全自動(dòng)封閉型發(fā)光免疫分析儀校準(zhǔn)規(guī)范

JJF1752—20191全自動(dòng)封閉型發(fā)光免疫分析儀校準(zhǔn)規(guī)范1范圍本規(guī)范適用于化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光原理的全自動(dòng)封閉型發(fā)光免疫分析儀的校準(zhǔn)。2引用文件本規(guī)范引用了下列文件:JJF1001—2011通用計(jì)量術(shù)語(yǔ)及定義JJF1059.1測(cè)量不確定度評(píng)定與表示YY/T1155—2019全自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3概述全自動(dòng)封閉型發(fā)光免疫分析儀(以下簡(jiǎn)稱免疫分析儀)是采用免疫分析方法檢測(cè)樣本中特定靶標(biāo)的分析儀器。免疫分析儀通常由計(jì)算機(jī)系統(tǒng)、內(nèi)部伺服系統(tǒng)、加樣單元、清洗單元、孵育單元及檢測(cè)單元構(gòu)成(見(jiàn)圖1),通常只能與廠商配套提供的試劑盒組成檢測(cè)系統(tǒng)完成特定靶標(biāo)的分析,具有封閉性。免疫分析儀可按照設(shè)定的程序自動(dòng)完成加樣、清洗、孵育、檢測(cè)等整個(gè)分析過(guò)程,通過(guò)檢測(cè)免疫反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光或電化學(xué)發(fā)光信號(hào)實(shí)現(xiàn)特定靶標(biāo)定性或定量檢測(cè)。圖1免疫分析儀結(jié)構(gòu)示意圖4計(jì)量特性4.1示值誤差以5.2.1中規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測(cè)量結(jié)果表示,示值誤差不大于±15%,也可參照廠商給出的技術(shù)要求。4.2重復(fù)性JJF1752—20192測(cè)量重復(fù)性不大于8%。4.3攜帶污染率攜帶污染率不大于1%。4.4線性線性相關(guān)性系數(shù)r不小于0.99。注:以上技術(shù)指標(biāo)不是用于合格性判別,僅供參考。5校準(zhǔn)條件5.1環(huán)境條件5.1.1環(huán)境溫度:(10~30)℃。5.1.2相對(duì)濕度:≤70%。5.1.3室內(nèi)應(yīng)具備良好的防塵措施,免疫分析儀應(yīng)遠(yuǎn)離振動(dòng)、電磁干擾。5.2校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和試劑5.2.1校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):人胰島素、生長(zhǎng)激素或甲胎蛋白等有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),相對(duì)擴(kuò)展質(zhì)的選擇原則參照附錄A。6校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法6.1示值誤差示值誤差的校準(zhǔn)宜采用免疫分析儀規(guī)定檢測(cè)項(xiàng)目的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。通常情況下,檢測(cè)項(xiàng)目的校準(zhǔn)點(diǎn)至少應(yīng)當(dāng)包括1個(gè)低值點(diǎn)和1個(gè)高值點(diǎn),低值點(diǎn)和高值點(diǎn)至少應(yīng)相差1個(gè)數(shù)量級(jí),且低值點(diǎn)和高值點(diǎn)應(yīng)當(dāng)覆蓋客戶要求的校準(zhǔn)點(diǎn)或校準(zhǔn)區(qū)間;當(dāng)客戶要求時(shí),也可進(jìn)行單點(diǎn)校準(zhǔn)。分別測(cè)量選定檢測(cè)項(xiàng)目的校準(zhǔn)點(diǎn),每個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)分別重復(fù)測(cè)量3次,計(jì)算3次測(cè)量結(jié)果的平均值。根據(jù)公式(1)計(jì)算示值誤差:Δc=c-cs(1)式中:Δc—示值誤差;c—3次測(cè)量結(jié)果的平均值;cs—標(biāo)準(zhǔn)值。單位與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值的單位一致。6.2重復(fù)性對(duì)低值點(diǎn)重復(fù)測(cè)量6次,根據(jù)公式(2)計(jì)算相對(duì)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差srel作為重復(fù)性的表征:srel=(xi-x)2i=16-11×x(2)JJF1752—20193式中:srel—相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差;xi—第i次標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測(cè)量值; x—6次測(cè)量結(jié)果平均值;i測(cè)量序號(hào)。6.3攜帶污染率按照從高值到低值的測(cè)量順序,分別連續(xù)測(cè)量高值和低值各3次,測(cè)量值分別記為i1、i2、i3和j1、j2、j3。以CO來(lái)表征免疫分析儀的攜帶污染率,見(jiàn)公式(3):CO= (3)式中:CO—攜帶污染率;j1—低值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)第1次測(cè)量值;j3—低值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)第3次測(cè)量值;i3—高值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)第3次測(cè)量值。6.4線性在低值至高值范圍內(nèi),對(duì)至少5個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(或配制的校準(zhǔn)溶液)進(jìn)行測(cè)量,重復(fù)測(cè)量3次,取其平均值。將測(cè)量結(jié)果的平均值與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值(或校準(zhǔn)溶液的配制值)進(jìn)行線性回歸,按公式(4)~公式(7)計(jì)算相關(guān)系數(shù)r:Sxx=∑c- -Syy=∑2-()2 -Sxy=∑cs-∑c∑c√SxxSyyr=√SxxSyy式中:cs—每個(gè)水平標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值,單位為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值的單位;—每個(gè)水平3次測(cè)量結(jié)果平均值,單位為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值的單位;n—標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度水平的個(gè)數(shù);r—相關(guān)系數(shù)。(4)(5)(6)(7)7校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)校準(zhǔn)記錄應(yīng)盡可能詳盡地記載測(cè)量數(shù)據(jù)和計(jì)算結(jié)果,推薦的校準(zhǔn)記錄格式見(jiàn)附錄B。示值誤差測(cè)量結(jié)果的測(cè)量不確定度應(yīng)按JJF1059.1的要求評(píng)定,不確定度評(píng)定示例見(jiàn)附錄C。經(jīng)校準(zhǔn)的免疫分析儀應(yīng)出具校準(zhǔn)證書(shū),校準(zhǔn)證書(shū)應(yīng)符合JJF1071—2010中5.12的要求。JJF1752—201948復(fù)校時(shí)間間隔由于復(fù)校時(shí)間間隔的長(zhǎng)短是由免疫分析儀的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等諸因素所決定的,因此,送校單位可根據(jù)實(shí)際使用情況自主決定復(fù)校時(shí)間間隔,建議不超過(guò)1年。5附錄A校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選擇原則A.1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選擇人胰島素、生長(zhǎng)激素或甲胎蛋白有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不可獲得或客戶要求時(shí),可選用其他檢驗(yàn)項(xiàng)目的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)。A.2校準(zhǔn)示值誤差的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)示值誤差的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)具有互換性*,由于免疫分析存在基質(zhì)效應(yīng),校準(zhǔn)示值誤差時(shí)不建議將有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋使用,否則可能影響互換性。*互換性指對(duì)于給定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的規(guī)定量,由兩個(gè)給定測(cè)量程序所得測(cè)量結(jié)果之間關(guān)系與另一個(gè)指定物質(zhì)所得測(cè)量結(jié)果之間關(guān)系一致程度表示的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性。[JJF1001—2011,定義8.16]A.3校準(zhǔn)重復(fù)性、攜帶污染率和線性的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)重復(fù)性、攜帶污染率和線性時(shí)可采用高純有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按照重量-容量法配制校準(zhǔn)溶液,但此時(shí)應(yīng)當(dāng)考慮配制過(guò)程中引入的不確定度;用于攜帶污染率校準(zhǔn)的兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度應(yīng)至少相差一個(gè)數(shù)量級(jí);用于線性校準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的最高濃度與最低濃度應(yīng)至少相差一個(gè)數(shù)量級(jí)。JJF1752—20196附錄B校準(zhǔn)記錄及校準(zhǔn)證書(shū)的內(nèi)容及格式推薦的全自動(dòng)封閉型發(fā)光免疫分析儀校準(zhǔn)記錄、校準(zhǔn)證書(shū)內(nèi)容及格式分別見(jiàn)圖B.1和圖B.2。共2頁(yè),第1頁(yè)儀器名稱型號(hào)制造廠商出廠編號(hào)委托單位名稱聯(lián)系人地址電話溫濕度校準(zhǔn)日期記錄編號(hào)證書(shū)編號(hào)校準(zhǔn)員核驗(yàn)員一、示值誤差標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定值平均值標(biāo)準(zhǔn)值示值誤差低值高值二、重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定值低值平均值相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差/%圖B.1校準(zhǔn)記錄的內(nèi)頁(yè)格式及內(nèi)容JJF1752—20197三、攜帶污染率共2頁(yè),第2頁(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定值攜帶污染率/%低值高值四、線性相關(guān)性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定值平均值標(biāo)準(zhǔn)值線性相關(guān)系數(shù)123456圖B.1(續(xù))8共頁(yè),第頁(yè)序號(hào)校準(zhǔn)項(xiàng)目校準(zhǔn)結(jié)果1示值誤差2重復(fù)性3攜帶污染率4線性附注:1.示值誤差校準(zhǔn)結(jié)果測(cè)量不確定度:2.線性范圍:3.校準(zhǔn)技術(shù)依據(jù):4.校準(zhǔn)的環(huán)境條件及地點(diǎn):環(huán)境溫度:℃,相對(duì)濕度:%校準(zhǔn)地點(diǎn):校準(zhǔn)員:核驗(yàn)員:圖B.2校準(zhǔn)證書(shū)的內(nèi)容及格式JJF1752—2019附錄C示值誤差測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)定示例C.1測(cè)量方法采用免疫分析儀測(cè)定有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),并與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比較。C.2測(cè)量模型示值誤差可由公式(C.1)給出:(C.1)Δc=c-cs(C.1)式中:Δc—示值誤差,單位為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值的單位;c—3次測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值,單位為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值的單位;cs—標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值。C.3不確定度來(lái)源不確定度來(lái)源包括:a)免疫分析儀測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(c); b)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(cs)。 C.4合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算公式依據(jù)不確定度傳播律,免疫分析儀測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(c)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(cs)不相關(guān),故輸出量估計(jì)方差的完整表達(dá)式應(yīng)為:u=u(c)2+u(cs)2(C.2)由公式(C.2)得:uc=u(c)2+u(cs)2(C.3)下面以一次免疫分析儀校準(zhǔn)為例具體分析其測(cè)量不確定度。在校準(zhǔn)中胰島素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)3次測(cè)定的結(jié)果分別為152pmol/L、160pmol/L和156pmol/L;該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值為(148±7)pmol/L(k=2)。C.5標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表見(jiàn)表C.1。表C.1免疫分析儀測(cè)定胰島素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表不確定度來(lái)源輸入量的標(biāo)準(zhǔn)不確定度pmol/L靈敏系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量pmol/L u(c) 測(cè)量重復(fù)性3.013.0u(cs)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)3.5-13.5uc=4.6pmol/LJJF1752—2019C.6標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量計(jì)算C.6.1測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量u(c)選定一臺(tái)全自動(dòng)封閉型發(fā)光免疫分析儀,對(duì)該胰島素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)連續(xù)測(cè)量10次,得到一組測(cè)量值:152pmol/L,160pmol/L,156pmol/L,160pmol/L,162pmol/L,151pmol/L,167pmol/L,163pmol/L,164pmol/L,158pmol/L。則單次測(cè)量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差s(xi):s(xi)=i(nx-i-1x)2≈5.1(pmol/L)實(shí)際校準(zhǔn)時(shí)在重復(fù)性條件下連續(xù)測(cè)量3次,以3次測(cè)量的算術(shù)平均值作為結(jié)果,則由測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量:C.6.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量u(cs)u(c)=sC.6.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量u(cs)由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度分量u(cs)可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)提供的擴(kuò)展不確定度U(cs)和包含因子k根據(jù)公式(C.4)計(jì)算:u(cs)(C.4)式中:u(