馬傳染性貧血

關(guān)于馬傳染性貧血馬傳染性貧血病簡(jiǎn)介馬傳染性貧血，是由馬傳染性貧血病毒引起馬屬動(dòng)物的一種慢性傳染病，以病毒持續(xù)感染、反復(fù)發(fā)熱和貧血為特征，且可人畜互傳，一旦發(fā)生很難消滅。第2頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天流行病學(xué)病馬和帶毒馬是本病的傳染源，其血液、肝、脾、淋巴結(jié)等均有病毒存在，發(fā)熱期病馬分泌物和排泄物也含有病毒。吸血昆蟲(chóng)（蚊、虻等）是主要的傳播媒介，也可經(jīng)消化道、呼吸道、交配、胎盤(pán)傳染，也可由被病毒污染的注射針頭和診療器械等散播。僅馬屬動(dòng)物易感，其中以馬最易感，驢、騾次之，且無(wú)品種、年齡和性別差異。本病主要呈地方流行或散發(fā)。一般無(wú)嚴(yán)格的季節(jié)性和地區(qū)性，但在吸血昆蟲(chóng)較多的夏秋季節(jié)及森林、沼澤地帶發(fā)病較多。在新疫區(qū)以急性型多見(jiàn)，病死率較高，老疫區(qū)則以慢性型、隱性型為多，病死率較低。

第3頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天病原學(xué)馬傳染性貧血病毒（EIAV）為RNA病毒，屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬。病毒粒子呈圓形，有囊膜，以出芽方式成熟和釋放。病毒有群特異性抗原，用補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)和瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)可以檢出，主要用于本病的診斷。另還有型特異性抗原，是各型毒株間不同的抗原，存在于病毒粒子表面，可用病毒-血清中和試驗(yàn)檢出，主要用于病毒型的鑒別。本病至少有14個(gè)型。病毒只在馬屬動(dòng)物白細(xì)胞及驢胎骨髓、肺、脾、皮膚、胞腺等細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)才可復(fù)制。用馬屬動(dòng)物以外的其它動(dòng)物人工感染和進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)均未獲成功。

第4頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天病毒對(duì)外界的抵抗力較強(qiáng)。在糞便中能生存兩個(gè)半月，將糞便堆積發(fā)酵時(shí)，經(jīng)30分鐘即可死亡。2%～4%氫氧化鈉液和福爾馬林液，均可在5～10分鐘內(nèi)將其殺死，3%來(lái)蘇兒液可在20分鐘內(nèi)殺死。日光照射1～4小時(shí)死亡。在-20℃左右病毒可保存毒力達(dá)6個(gè)月到2年。病毒對(duì)熱的抵抗力較弱，煮沸立即死亡。第5頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天臨床癥狀臨床特征以發(fā)熱(稽留熱或間歇熱)為主，并有貧血、出血、黃疸、心機(jī)能紊亂、浮腫和消瘦等癥狀。血相變化：紅細(xì)胞顯著減少，血紅蛋白降低，血沉加速。白細(xì)胞減少，丙種球蛋白增高，外周血液中出現(xiàn)吞鐵細(xì)胞。在發(fā)熱期，嗜酸粒細(xì)胞減少或消失，退熱后，淋巴細(xì)胞增多。根據(jù)臨診表現(xiàn)，可分為急性、亞急性、慢性和隱性四種病型。

第6頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天病理變化急性型呈現(xiàn)全身敗血變化。漿膜、黏膜、淋巴結(jié)和實(shí)質(zhì)臟器有彌漫性出血點(diǎn)(斑)。脾急性腫大，暗紅或紫紅色，紅髓軟化，白髓增生，切面呈顆粒狀。肝腫大，黃褐色或紫紅色，肝細(xì)胞索變性與中央靜脈、竇狀隙淤血交織，使肝切面形成豆蔻狀或檳榔狀花紋，有“豆蔻肝”或“檳榔肝”之稱(chēng)。亞急性和慢性病主要是脾、肝、腎、心臟及淋巴結(jié)等的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞的增生，肝臟內(nèi)見(jiàn)有多量吞鐵細(xì)胞。長(zhǎng)骨的骨髓紅區(qū)擴(kuò)大，黃髓內(nèi)有紅髓增生灶，慢性嚴(yán)重病例骨髓呈乳白色膠凍狀。第7頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天馬傳染性貧血驢白細(xì)胞活疫苗用馬傳染性貧血病毒(EIAV)通過(guò)驢白細(xì)胞人工馴化而制成的疫苗。為中國(guó)首創(chuàng)，可刺激馬、驢產(chǎn)生明顯體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，保護(hù)率分別達(dá)85%以上(馬)和100%(驢)。對(duì)馬、驢接種后免疫力的產(chǎn)生雖較緩慢,但免疫持續(xù)期較長(zhǎng)，免疫保護(hù)率較高。這是目前國(guó)際上唯一的馬傳染性貧血活毒疫苗,該成果達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水平。第8頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天第9頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天毒種選擇毒種：馬傳貧驢白細(xì)胞弱毒。（毒力弱，免疫原性良好。）應(yīng)符合條件：毒種病毒液含毒量對(duì)培養(yǎng)的驢白細(xì)胞≥106TCID50/ml；病毒液對(duì)驢最小感染量與免疫量≤10-5/ml；病毒液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)瓊擴(kuò)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的陽(yáng)性血清必須有抗原性，與補(bǔ)體抗原效價(jià)應(yīng)在3.0以上；接種健康馬屬動(dòng)物不出現(xiàn)馬傳貧癥狀和不引起死亡，但具有血清學(xué)反應(yīng)。第10頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天制造要點(diǎn)驢白細(xì)胞培養(yǎng)：動(dòng)物選擇，供提取驢白細(xì)胞的驢為2~5歲無(wú)馬傳貧感染的健康者。無(wú)菌采取血漿并分離出白細(xì)胞，加賽氏液（Seligmarls）與牛血清混合的營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)48h。接毒按3%量接毒后，繼續(xù)培養(yǎng)。收獲病毒再培養(yǎng)5~7d進(jìn)行，收毒凍融二次。第11頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)疫苗需無(wú)菌；補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)效價(jià)不低于2.0；驢白細(xì)胞做毒力測(cè)定不低于105TCID50/ml；原苗5ml皮下注射健康馬，觀察3個(gè)月，每天測(cè)溫兩次，每2Od進(jìn)行補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)檢驗(yàn)；須無(wú)馬傳貧癥狀；血清陽(yáng)性率需達(dá)到2/3~3/4，苗可判為合格。第12頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天保存與使用液體苗0~4℃可保存7d，-20℃以下可保存一年。凍干苗0~4℃可保存6個(gè)月，-20℃以下可保存兩年。液體苗為微黃色澄清液體。凍干苗為微黃色海綿狀疏松團(tuán)塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解。按瓶簽注明頭份，用PBS緩沖液稀釋?zhuān)R、驢、騾各皮下注射2毫升。注苗后，馬需3個(gè)月，驢、騾需2個(gè)月才能產(chǎn)生免疫力，免疫持續(xù)期為2年。第13頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天診斷制劑1、馬傳貧瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)抗原毒種：驢胎肺、真皮、胸腺二倍體細(xì)胞上培養(yǎng)傳代適應(yīng)，抗原性良好的馬傳貧病毒。毒種條件：收毒后凍融三次，無(wú)菌收集。按1.5%沉淀物制出抗原，免疫擴(kuò)散法測(cè)定效價(jià)，擴(kuò)散環(huán)直徑10mm以上。第14頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天制造要點(diǎn)：將6月齡左右驢胎肺、皮膚、胸腺等組織制成二倍體細(xì)胞，換入等量維持液，按2%-5%接種，培養(yǎng)10-15d收毒。調(diào)pH至5.0,4℃透析15h，離心，棄上清，沉渣以pH8.6硼酸緩沖液稀釋?zhuān)偌右颐蜒心?，待乙醚揮發(fā)后重復(fù)一次處理后即為抗原。第15頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天抗原檢驗(yàn)：用含8個(gè)單位標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清，配置成含1%標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清的1%瓊脂平板，經(jīng)反應(yīng)后出現(xiàn)沉淀環(huán)者即為合格。第16頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、馬傳貧補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)抗原獨(dú)到特點(diǎn)：應(yīng)用驢白細(xì)胞或驢胎肺、骨髓傳代細(xì)胞生產(chǎn)抗原；把小牛血清改為大牛血清；把乙醚處理病毒培養(yǎng)物改為吐溫-80（非離子型表面活性劑）和乙醚等量聯(lián)合處理，大大增加抗原生產(chǎn)量。3、ELISA抗原第17頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天馬傳貧疫苗研究意義馬傳貧疫苗的研究成功，突破了慢病毒不能免疫的理論，對(duì)慢病毒的免疫預(yù)防提供了戰(zhàn)略性的理論依據(jù)，蘊(yùn)含著慢病毒免疫的巨大信息，為一系列人畜慢病毒免疫的研究開(kāi)辟了新的路線，馬傳貧疫苗作用機(jī)理的闡明將為AIDS疫苗的研究提供借鑒。第18頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天原來(lái)，馬傳貧疫苗是采用傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)方法研制出來(lái)的，這種旨在使病毒在細(xì)胞傳代培養(yǎng)的過(guò)程中減低毒力的方法，不但所用的時(shí)間較長(zhǎng)，而且由于受到技術(shù)手段的限制，研究者只能看到它最終的結(jié)果，卻并不能了解其中的免疫機(jī)理，無(wú)從知曉一個(gè)原本可以使動(dòng)物致死的病毒究竟何時(shí)變成有免疫保護(hù)作用的疫苗了。如今，運(yùn)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)就能彌補(bǔ)傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)技術(shù)知其然、不知其所以然的缺憾。第19頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天馬傳貧病毒與艾滋病病毒的主要遺傳信息的基因結(jié)構(gòu)完全相同，所以，只要找到馬傳貧病毒基因中的有毒部分，就可以確定HIV中帶毒基因的位置；如果將HIV的這部分基因減掉后其毒性也隨之消失的話，艾滋病致人死地的謎底就將被揭開(kāi)。因此，首當(dāng)其沖的是要找到馬傳貧病毒中這段關(guān)鍵的致病基因。此時(shí)，保存了20年的馬傳貧疫苗幾百代傳代樣本就派上了大用場(chǎng)——各代病毒的毒力是怎樣減下來(lái)的，免疫原性是怎樣提上去的，這些信息對(duì)于艾滋病疫苗的研制有著重要的指導(dǎo)作用。第20頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天在完成了一系列不同層面的基因?qū)Ρ群?，研究人員終于找到了那些缺失或突變的基因位點(diǎn)，并以實(shí)驗(yàn)證實(shí)了馬傳貧疫苗的減毒原理：這些位點(diǎn)中的某些突變，就是使馬傳貧病毒從有毒變無(wú)毒，進(jìn)而激發(fā)馬體產(chǎn)生免疫保護(hù)的關(guān)鍵所在。第21頁(yè),共23頁(yè)，2024年2月25日，星期天科學(xué)家們?cè)?/p>