22《動物細(xì)胞工程》課件10

2024/3/2522《動物細(xì)胞工程》課件10動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞部分細(xì)胞“癌變”，遺傳物質(zhì)改變，無限傳代動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動物體50代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁剝離、分瓶細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞系1、過程：細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)胞系？多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變幾個有關(guān)概念：原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。1、無菌、無毒：

2、全部的營養(yǎng)物質(zhì)：

3、適宜的溫度和PH值：

4、必要的氣體條件：（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動物血清等。）保證細(xì)胞順利的生長增殖36.5+（-）0.5度,7.2-7.4O2和CO2（95%空氣和5%CO2）2、條件：維持培養(yǎng)液的PH元貝駕考ybjx元貝駕考2016科目一科目四

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3、應(yīng)用：大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）作為基因工程中的受體細(xì)胞培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植株培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較1.動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是（）A、動物細(xì)胞融合B、胚胎移植C、動物細(xì)胞培養(yǎng) D、核移植2.下列有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述中正確的是（）A、動物細(xì)胞培育的目的是獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白B、動物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細(xì)胞分散C、細(xì)胞的癌變發(fā)生于原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡過程中D、培養(yǎng)至50代后的傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞株CB

3.下列關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述中，錯誤的是（）A、用于培養(yǎng)的細(xì)胞大多取自胚胎或幼齡動物的器官或組織B、將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成單個細(xì)胞C、在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液D、動物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細(xì)胞會衰老死亡D

4.下圖是動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此回答：（1）容器A中放置的是動物器官或組織。它一般取自

______________________。（2）容器A中的動物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是

，然后用

酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來，這樣做的目的是

（3）培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行，瓶中的培養(yǎng)基成分有

_______________________________________等。幼齡動物或胚胎的組織或器官剪碎組織

胰蛋白

使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸

葡萄糖、氨基酸、水、無機(jī)鹽、促生長因子與微量元素和動物血清

在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，有許多細(xì)胞衰老死亡，這是培養(yǎng)到第

代，到這時的培養(yǎng)稱為_____________。⑷為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用

處理然后配置成

，再分裝。⑸在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部死亡，原因是

10原代培養(yǎng)胰蛋白酶

細(xì)胞懸液

細(xì)胞沒有發(fā)生癌變

核移植技術(shù)和克隆動物

1.概念：將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。核移植（難度高）受體細(xì)胞：MⅡ期的卵母細(xì)胞胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物原理：動物體細(xì)胞核的全能性。取供體細(xì)胞取卵母細(xì)胞

供體細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)到MⅡ中期

卵母細(xì)胞去核

供體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞

供體核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞

重組胚胎

代孕母牛

生出與供體遺傳物質(zhì)基本相同的個體2.過程：3.克隆動物的研究意義：1.克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2.改良動物品種3.治療人類疾病，作為供體4.保護(hù)瀕危動物4．體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：1.許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，免疫失調(diào)等。2.成功率非常低及克隆動物食品的安全性問題。1.下列哪—項(xiàng)屬于克?。ǎ〢．將雞的某個DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B．將抗藥菌的某基因引入草履蟲的細(xì)胞內(nèi)C．將鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)過免疫的脾細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞D．將某腫瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)繁殖成一個細(xì)胞系D2.（多選）美國杜克大學(xué)醫(yī)療中心的一個研究小組利用成年豬的動脈血管細(xì)胞和模擬胚胎環(huán)境的新型生物反應(yīng)器,成功地在實(shí)驗(yàn)室里培育出新的動脈血管，這種血管的外形和功能都與真的血管一樣,這一研究成果是生物組織培養(yǎng)領(lǐng)域的重大進(jìn)展。下列關(guān)于以上技術(shù)的敘述中，正確的是（）A．屬于“克隆”B．可能要利用去核卵細(xì)胞C．關(guān)鍵是激發(fā)血管細(xì)胞的全能性D．關(guān)鍵是激發(fā)血管細(xì)胞發(fā)育成血管的潛能ABD3.從母羊甲的體細(xì)胞中取出細(xì)胞核，注入到母羊乙去掉核的卵細(xì)胞中，融合后的細(xì)胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宮內(nèi)，出生小羊的大多數(shù)性狀 （）A、難以預(yù)測B、像甲C、像乙D、像丙4.生物技術(shù)的發(fā)展速度很快，已滅絕生物的“復(fù)生”將不再是神話。如果世界上最后一只野驢剛死亡，以下較易成功“復(fù)生”野驢的方法是（）A．將野驢的體細(xì)胞取出，利用組織培養(yǎng)技術(shù)，經(jīng)脫分化、再分化，培育成新個體B．將野驢的體細(xì)胞兩兩融合，再經(jīng)組織培養(yǎng)培育成新個體C．取出野驢的體細(xì)胞核移植到母家驢的去核卵細(xì)胞中，經(jīng)孕育培養(yǎng)成新個體D．將野驢的基因?qū)爰殷H的受精卵中，培育成新個體B

C

5.下圖所示為用兩棲動物卵所做的實(shí)驗(yàn)圖解，據(jù)圖回答下列問題：⑴蝌蚪腸上皮細(xì)胞核中含有青蛙發(fā)育所需的_________，重新組合的細(xì)胞相當(dāng)于蛙的______

細(xì)胞，經(jīng)過____________和________________形成組織和器官。全部基因

受精卵

細(xì)胞分裂細(xì)胞分化⑵本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明_____________________具有全能性，圖中A過程采用的技術(shù)手段稱做_______________。

動物體細(xì)胞核核移植技術(shù)動物細(xì)胞融合1.過程：動物細(xì)胞A動物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合2個完整的雜交細(xì)胞AB有絲分裂（膜融合、質(zhì)融合）（核融合）注意：動物細(xì)胞的融合也需要把多個兩種細(xì)胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再從中篩選雜交細(xì)胞2.意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。3.應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理融合前處理誘導(dǎo)方法用途細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細(xì)胞分散物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)、生物方法獲得部分或完整植株主要用于制備單克隆抗體1、基因型為Aa與基因型為Bb的動物體細(xì)胞混合，用滅活的仙臺病毒處理后，不可能獲得下列哪種基因型的細(xì)胞A．AAaaB．AaBbC．AabbD．BBbb2、動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是①誘導(dǎo)融合的方法完全相同②所用的技術(shù)手段不相同③所采用的原理完全相同④都能形成雜種細(xì)胞A.①② B.①③C.②④ D.③④3、動物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)體融合比較，在動物細(xì)胞融合中有特殊性的是A、融合的原理 B、融合的優(yōu)點(diǎn)C、融合的誘導(dǎo)手段 D、融合的過程C

C

C

4.科學(xué)工作者用綠色和紅色熒光材料，分別標(biāo)記人和鼠的細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)。當(dāng)兩個標(biāo)記細(xì)胞融合成一個細(xì)胞后，起初一半膜發(fā)出綠色熒光，另一半膜發(fā)出紅色熒光，一段時間后，兩種顏色的熒光點(diǎn)均勻分布，如圖所示。請分析回答：⑴該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明了細(xì)胞膜

，這是因?yàn)棰迫粼趦蓚€細(xì)胞融合成一個細(xì)胞后，將融合細(xì)胞置于0℃條件下再保持40min，則融合細(xì)胞仍然是一半膜發(fā)綠色熒光，另一半膜發(fā)紅色熒光，這說明具有一定的流動性

構(gòu)成細(xì)胞膜的磷脂分子和蛋白質(zhì)大都是可以運(yùn)動的膜的流動性受溫度影響，在低溫下分子的運(yùn)動受抑制單克隆抗體1.單克隆抗體制備過程誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞有何優(yōu)點(diǎn)注射抗原的目的是什么為何要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測，多次篩選大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單克隆抗體的方法過程：B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合B-B細(xì)胞B-瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（B-瘤細(xì)胞）克隆化培養(yǎng)抗體檢測產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體2、關(guān)于單克隆抗體，下列敘述不正確的是A、可以制成診斷盒．用于疾病的珍斷B、可以與藥物結(jié)合，用于病變細(xì)胞的定向治療C、可以利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)D、可以在生物體內(nèi)生產(chǎn)，不能體外生產(chǎn)3、“生物導(dǎo)彈”是指A、單克隆抗體B、帶有特定藥物的單克隆抗體C、雜交細(xì)胞D、B淋巴細(xì)胞D

B

4.單克隆抗體技術(shù)在疾病診斷和治療以及生命科學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用。下列關(guān)于單克隆抗體的敘述，錯誤的是 A．特異性強(qiáng)、靈敏度高B．與抗癌藥物結(jié)合可制成“生物導(dǎo)彈”C．體外培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞可大量分泌單克隆抗體D．由效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而成的雜交瘤細(xì)胞分泌C

5.下圖為細(xì)胞融合的簡略過程（只考慮兩個細(xì)胞的融合）請據(jù)圖回答：

I．若A、B是基因型分別為rrHH、RRhh兩個煙草品種細(xì)胞的花粉，且這兩對基因位于非同源染色體上，由于一對隱性純合基因(rr或hh)的作用，在光照強(qiáng)度大于800勒克斯時，都不能生長。⑴實(shí)驗(yàn)開始時必須用

除去不利于原生質(zhì)體融合的物質(zhì)。⑵實(shí)驗(yàn)中除獲得雜種細(xì)胞外，還有基因型為

的融合細(xì)胞。纖維素酶和果膠酶rrHH、RRhh

⑶設(shè)計一方法（不考慮機(jī)械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜種細(xì)胞，方法：

⑷將雜種細(xì)胞培養(yǎng)成雜種植株依據(jù)的理論基礎(chǔ)是

。II．若該過程是制備治療“SARS”病毒的單克隆抗體，A為人B淋巴細(xì)胞（染色體組成為2A＋XX=46），B為鼠骨髓瘤細(xì)胞（染色體組成為2A＋XX=40）⑸用單克隆抗體制成“生物導(dǎo)彈”主要利用了抗體的

特性。⑹A細(xì)胞來自于

，雜種細(xì)胞C共有

個染色體組。⑺雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)時與植物組織培養(yǎng)的主要區(qū)別是培養(yǎng)基要用

培養(yǎng)基。（物理狀態(tài)），培養(yǎng)基中除了添加必要的營養(yǎng)物質(zhì)為還需加入

。置大于800勒克斯光照下培養(yǎng)，收集分化的細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞的全能性

抗體與抗原結(jié)合，發(fā)揮特異性免疫效應(yīng)

非典患者

4

液體動物血清

6.右圖是制備分泌抗X抗體的過程，根據(jù)圖解回答問題：⑴給小鼠注射抗原的目的是__________________。⑵在單克隆抗體制備過程中之所以選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞