T-CVMA 129-2023 口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC 抗體競爭磁微粒CLIA 檢測方法

學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載ICS

11.220學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載CCS

41 T/CVMA

129—2023

粒

Competitive

magnetic

particle

based

chemiluminescence

fordetecting

antibodies

against

3ABC

non-structural

protein

foot

andmouth

disease

virus 中國獸醫(yī)協(xié)會 發(fā)

布學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/CVMA

1292023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載

《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則

部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定馮肖肖。學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/CVMA

1292023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載

檢測方法

本文件規(guī)定了口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體競爭磁微粒檢測方法的試劑、儀器設(shè)備及耗

6682

541

5.1

25

5.2

5.3

5.4

5.5

12.5

50

200

800

1600

學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/CVMA

1292023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載5.6

100U800U

5.7

30

180

300

5.8

；最小稱量：100

1.5

——反應(yīng)杯；——試劑船。

本方法使用磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析法，采用競爭原理，將口蹄疫蛋白作為抗原偶聯(lián)于抗體工作校準(zhǔn)品建立校準(zhǔn)曲線，將待檢樣本檢測結(jié)果代入校準(zhǔn)曲線計算非結(jié)構(gòu)蛋白

8.1

樣品采集按照

541進(jìn)行。無菌注射器靜脈采血，不少于

，用自然析出法分離血清后，置于無菌血清管中，按照

樣品處理的生物安全措施、實驗室

生物安全通用要求處理樣本，若

℃冷藏。8.2

8.18000

1.5

300

檢；若樣品中存在沉淀或絮狀物等雜質(zhì)，應(yīng)離心去除雜質(zhì)，輕微操作，避免出現(xiàn)泡沫。8.3

25

66828.4

學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/CVMA

1292023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載8.5

9.1

將口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體工作校準(zhǔn)品～工作校準(zhǔn)放入樣本架，按照9.4進(jìn)行檢測標(biāo)9.59.2

口蹄病毒結(jié)構(gòu)體產(chǎn)校準(zhǔn)產(chǎn)品準(zhǔn)品入樣架，校準(zhǔn)線進(jìn) 28d 9.3

a)

b) 24

9.4

免疫反應(yīng)：取50

待測樣本，15

磁微粒工作液、15

酶標(biāo)抗體、60

μL稀釋液，分別加入37

20

30s30030s

檢測：加入化學(xué)發(fā)光底物100于清洗后的反應(yīng)杯中，混勻30s懸浮磁微粒，反應(yīng)分鐘，

9.5

12.5U50

200

800

1600

0.99學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/CVMA

1292023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載10

10.1

30

180

300

10.2

180U180U1.15

8.00

0.50

1.98

225.00

-20

1.15

8.00

0.20

0.50

ｗｗｗ兔．ｂｚｆ學(xué)兔ｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/CVMA

1292023ｗｗｗ兔．ｂｚｆ學(xué)兔ｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載

A.1

將表中的試劑依次加入燒杯中，加滅菌蒸餾水至600

，溶解，定容至1000

，置于

表A.1 A.2表A.1 將表600

1000

表A.2

A.3表A.2

按表600

學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/CVMA

1292023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載

B.1

41~42℃

30~40

10

20%

行抗體檢測，血清阻斷率

應(yīng)大于

70%，判為非結(jié)構(gòu)蛋白抗體強(qiáng)陽性；按照

中液相阻

1:90B.2

校準(zhǔn)品稀釋液梯度稀釋B.1

中非結(jié)構(gòu)蛋白阻斷方法進(jìn)行抗體檢測，計算檢測結(jié)果，定義檢測

50%時的血清為

100U，若此時稀釋比例為

1:128

1:256

稀釋血清為

50U。依次類推，最終選擇

50

200

800

1600

36

學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/CVMA

1292023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載

3ABC

C.1

3ABC

100U800U

36

C.2

3ABC

12.5

200

，用口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白

管式化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測方法檢測

次，計算平均值，質(zhì)控范圍為

。質(zhì)控品36

2523969.55

3546596.17

1245251.68

2989450.90

637722.68

1942262.46

121241.23

278123.34

10564.17

34009.54

925.25

10497.75