血球計數板的使用

關于血球計數板的使用①血球計數板的原理和構造②方法與步驟

第2頁,共40頁，2024年2月25日，星期天①血球計數板的原理和構造Ⅰ構造血球計數板是一種專門用于計算較大單細胞微生物的一種儀器，由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四條下凹的槽，構成三個平臺。第3頁,共40頁，2024年2月25日，星期天第4頁,共40頁，2024年2月25日，星期天中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面刻有一個方格網。方格網上刻有9個大方格，其中只有中間的一個大方格為計數室。這一大方格的長和寬各為1mm，深度為0.1mm，其容積為0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的計數板。第5頁,共40頁，2024年2月25日，星期天1mm×1mm×0.1mm=0.1mm320mm×20mm×0.25mm=100mm3第6頁,共40頁，2024年2月25日，星期天25×16型的計數板計數池中央的大格又被雙線劃分成25個中格，其中的每個中格又被單線劃分成16個小格，中央大方格由25×16=400個小方格組成。第7頁,共40頁，2024年2月25日，星期天在血球計數板上，刻有一些符號和數字(見圖一)，其含義是：XB-K-25為計數板的型號和規(guī)格，表示此計數板分25個中格；0.10mm為蓋上蓋玻片后計數室的高；1/400mm2表示計數室面積是1mm2，分400個小格，每小格面積是1/400mm2。第8頁,共40頁，2024年2月25日，星期天把中央大方格的中方格再分成小方格的分割線并不只局限于中央大方格內，而是一直延伸到正方形凹槽的邊緣，所以在其延長線上的4個大方格中分割線顯得密集。第9頁,共40頁，2024年2月25日，星期天第10頁,共40頁，2024年2月25日，星期天25×16型的計數板一般計數四個角和中央的五個中方格（5×16=80個小方格）的細胞數。第11頁,共40頁，2024年2月25日，星期天Ⅱ血球計數板的原理第12頁,共40頁，2024年2月25日，星期天計數一個樣品要從兩個計數室中計得的平均數值來計算，對每個樣品計數三次，再取其平均值。N1=(n1-1+n1-2)/2N2=(n2-1+n2-2)/2N=(N1+N2+N3)/3N3=(n3-1+n3-2)/2第13頁,共40頁，2024年2月25日，星期天N1=(n1-1+n1-2)/2計數一個樣品要從兩個計數室中計得的平均數值來計算。n1-1n1-2N1=(n1-1+n1-2)/2第14頁,共40頁，2024年2月25日，星期天N2=(n2-1+n2-2)/2計數一個樣品要從兩個計數室中計得的平均數值來計算。n2-1n2-2N2=(n2-1+n2-2)/2第15頁,共40頁，2024年2月25日，星期天N3=(n3-1+n3-2)/2計數一個樣品要從兩個計數室中計得的平均數值來計算。n3-1n3-2N3=(n3-1+n3-2)/2第16頁,共40頁，2024年2月25日，星期天將計數板及蓋玻片用流水沖洗，擦干，重復上述步驟，對每個樣品可計數三次，再取其平均值。N1=(n1-1+n1-2)/2N2=(n2-1+n2-2)/2N=(N1+N2+N3)/3N3=(n3-1+n3-2)/2第17頁,共40頁，2024年2月25日，星期天將同一樣品的計數結果，取平均值。代入下式，求算單胞藻的密度：N小格平均每小格內的細胞數=N/(5×16)設每毫升中有x個單胞藻

x個N小格×16×25個1cm3(1mm×1mm×0.1mm÷1000)cm3x個=N/(5×16)

×16×25個1cm3(1mm×1mm×0.1mm÷1000)cm3x=N/(5×16)

×16×25個×1cm3×

1000÷(1mm×1mm×0.1mm)=50000N第18頁,共40頁，2024年2月25日，星期天②用血球計數板對藻細胞進行計數的方法與步驟：ⅰ檢查計數室先用顯微鏡對計數板的計數室進行鏡檢是否干凈。若有污物，則需用清水清洗，吹干，用擦鏡紙擦拭干凈。蓋玻片使用前浸在75%的酒精溶液中，使用時用眼科鑷取出，放在濾紙上吸水，用擦鏡紙擦拭干凈。將蓋有蓋玻片的計數板放在顯微鏡的載物臺上，調焦，用低倍鏡找到計數區(qū)檢查是否干凈。第19頁,共40頁，2024年2月25日，星期天從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數之前，要將試管輕輕震蕩幾下，這樣使單胞藻分布均勻，防止單胞藻凝聚沉淀，提高計數的代表性和準確性，求得的培養(yǎng)液中的單胞藻數量誤差小。第20頁,共40頁，2024年2月25日，星期天注意，當藻液濃度高時，為了便于計數，可將藻液用消毒海水稀釋后進行計數。在計數有鞭毛或有運動性的藻類時，可先吸取定量的藻液，滴加魯哥氏碘液（1000毫升藻類用15毫升的魯哥氏液固定）進行固定，然后添加消毒海水稀釋后計數。第21頁,共40頁，2024年2月25日，星期天將計數板連同蓋玻片一起取下，用細口膠頭滴管吸取稀釋后的搖勻的單胞藻懸液，迅速將吸管尖靠在計數池上蓋玻片的邊緣，略擠膠頭滴管讓培養(yǎng)液利用液體的表面張力，自行滲入。第22頁,共40頁，2024年2月25日，星期天第23頁,共40頁，2024年2月25日，星期天第24頁,共40頁，2024年2月25日，星期天第25頁,共40頁，2024年2月25日，星期天第26頁,共40頁，2024年2月25日，星期天第27頁,共40頁，2024年2月25日，星期天樣品流入的量以充滿蓋玻片下面的空間為宜，蓋玻片下面不能有氣泡存在，否則會造成計數不準。多余的藻液會流入H形的凹溝中。第28頁,共40頁，2024年2月25日，星期天樣品添加到計數池后，靜置5min。使藻細胞沉降，否則，細胞呈懸浮狀態(tài)，不處于同一平面上，給計數造成不便。待單胞藻全部沉降到計數室底部后，將計數板放在載物臺的中央，先在低倍鏡下找到計數室所在位置后，再轉換高倍鏡觀察，仔細調焦，同時調節(jié)光柵，必要時調節(jié)光源和反光鏡角度，直至細胞和縱橫格線都清楚。計數并記錄。第29頁,共40頁，2024年2月25日，星期天如果規(guī)格為25格×16格的計數板統(tǒng)計計數池中央大方格內四角及中央中格內(即80個小方格)的單胞藻數，并記錄。計數時，小心移動載物臺，從上到下，由左及右又由右及左依次計數各小格內的細胞數。一般可采取“數上線不數下線，數左線不數右線”的原則處理。凡壓方格的上線和左線的細胞，統(tǒng)一算此方格內的細胞，而壓方格的下線和右線的細胞，統(tǒng)一不算此方格內的細胞。第30頁,共40頁，2024年2月25日，星期天第31頁,共40頁，2024年2月25日，星期天如果一個小方格內單胞藻過多，難以數清，應當對培養(yǎng)液進行稀釋以便于單胞藻的計數。具體方法是：搖勻試管，取1mL單胞藻培養(yǎng)液，加入成倍的無菌水（消毒海水）稀釋，稀釋n倍后，再用血球計數板計數，所得數值乘以稀釋倍數。以每小方格內含有4—5個單胞藻細胞為宜。特別是在培養(yǎng)后期的樣液需要稀釋后計數。第32頁,共40頁，2024年2月25日，星期天計數一個樣品要從兩個計數室中計得的平均數值來計算，將計數板及蓋玻片用流水沖洗，吹干，擦凈，重復上述步驟，對每個樣品計數三次，再取其平均值。第33頁,共40頁，2024年2月25日，星期天N1=(n1-1+n1-2)/2計數一個樣品要從兩個計數室中計得的平均數值來計算。n1-1n1-2N1=(n1-1+n1-2)/2第34頁,共40頁，2024年2月25日，星期天N2=(n2-1+n2-2)/2計數一個樣品要從兩個計數室中計得的平均數值來計算。n2-1n2-2N2=(n2-1+n2-2)/2第35頁,共40頁，2024年2月25日，星期天N3=(n3-1+n3-2)/2計數一個樣品要從兩個計數室中計得的平均數值來計算。n3-1n3-2N3=(n3-1+n3-2)/2第36頁,共40頁，2024年2月25日，星期天將計數板及蓋玻片用流水沖洗，擦干，重復上述步驟，對每個樣品可計數三次，再取其平均值。N1=(n1-1+n1-2)/2N2=(n2-1+n2-2)/2N=(N1+N2+N3)/3N3=(n3-1+n3-2)/2第37頁,共40頁，2024年2月25日，星期天將同一樣品的計數結果，取平均值。代入下式，求算單胞藻的密度：N小格平均每小格內的細胞數=N/(5×16)設每毫升中有x個單胞藻

x個N小格×16×25個1cm3(1mm×1mm×0.1mm÷1000)cm3x個=N/(5×16)

×16×25個1cm3(1mm×1mm×0.1mm÷1000)cm3x=N/(5×16)

×16×25個×1cm3×

1000÷(1mm×1mm×0.1mm)=50000N第38頁,共40頁，2