溶藻弧菌誘導(dǎo)凡納濱對(duì)蝦差減文庫的構(gòu)建及其表達(dá)序列標(biāo)簽分析的開題報(bào)告

溶藻弧菌誘導(dǎo)凡納濱對(duì)蝦差減文庫的構(gòu)建及其表達(dá)序列標(biāo)簽分析的開題報(bào)告【摘要】本研究旨在通過溶藻弧菌（Vibrioalginolyticus）的誘導(dǎo)，構(gòu)建凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeusvannamei）在不同處理后的差減文庫，并對(duì)其進(jìn)行序列標(biāo)簽分析來探究其差異表達(dá)基因及功能。具體步驟為：選取凡納濱對(duì)蝦健康種苗進(jìn)行繁殖和培養(yǎng)，并對(duì)其進(jìn)行溶藻弧菌的感染、分離和培養(yǎng)，將分別經(jīng)受感染和未受感染處理的對(duì)蝦組織RNA提取，經(jīng)過初步的質(zhì)檢和分析后，進(jìn)行差減文庫的構(gòu)建，建立基于高通量測序技術(shù)的序列標(biāo)簽分析平臺(tái)，并對(duì)差異基因進(jìn)行功能注釋和通路分析。本研究可為深入了解凡納濱對(duì)蝦抗病機(jī)制、篩選新型抗病菌種、開發(fā)相關(guān)藥物或疫苗提供有益參考?！娟P(guān)鍵詞】溶藻弧菌、凡納濱對(duì)蝦、差減文庫、序列標(biāo)簽分析、功能注釋【引言】凡納濱對(duì)蝦是一種非常重要的海水養(yǎng)殖物種，但由于其生長環(huán)境特殊和養(yǎng)殖條件限制，常常受到各種病害的威脅，特別是病菌感染引起的疾病，常常導(dǎo)致減產(chǎn)、死亡等嚴(yán)重后果。因此，深入了解凡納濱對(duì)蝦的抗病機(jī)制，篩選新型抗病菌種，開發(fā)相關(guān)藥物或疫苗，是當(dāng)前對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展所面臨的重要問題之一。溶藻弧菌是一種常見的對(duì)蝦病原菌，可引起對(duì)蝦組織的病變和免疫反應(yīng)，因此被廣泛應(yīng)用于對(duì)蝦免疫調(diào)節(jié)、疾病模型建立等方面的研究。本研究旨在通過溶藻弧菌的誘導(dǎo)，構(gòu)建凡納濱對(duì)蝦在不同處理后的差減文庫，并對(duì)其進(jìn)行序列標(biāo)簽分析以探究差異表達(dá)基因及其功能?！静牧吓c方法】1.對(duì)蝦的繁殖和培養(yǎng)選取體重在4-6g之間的凡納濱對(duì)蝦健康種苗，進(jìn)行繁殖和培養(yǎng)，養(yǎng)殖環(huán)境為海水溫度24-30℃，鹽度為25-35‰，PH值為7.5-8.5，水質(zhì)均衡。2.溶藻弧菌的誘導(dǎo)和對(duì)蝦組織的感染將溶藻弧菌分別在TSB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行12h的預(yù)培養(yǎng)，在OD600為0.6時(shí)離心收集，經(jīng)PBS洗滌后，將細(xì)菌懸液分別用于感染和未感染組織的處理，感染處理的組織分別培養(yǎng)2h、6h、12h和24h，未感染處理的組織培養(yǎng)24h作為對(duì)照。3.RNA的提取和初步分析分別對(duì)經(jīng)過感染和未感染處理的對(duì)蝦組織進(jìn)行總RNA的提取，并通過Bioanalyzer2100儀器進(jìn)行初步的質(zhì)檢和分析。4.差減文庫的構(gòu)建采用SMARTerPCRcDNA合成試劑盒和PCR分子克隆試劑盒構(gòu)建差減文庫，質(zhì)量評(píng)價(jià)通過qPCR和高通量測序技術(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。5.序列標(biāo)簽分析和功能注釋建立基于高通量測序技術(shù)的序列標(biāo)簽分析平臺(tái)，對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行功能注釋和通路分析。【預(yù)期結(jié)果】1.成功構(gòu)建凡納濱對(duì)蝦在不同處理后的差減文庫，獲得大量高質(zhì)量的RNA序列數(shù)據(jù)。2.通過序列標(biāo)簽分析，鑒定出不同處理后的差異表達(dá)基因，并進(jìn)行通過GO和KEGG通路分析注釋其功能。3.揭示凡納濱對(duì)蝦抗病機(jī)制以及溶藻弧菌的致病機(jī)制，為對(duì)蝦病害防治提供有益參考?！窘Y(jié)論】溶藻弧菌的誘導(dǎo)可成功構(gòu)建凡納濱對(duì)