不同固定液對子宮內(nèi)膜標本制片影響的對比性分析

不同固定液對子宮內(nèi)膜標本制片影響的對比性分析

【摘要】目的對比性研究Bouin液和4%中性甲醛固定液對子宮內(nèi)膜標本固定性能。方法選用2種固定液對新鮮子宮內(nèi)膜標本固定2小時后，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋、制片并進行對比性觀察。結(jié)果對36例功血患者子宮內(nèi)膜切片比較性研究，經(jīng)Bouin液固定后所制切片較4%中性甲醛固定液所制切片多個方面觀察研究具有顯著的優(yōu)勢。結(jié)論經(jīng)Bouin液固定的子宮內(nèi)膜標本，具有優(yōu)良的制片質(zhì)量，對于需要盡快取得病理診斷報告的患者，選用Bouin液固定標本可以在較短時間內(nèi)得到高質(zhì)量病理切片?！娟P鍵詞】Bouin液4%中性甲醛固定液子宮內(nèi)膜職稱論文病理技術是病理學研究和診斷不可分割的一部分，各種各樣的病理技術能夠精細地顯示與表達病變區(qū)域的細胞組成、組織結(jié)構(gòu)以及基因序列的變異等多層次的信息。為病理學研究和診斷提供更加科學、準確和可靠的形態(tài)學依據(jù)，提高了診斷正確率，便于臨床對患者的及時準確的治療。在所有工作中，組織固定是病理標本制備的第一步，至關重要，是所有病理后續(xù)工作的基礎。在日常工作中，子宮內(nèi)膜標本的制片一直是病理工作中的一個難點，由此我們嘗試采用不同的固定方法，研究如何避免因組織不能充分固定，導致制片質(zhì)量差，診斷困難的現(xiàn)象。自2008年3月開始，我們分別用Bouin液和4%中性甲醛固定液對36例子宮功能性出血患者的子宮內(nèi)膜組織作了對比，效果滿意。1材料與方法1.1.材料子宮內(nèi)膜標本來源于2008年3月-2009年11月本院婦產(chǎn)科門診的功能性出血患者36例。年齡21~65歲，經(jīng)詢問病史及診查后，未發(fā)現(xiàn)有周身及生殖器官器質(zhì)性病變?；颊咧饕R床表現(xiàn)為月經(jīng)過多，經(jīng)期延長7天以上，月經(jīng)紊亂，不規(guī)則子宮出血，閉經(jīng)后子宮出血。1.2主要試劑4%中性甲醛固定液（飽和甲醛溶液10ml+pH7.4mol/L磷酸緩沖液90ml），Bouin固定液（苦味酸75ml+40%甲醛溶液25ml+冰醋酸5ml），乙醇，二甲苯，鹽酸及石蠟等。1.3方法將配好的Bouin液和4%中性甲醛固定液交給臨床醫(yī)師保存。同一患者刮取的內(nèi)膜組織，立即分別放入2種固定液中。固定2小時后，經(jīng)4%中性甲醛固定液的組織按常規(guī)石蠟包埋。經(jīng)Bouin液固定的組織用70%~80%乙醇洗滌，去除組織中苦味酸染色，然后按常規(guī)石蠟包埋。最后兩者制片效果及組織切片HE染色，顯微鏡下作一比較。1.4統(tǒng)計學分析:結(jié)果均以平均數(shù)±標準差（±s）表示，采用SPSS11.5統(tǒng)計學軟件分析，兩組間比較用t檢驗。2結(jié)果2.1肉眼觀察見子宮內(nèi)膜組織入Bouin液立即由紅色變白色，而入4%中性甲醛固定液中則是逐漸由紅變白。2.2石蠟切片過程用Bouin液固定過的組織蠟塊，組織質(zhì)地硬度適當，切片連續(xù)，完整，切片合格率99%（P<0.005）；用4%中性甲醛固定液過的組織蠟塊，組織質(zhì)地較軟，切片不連續(xù)，不完整，切片合格率70%（p<0.005）。2.3顯微鏡（物鏡*40）下觀察：用Bouin液固定過的組織的HE染色色彩亮麗，對比清晰，子宮內(nèi)膜腺體細胞與間質(zhì)細胞結(jié)構(gòu)清晰，組織結(jié)構(gòu)分明（圖1）；高倍鏡下細胞結(jié)構(gòu)也很清晰（圖2）。4%中性甲醛固定液固定過的組織色彩較暗，對比不夠清晰，子宮內(nèi)膜腺體細胞與間質(zhì)細胞結(jié)構(gòu)較模糊，組織結(jié)構(gòu)比較分明（圖3）；高倍鏡下細胞結(jié)構(gòu)不清晰（圖4）。3.討論組織的固定是形態(tài)學研究中不可缺少的重要步驟，其目的:（1）抑制細胞內(nèi)溶酶體酶的釋放和活性，防止自溶；抑制組織中細菌的繁殖，防止組織腐?。唬?）使細胞的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、各種成分凝固成不溶性物質(zhì)，以防止物質(zhì)擴散并維持原有的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)；（3）固定后的組織對染料有不同的親和力，染色后的組織其構(gòu)成比有較大的差別，因此對固定劑的要求不同。（4）有利于切片，固定劑有硬化作用，使組織硬度增加，是細胞的正常的半液體狀變?yōu)榘牍腆w狀，有固化作用，便于制片。本研究顯示有效而充分的固定是保存子宮內(nèi)膜組織結(jié)構(gòu)的關鍵，直接關系到病理診斷的準確性。4%中性甲醛固定液雖然是一種常用的良好固定液，滲透力強、組織收縮小，甲醛對組織穿透力強，對低分子的多肽、蛋白、糖、脂肪、高爾基體和線粒體等固定效果較好，細胞核的染色佳。然而甲醛易氧化為甲酸，降低固定效果，使溶液變酸，過酸會影響核的染色。此外固定時間過長，組織中可產(chǎn)生甲醛色素影響觀察，也可使某些抗原發(fā)生空間構(gòu)象改變而遮蔽抗原決定簇【1】，由于甲醛滲透速度較慢，一般的組織需固定4~12h，對厚度適當?shù)慕M織固定較為均勻，但對活檢一類的組織固定后再用乙醇脫水會使組織較硬，并且對染色質(zhì)的固定效果差。當新鮮的子宮內(nèi)膜組織入甲醛固定液中時，肉眼可見組織顏色是逐漸由紅變白，由此說明4%甲醛滲透速度慢。兩組標本用同一種蘇木精染色，但染色后色彩不夠亮麗，結(jié)構(gòu)雖然清晰，但不夠分明，而且在制片過程中有難度，導致切片質(zhì)量欠佳，對診斷帶來一定的困難。由于染色的過程兩組相同，從而避免染色因素的干擾，常規(guī)病理工作中4%中性甲醛固定大標本均未出現(xiàn)此現(xiàn)象，而且有學者指出甲醛對染料的阻斷作用是可逆的，主要是有關的蛋白發(fā)生交聯(lián)，形成蛋白分子的彌散屏障，從而阻斷了染料的擴散【2】。圖1：用Bouin液固定過的組織的HE染色色彩亮麗，對比清晰，子宮內(nèi)膜腺體細胞與間質(zhì)細胞結(jié)構(gòu)清晰，組織結(jié)構(gòu)分明。圖2：高倍鏡下細胞結(jié)構(gòu)也很清晰。圖3：4%中性甲醛固定液固定過的組織色彩較暗，對比不夠清晰，子宮內(nèi)膜腺體細胞與間質(zhì)細胞結(jié)構(gòu)較模糊，組織結(jié)構(gòu)比較分明。圖4：高倍鏡下細胞結(jié)構(gòu)不清晰。Bouin液是由甲醛、冰乙酸、苦味酸飽和液5：1：15組成，偏酸性，對所固定組織的抗原具有一定程度的損害，故其在免疫組織化學的應用中較4%中性甲醛有所限制，但在常規(guī)染色中它仍然是一種良好的固定液，具有穿透速度快、收縮小、固定均勻、固定過的組織有適當?shù)挠捕取⑷旧Ч?，其中冰乙酸的滲透力強，能較好地沉淀核蛋白，保存染色體，有助于細胞核著色；苦味酸能使組織適當硬化；適量的甲醛則可以調(diào)節(jié)前兩種試劑對組織的膨脹作用，可防止冰乙酸對染色質(zhì)及苦味酸對細胞質(zhì)強烈作用所產(chǎn)生的粗大沉淀【3】。因此用Bouin液固定只需要1~2h。由于其穿透速度快，子宮內(nèi)膜組織被迅速凝固，肉眼可見活檢組織入Bo