資料記錄及整理：參照“自然戒斷試驗(yàn)”身體依賴(lài)性試驗(yàn)--誘導(dǎo)試驗(yàn)應(yīng)用各種誘發(fā)驚厥的方法如聽(tīng)源性發(fā)作和戊四唑驚厥，對(duì)鎮(zhèn)靜催眠藥產(chǎn)生身體依賴(lài)性的動(dòng)物，在斷藥期間閾下刺激強(qiáng)度就可出現(xiàn)反跳性興奮，誘發(fā)驚厥動(dòng)物：只有大、小鼠。應(yīng)預(yù)先挑選對(duì)各種閾下刺激無(wú)驚厥反應(yīng)鼠劑量：參照“自然戒斷試驗(yàn)”，陽(yáng)性代表藥為苯巴比妥或巴比妥身體依賴(lài)性試驗(yàn)--誘導(dǎo)試驗(yàn)給藥途徑：二種，有一種同臨床途徑給藥期限：30天，每天二次，上、下午各一次觀察指標(biāo)：聽(tīng)源性發(fā)作實(shí)驗(yàn)在停藥后的一周內(nèi)每天記錄發(fā)作率和體重；戊四唑?qū)嶒?yàn)在停藥24h后記錄一次發(fā)作率和體重資料記錄及整理：參照“自然戒斷試驗(yàn)”精神依賴(lài)性試驗(yàn)采用”自身給藥“測(cè)定iv藥物對(duì)動(dòng)物的強(qiáng)化效應(yīng)動(dòng)物：200～250g的健康大鼠，♂♀各半劑量：1～2個(gè)劑量組，加上一個(gè)陽(yáng)性藥對(duì)照組(阿片類(lèi)--鹽酸嗎啡，鎮(zhèn)靜催眠--苯巴比妥鈉或戊巴比妥鈉)，每組10只動(dòng)物。方法：戊巴比妥鈉麻醉下行頸外靜脈插管術(shù)，將插管一端固定于血管內(nèi)，另一端與恒速泵及藥液輸入系統(tǒng)相連。術(shù)后第二天開(kāi)始對(duì)大鼠進(jìn)行自身給藥訓(xùn)練，直至動(dòng)物建立自身給藥(踏板)行為目的意義研究對(duì)遺傳物質(zhì)是否有損傷，是否會(huì)引起腫瘤、衰老及畸胎等特殊毒性試驗(yàn)存在著種屬差異性定性差異定量差異定性差異反應(yīng)停對(duì)家兔和７種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物致畸，但至少對(duì)10種品系大鼠、15種品系小鼠、2種家狗、３種田鼠和８種靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物不致畸可的松對(duì)兔子和小鼠強(qiáng)力致畸，但對(duì)大鼠不致畸硫唑嘌呤對(duì)大鼠不致畸，但對(duì)兔子強(qiáng)致畸氨磺丁脲引起大鼠、小鼠眼畸形，但對(duì)兔子卻引起臉和內(nèi)臟畸形

定量差異致畸劑量在人與動(dòng)物、動(dòng)物與動(dòng)物間差異明顯

表人類(lèi)與動(dòng)物致畸劑量比較藥物最低致畸劑量（/kg/d)人與動(dòng)物比值人動(dòng)物反應(yīng)停0.5-1.0mg兔2.5mg

5-2.5

氨基喋呤50μg大鼠100μg2

氨甲喋呤42μg大鼠200μg4.8

乙烯雌酚20-80μg恒河猴200μg10-2.5

苯妥英鈉2mg小鼠50mg25致突變?cè)囼?yàn)

微生物回復(fù)試驗(yàn)(Ames試驗(yàn)）+哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)+果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)染色體畸變?cè)囼?yàn)+嚙齒動(dòng)物顯性致死試驗(yàn)+精原細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)動(dòng)物微核試驗(yàn)

+程序外DNA合成(UDS)試驗(yàn)+SOS顯色試驗(yàn)微生物回復(fù)試驗(yàn)菌株:組胺酸缺陷型鼠傷寒沙門(mén)氏菌(S.Typhimurium),采用TA98、100、97、102,檢定符合要求,-80℃或液氮凍存?zhèn)溆脛┝浚河伤幬飳?duì)細(xì)菌的毒性和溶解度決定最高劑量：a.一般5mg／皿，b.最高溶解度，

c.根據(jù)殺菌情況確定最大濃度最低劑量：一般1μg／皿或0.1μg／皿。劑量級(jí)：5個(gè)以上微生物回復(fù)試驗(yàn)代謝活化：加肝臟微粒體酶(S9)和不加S9平行條件下測(cè)試對(duì)照：陰性、陽(yáng)性對(duì)照和S9對(duì)照方法：標(biāo)準(zhǔn)平板法或預(yù)培養(yǎng)法，48h觀察結(jié)果，如菌落太小，可繼續(xù)培養(yǎng)并延長(zhǎng)到72h觀察結(jié)果。每一濃度至少三皿，實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)一次結(jié)果判定：①受試物所誘發(fā)的回變菌落數(shù)(ｘ±ｓ)增加，超過(guò)對(duì)照2倍，量--效關(guān)系；②某測(cè)試點(diǎn)超過(guò)對(duì)照2倍以上，呈現(xiàn)可重復(fù)的并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的增加。符合上述任何一條即可判為陽(yáng)性微生物回復(fù)試驗(yàn)如某些藥物有明顯殺菌作用，可改用哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)如某些陽(yáng)性或可疑陽(yáng)性時(shí)，可選擇哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)或果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)細(xì)胞:建議首選中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞(CHL),需定期檢查核型和有無(wú)支原體等污染。-80℃或液氮凍存劑量：高劑量以50％細(xì)胞生長(zhǎng)抑制濃度為基準(zhǔn)，最高不要超過(guò)10mM分子量。溶解受限時(shí)可采用飽和濃度。中低劑量用倍量稀釋法。至少３個(gè)劑量代謝活化：應(yīng)用誘導(dǎo)劑處理后的哺乳動(dòng)物肝微粒體酶（S9）進(jìn)行體外代謝活化試驗(yàn)哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)藥物作用時(shí)間:藥物和細(xì)胞接觸非活化組作用24h和48h收獲細(xì)胞,代謝活化組作用6小時(shí)以上標(biāo)本制作時(shí)間：藥物和細(xì)胞接觸后起算，分別在24h和48h收獲細(xì)胞對(duì)照：空白、溶劑、陽(yáng)性和Ｓ９對(duì)照鏡檢：每種濃度至少觀察100個(gè)中期分裂相，在油鏡下分別記錄染色體的結(jié)構(gòu)畸變，多倍體以及畸變細(xì)胞數(shù)和畸變類(lèi)型哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)受試物所誘發(fā)的染色體畸變數(shù)的增加與劑量相關(guān);CHL系統(tǒng)判定如下:畸變率<5%陰性(-)畸變率>5%可疑(±)畸變率>10%陽(yáng)性(+)畸變率>20%陽(yáng)性(++)畸變率>50%陽(yáng)性(+++)注意：遇陽(yáng)性或可疑陽(yáng)性時(shí)，可選嚙齒動(dòng)物顯性致死試驗(yàn)或精原細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)嚙齒動(dòng)物微核試驗(yàn)動(dòng)物：首選ＮＩＨ小鼠，每組１０只性成熟小鼠，雌雄各半，或至少６只性成熟雄性小鼠給藥途徑與方法：盡可能和臨床擬用途徑相同，一般為單次給藥或誘導(dǎo)給藥，必要時(shí)可多次給藥骨髓采樣時(shí)間：通過(guò)預(yù)試，在12-72h不同時(shí)間內(nèi)，取5個(gè)作用點(diǎn)，找出合適采樣時(shí)間，如無(wú)差別一般采用24h采樣劑量：≥3個(gè)，最高劑量1/2LD50對(duì)照組：用溶媒作陰性對(duì)照，用已知能誘發(fā)微核增加的物質(zhì)作陽(yáng)性對(duì)照

嚙齒動(dòng)物微核試驗(yàn)標(biāo)本制作：取骨髓、涂片、Giemsa或丫啶橙熒光染色鏡檢：每只動(dòng)物至少計(jì)數(shù)1000個(gè)多染紅細(xì)胞，Giemsa染色，觀察其微核出現(xiàn)的頻度及多染紅細(xì)胞和正常紅細(xì)胞的比率。丫啶橙熒光染色，則直接觀察微核出現(xiàn)的頻度判定：1.受試物所誘發(fā)的微核率的增加與劑量相關(guān)2.某一測(cè)試點(diǎn)微核增加可重復(fù)并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義符合上述一條即可判為陽(yáng)性

嚙齒動(dòng)物微核試驗(yàn)

注意：1.對(duì)Giemsa染色中獲得可疑陽(yáng)性或弱陽(yáng)性結(jié)果的藥物，必須用熒光染色以進(jìn)一步肯定或否定陽(yáng)性結(jié)果2.不易通過(guò)骨髓屏障的藥物，可補(bǔ)充用哺乳動(dòng)物胎肝細(xì)胞微核試驗(yàn)進(jìn)一步研究3.如遇陽(yáng)性或可疑陽(yáng)性時(shí)，可選擇UDS試驗(yàn)或SOS顯色試驗(yàn)生殖毒性試驗(yàn)一般生殖毒性試驗(yàn)致畸敏感期毒性試驗(yàn)圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn)生殖毒性試驗(yàn)----致畸敏感期毒性試驗(yàn)動(dòng)物：首選Wistar或SD大鼠，也可用小鼠或家兔Ｉ類(lèi)最好增加家兔或豬、猴、狗之一動(dòng)物數(shù)：每組孕大、小鼠≥１５只，孕兔≥８只劑量：高、中、低三個(gè)劑量，限度劑量為1g/kg。高劑量產(chǎn)生母體毒性，或?yàn)樽畲蠼o藥量。攝食量減少，體重增加緩慢或下降,陰道流血、流產(chǎn)等均是毒性反應(yīng)表現(xiàn)。低劑量無(wú)母體和胚胎毒性給藥途徑：同推薦臨床給藥途徑，但不宜采用腹腔注射，口服制劑除灌胃外，還可在嚴(yán)格測(cè)定其消耗量的前提下自由攝取或拌入飼料生殖毒性試驗(yàn)----致畸敏感期毒性試驗(yàn)給藥時(shí)期：于胚胎器官形成期連續(xù)給藥，大鼠孕后6-15天，小鼠6-15天，家兔6-18天對(duì)照：必須設(shè)溶劑對(duì)照。必要時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照

觀察和檢查：查到精子或陰栓作為妊娠零天，記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物癥狀，大鼠于0、3、7、10、13、16、20天稱(chēng)量體重，２０天處死，記錄孕鼠重、黃體數(shù)、死胎數(shù)（著床數(shù)、吸收胎、早期死胎、晚期死胎）、活胎數(shù)、活胎重、性別、外觀異常等。約1/2胎仔固定于Bouin氏液，作內(nèi)臟檢查，另1/2固定于95%灑精作骨骼畸形檢查生殖毒性試驗(yàn)----致畸敏感期毒性試驗(yàn)報(bào)告：將數(shù)據(jù)列成表，提供藥物對(duì)孕期和胚胎的影響，包括孕鼠數(shù)及體重變化，黃體總數(shù)及均數(shù)，活胎總數(shù)及均數(shù)，活胎重，性別，死胎總數(shù)及著床數(shù)，吸收胎，早期和晚期死胎等；藥物對(duì)胎仔各器官的影響，包括在外觀和內(nèi)部檢查中發(fā)現(xiàn)的各種畸形；藥物對(duì)胎仔骨骼發(fā)育的影響，包括頭顱骨、胸骨、前、后肢骨和其它骨骼的骨化程度，變異和畸形等判定：各項(xiàng)數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理后判定藥物的胚胎毒性和致畸潛力

致癌試驗(yàn)短期致癌試驗(yàn)哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化試驗(yàn)小鼠肺腫瘤誘發(fā)短期試驗(yàn)長(zhǎng)期致癌試驗(yàn)致癌試驗(yàn)

哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(短期)劑量：≥3組，高劑量一般以抑制50%集落生長(zhǎng)濃度為基準(zhǔn)藥物接觸時(shí)間：藥品一般和細(xì)胞接觸24h，然后再培養(yǎng)7-14天代謝活化：應(yīng)說(shuō)明外源性代謝活化系統(tǒng)對(duì)照：空白、溶媒、陰性和陽(yáng)性對(duì)照觀察報(bào)告：將細(xì)胞固定、染色、分別計(jì)算每皿集落數(shù)，轉(zhuǎn)化集落數(shù)，轉(zhuǎn)化頻度＝轉(zhuǎn)化集落數(shù)/106存活細(xì)胞，轉(zhuǎn)化率＝轉(zhuǎn)化集落數(shù)/總集落數(shù)致癌試驗(yàn)

哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(短期)判定：1.有明確量效關(guān)系；2.若無(wú)量效關(guān)系，但在≥２個(gè)濃度中發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化；3.在單一劑量下出現(xiàn)≥３個(gè)轉(zhuǎn)化集落時(shí)符合上述一條件者可判為陽(yáng)性，否則為陰性。如判定有困難時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步對(duì)細(xì)胞進(jìn)行核型分析，軟瓊脂接種等觀察判定，必要時(shí)可做動(dòng)物接種生瘤試驗(yàn)

長(zhǎng)期致癌試驗(yàn)動(dòng)物：幼年小、大鼠，♀♂各半。每組１００只劑量：≥３個(gè)，低劑量１-３ACD，其余劑量可根據(jù)藥理毒理作用等因素綜合考慮對(duì)照：空白、溶媒或賦形劑對(duì)照。實(shí)驗(yàn)期限：大鼠２年，小鼠1.5年。給藥途徑：同臨床擬用途徑觀察與檢查：觀察記錄一般情況，肉眼觀察到腫瘤病變時(shí)，取各器官系統(tǒng)做病檢評(píng)定：根據(jù)各組腫瘤發(fā)生率、潛伏期和多發(fā)性等做出全面的科學(xué)評(píng)價(jià)有關(guān)問(wèn)題特殊毒性研究必須加強(qiáng)簡(jiǎn)、快、靈、準(zhǔn)

正確理解審批辦法對(duì)特殊毒理學(xué)研究要求規(guī)定一、二類(lèi)新藥必需完成特殊毒理學(xué)研究致突變?cè)囼?yàn)必須做Ames‘試驗(yàn)、染色體畸變?cè)囼?yàn)和微核試驗(yàn)有關(guān)問(wèn)題生殖毒性試驗(yàn)致畸敏感期試驗(yàn)(-),

一般生殖毒性(x)，圍產(chǎn)期生殖毒性試驗(yàn)(x)避孕藥、性激素和致突變?cè)囼?yàn)陽(yáng)性或有細(xì)胞毒作用新藥才報(bào)送致癌試驗(yàn)受試品或其代謝產(chǎn)物與已知致癌物結(jié)構(gòu)相似受試品長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞毒作用或某些臟器、組織細(xì)胞異常顯著活躍受試品致突變?cè)囼?yàn)結(jié)果為陽(yáng)性報(bào)送致癌試驗(yàn)資料，先做短期，陰性者不必做長(zhǎng)期有關(guān)問(wèn)題受試物配制樣品難溶于水或其它溶劑，不能注射給藥時(shí)，可改為灌胃?？诜o藥盡量研磨均勻，必要時(shí)制成混懸液。對(duì)細(xì)菌或細(xì)胞試驗(yàn)時(shí)，則可以將樣品充分研磨均勻，用水或其它合適的溶劑充分浸取滅菌后使用。劑量設(shè)計(jì)劑量設(shè)計(jì)與急性毒性的LD50值有關(guān)。但少數(shù)低毒西藥和許多基因工程產(chǎn)品，往往測(cè)不出LD50值，只能測(cè)MTD；也有少數(shù)藥品制備困難和價(jià)格昂貴，此時(shí)允許用多少倍ACD或MTD來(lái)表示。細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)，毒性很低不能測(cè)出50%細(xì)胞生長(zhǎng)抑制濃度時(shí)，其最高濃度以不超過(guò)10mM為宜

目的意義

毒性劑量安全范圍毒性反應(yīng):性質(zhì)、程度、量毒關(guān)系、產(chǎn)生時(shí)間，達(dá)峰時(shí)間,

持續(xù)時(shí)間及反復(fù)產(chǎn)生毒性反應(yīng)時(shí)間、遲發(fā)性、蓄積性、耐受性

毒性反應(yīng)靶器官毒性反應(yīng)是否可逆基本內(nèi)容和要求

----動(dòng)物二種動(dòng)物，嚙齒類(lèi)首選大鼠，非嚙齒類(lèi)用犬(Ⅰ類(lèi)藥Beagle犬，其它雜種犬),必要時(shí)用猴動(dòng)物應(yīng)寫(xiě)明供應(yīng)單位及郵編，品系及生產(chǎn)合格證號(hào)(雜種犬例外)大鼠6-8周齡，體重差異不超過(guò)平均體重的20％。3個(gè)月以上可選5-6周齡大鼠Beagle犬4-12月齡，雜種犬齡＜5年♂♀各半

基本內(nèi)容和要求

----飼養(yǎng)管理飼料寫(xiě)明供應(yīng)單位，自配應(yīng)提供配方及成分含量的檢測(cè)報(bào)告動(dòng)物室溫度、濕度、光照和通風(fēng)條件應(yīng)達(dá)標(biāo)籠養(yǎng)大鼠每籠≤5只，♂♀分開(kāi)，有條件時(shí)單籠飼養(yǎng),實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)≥1周,食量每天記錄，體重每周稱(chēng)一次。犬宜單籠飼養(yǎng)，定量喂食，Beagle犬實(shí)驗(yàn)前至少訓(xùn)養(yǎng)1-2周，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。雜種犬要預(yù)先檢疫、驅(qū)蟲(chóng)，實(shí)驗(yàn)前至少訓(xùn)養(yǎng)1月

基本內(nèi)容和要求

----受試藥寫(xiě)明藥名、批號(hào)、來(lái)源、規(guī)格、純度、理化特性、保存條件及配制方法。溶媒或其他賦形劑注明規(guī)格、來(lái)源、純度、批號(hào)應(yīng)符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，最好和藥效、一般藥理、急性毒性、藥代動(dòng)力學(xué)研究用藥有相同質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

基本內(nèi)容和要求

----給藥途徑與臨床給藥途徑一致混入飼料或飲水中灌服時(shí)保證受試藥分布均勻在配制飼料或溶于飲水后仍舊穩(wěn)定計(jì)量準(zhǔn)確臨床iv時(shí)大鼠可用ip代替，im或sc可變換注射部位基本內(nèi)容和要求

----劑量及分組三個(gè)給藥組(大動(dòng)物可二個(gè)組),單位:mg(ml,IU)/kg或/m2以不等濃度等容量給藥低劑量組--高于有效劑量，不出現(xiàn)毒性反應(yīng)中劑量組--產(chǎn)生輕微或中等度毒性反應(yīng)高劑量組--產(chǎn)生明顯或嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，或個(gè)別動(dòng)物死亡空白對(duì)照--溶媒或其它賦形劑，若溶媒或賦形劑有毒性時(shí)則增加正常對(duì)照組基本內(nèi)容和要求

----劑量及分組<3月，大鼠♂♀各10只/組≥3月，大鼠♂♀各20只/組大動(dòng)物大劑量組♂♀各3只

,其余♂♀各2只/組限度試驗(yàn)：如小鼠ig急毒>5g/Kg,iv>2g/Kg仍無(wú)毒性反應(yīng)和死亡或僅個(gè)別有毒性反應(yīng),可只做一個(gè)>50ACD(犬用30ACD)的劑量組

基本內(nèi)容和要求

----給藥周期

表.臨床與動(dòng)物給藥對(duì)應(yīng)周期

臨床給藥周期動(dòng)物給藥周期

1～3天14天

1周1月

4周3月≥1月6月≥3月可一周6天給藥,周日休息,每天給藥時(shí)間相同

基本內(nèi)容和要求

----檢測(cè)指標(biāo)

一般觀察

外觀體征和行為活動(dòng)(NS興奮或抑制，肌肉麻痹或震顫，步態(tài)異常等),皮毛貼身或稀疏豎散,糞便性狀、顏色、食量及體重變化大動(dòng)物應(yīng)增加瞳孔、肛溫、呼吸、嘔吐、流涎、尿、皮膚粘膜(充血、紫紺、蒼白)、眼、鼻、外陰部分泌物等,發(fā)現(xiàn)死亡或?yàn)l死動(dòng)物應(yīng)1小時(shí)內(nèi)及時(shí)尸檢基本內(nèi)容和要求

----檢測(cè)指標(biāo)

血液學(xué)指標(biāo)

紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（Hb）、紅細(xì)胞壓積（Hct）、紅細(xì)胞平均容積（MCV）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量（MCH）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC）、血小板（Plat）計(jì)數(shù)、白細(xì)胞（WBC）計(jì)數(shù)及分類(lèi)（淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞）、凝血時(shí)間（CT），必要時(shí)進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)基本內(nèi)容和要求

----檢測(cè)指標(biāo)

血液生化指標(biāo)

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶（ALP）、總膽紅素（Tbill）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、血葡萄糖（Glu）、總膽固醇（Tch）

必要時(shí)增加相應(yīng)的血液生化指標(biāo)大動(dòng)物要做尿液檢查:亞硝酸鹽、pH、蛋白質(zhì)、尿RBC、葡萄糖、酮體、膽紅素、尿膽原、尿比重、尿WBC

基本內(nèi)容和要求

----檢測(cè)指標(biāo)

病檢器官

臟器系數(shù)：心、肝、脾、