分離富集新技術在藥物分析中的研究與應用

分離富集新技術在藥物分析中的研究與應用復雜體系中痕量組分的分離分析是藥物分析工作者面臨的巨大挑戰(zhàn)。為適應復雜體系分析，不僅需要對待測組分進行分離，還需要對痕量組分進行富集，以提高檢測靈敏度。傳統(tǒng)的樣品前處理技術通常以分離或提取待測組分為目標，且普遍存在耗時長，操作繁瑣，去除基質不完全，靈敏度低等諸多缺點，成為制約分析效率、靈敏度和準確度的關鍵問題，尋求簡便、快速，且不降低分析靈敏度或具有富集能力的樣品前處理技術成為藥物分析領域的研究熱點。本課題致力于分離富集新技術的研究與應用，聯合現代分析檢測技術，使樣品不經處理或經簡單處理即可進樣分析，實現待測組分的高靈敏度檢測，彌補傳統(tǒng)前處理方法的眾多缺點，為藥物分析提供簡便快速、靈敏準確的檢測手段。具體研究如下：(1)傳統(tǒng)離心超濾技術(Centrifugalultrafiltration，CF-UF)已普遍應用于血漿中藥物濃度的測定，血樣僅需一步離心，即可除去血漿中的大分子內源性物質，所得超濾液可直接進樣分析，簡便快速。然而，該法在生物大分子基質情況下的準確度系統(tǒng)評價未見報道。課題以二甲雙胍(Metformine，MET)為模型藥物，探索影響CF-UF法和中空纖維離心超濾法(Hollowfibercentrifugalultrafiltration，HFCF-UF)的超濾液體積的因素，比較2種超濾法測定血藥濃度的準確度，進而完善CF-UF技術的理論研究，為正確選擇和使用超濾技術提供理論依據。研究結果表明：HFCF-UF超濾液體積不受離心時間、血漿條件和凍融次數的影響，HF內腔容積可以很好的控制超濾液體積，其測定結果準確度更高。在血漿條件相近的前提下，CF-UF可通過嚴格控制離心時間來獲得適宜的超濾液體積，以保證分析結果的準確度。在藥代動力學和生物等效性研究中，血藥濃度的測定是研究的關鍵，血漿樣品數量多，前處理繁瑣，耗時長，樣品前處理的工作量占全部工作的80%以上，且血漿條件差異較大，有時會影響分析結果的重現性，因此，建立簡便快速的前處理方法（即可縮短前處理時間，又可滿足批處理的現代分析要求），保證分析準確度和重現性是分析工作者一直追求的目標。課題將HFCF-UF法成功應用于MET人體內藥代動力學與生物等效性試驗，獲得非常滿意的結果。該法簡單快速，重現性好，回收率接近100%，準確度高，為臨床血樣的快速、準確分析提供了一種新手段。(2)麻黃堿(Ephedrine，EPH)和N-甲基麻黃堿(N-methylephedrine，MEPH)等藥物具有較強的生理活性，其用藥史的回顧與表征是刑偵司法實踐中的重要物證資料。血樣、尿樣及毛發(fā)等往往是最常用的生物檢材，隨著藥物體內的代謝，待測組分的濃度迅速降低，因此，提高分析方法的靈敏度，對延長檢測周期、追溯特殊人群的用藥史具有重要意義。課題建立了固相萃取-超高效液相-質譜聯用(SPE-UPLC-MS/MS)的方法，尿樣中EPH和MEPH的檢測靈敏度達到0.01ng·mL-1，將生物檢材的檢測周期延長到7天，該法前處理簡單，靈敏度高，為生物樣品中痕量組分的檢測提供了一種新手段。苯丙胺類興奮劑(Amphetamine-typestimulant,ATs)，是法醫(yī)實驗室常常進行篩查和檢測的非法毒品。由于無法及時采集樣品，生物檢材中的ATs含量極低，且基質十分復雜，往往需要對待測組分進行分離和富集。然而，傳統(tǒng)的樣品前處理方法，如蛋白沉淀法(PPT)、液液萃取法(LLE)，不足以去除生物基質，待測組分的干擾較大，檢測靈敏度低，無法滿足復雜基質中痕量組分的檢測要求。課題將SPE-UPLC-MS/MS技術成功應用于全血中12種非法毒品的檢測，該法采用酸洗、醇洗和堿洗3步淋洗操作，可有效去除生物基質，基質效應小，測定結果準確，靈敏度高，可檢測到ppt級痕量組分，適用范圍廣，可同時檢測多種苯丙胺類毒品，為法醫(yī)毒物篩查分析提供了一種可靠、完善、靈敏的法庭物證鑒別手段。(3)頂空氣相色譜法(HS-GC)是將揮發(fā)性組分從樣品基質中有效分離后采用氣體進樣的分析技術。它在密閉空間進行，既可以避免揮發(fā)性組分的損失，又可以降低樣品基質引起的噪音，靈敏度高，分析速度快，操作簡便。然而，HS-GC技術常常需要面對頂空溶劑的選擇問題。傳統(tǒng)的頂空溶劑，例如水，沸點較低，其頂空溫度受限，不適宜于高沸點揮發(fā)性成分的頂空分析。而對于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)等傳統(tǒng)頂空溶劑，溶劑本身的揮發(fā)性形成的分壓會抑制待測物的頂空溢出，進而影響檢測靈敏度。離子液體(Ionicliquids，ILs)作為一種新型頂空溶劑應運而生，其本身具有獨特的理化性質，如溶解性強，幾乎不揮發(fā)，熱穩(wěn)定性好，可設計強等特點，拓展了HS-GC技術在藥物分析中的應用范圍。課題建立以ILs作為頂空溶劑的HS-GC法，用于十滴水中樟腦(Camphor,CPH)和桉油精(Eucalyptol,ECP)的含量測定。該法彌補了傳統(tǒng)頂空溶劑的不足，有效的將高沸點揮發(fā)性成分從復雜的中藥基質中分離出來，避免了不揮發(fā)或難揮發(fā)性基質組分對色譜系統(tǒng)的污染。ILs-HS-GC法為中藥制劑中高沸點揮發(fā)性成分分析提供了一