《細胞分子模型》課件

細胞分子模型1精選課件ppt細胞分子模型1精選課件ppt第1節(jié)概述細胞分子模型與動物模型的區(qū)別：動物模型

優(yōu)點：傳統(tǒng)的篩選方法直接反映治療效果、不良反應、毒性作用預測臨床價值、應用前景不足：篩選效率低，并非均有疾病模型，動物個體差異，成本高2精選課件ppt第1節(jié)概述細胞分子模型與動物模型的區(qū)別：2精選課件ppt細胞、分子水平藥物篩選模型優(yōu)點：耗材少藥物作用機制明確篩選規(guī)模大，高通量篩選已成為藥物篩選的主要方法快速、微量、大規(guī)模為特征的高通量篩選背景：藥物的作用機制要從細胞水平去探索潛在的藥物作用靶點數(shù)目和有待篩選的化合物數(shù)目增多特點：篩選規(guī)模和篩選速度更大篩選模型的檢測技術能夠更快速、全面反映被篩樣品的生物活性特征3精選課件ppt細胞、分子水平藥物篩選模型背景：3精選課件ppt分子水平的藥物篩選模型：受體、酶、通道、基因、其他標準的體外分子水平篩選優(yōu)點：快速微量篩選結果準確、穩(wěn)定，易于評價不足：只能對特定靶點的單指標檢測提供化合物對靶點作用的有限信息，無法對化合物的生物活性進行綜合評價單純的分子水平的高通量藥物篩選技術已不能滿足新藥發(fā)現(xiàn)的需要4精選課件ppt分子水平的藥物篩選模型：4精選課件ppt受體篩選模型受體與放射性配體結合模型：將受體、配體、被測物及必要的輔助因子一起加入到緩沖溶液中溫孵達到平衡后過濾,濾紙上殘留的即為結合的放射性配體,通過液體閃爍計數(shù)來測量靈敏度高、特異性強適合大規(guī)模篩選5精選課件ppt受體篩選模型5精選課件ppt酶篩選模型:篩選作用于酶的藥物主要觀察藥物對酶活性的影響酶的反應底物和產(chǎn)物皆可作為檢測指標,由此確定反應速度6精選課件ppt6精選課件ppt第２節(jié)細胞水平藥物篩選模型細胞水平藥物篩選模型：以細胞功能為基礎的篩選模型(1)完整細胞，活細胞自然條件下研究藥物對生命體功能的影響，接近體內(nèi)的生化過程，比較準確地了解藥物的生物學特性，提供生物相關信息，一次試驗可獲得多個參數(shù)的高內(nèi)涵信息7精選課件ppt第２節(jié)細胞水平藥物篩選模型細胞水平藥物篩選模型：以細胞功能(2)著眼于細胞整體的某些功能和信號轉導途徑中的其他位點在對每一個分子通路并不完全了解的情況下,細胞水平篩選是唯一可用的方法(3)鑒定分子水平發(fā)現(xiàn)的化合物(4)觀察被篩選樣品對細胞的作用,不反映藥物作用的具體途徑和靶標,只反映藥物對細胞生長過程的綜合作用8精選課件ppt(2)著眼于細胞整體的某些功能和信號轉導途徑中的其他位點8(5)細胞模型的材料來源較容易用于藥物篩選的細胞：正常細胞、轉基因和病理細胞等多數(shù)生物性物質均可通過轉基因的方法由細胞表達(6)分子生物學和細胞生物學手段特別是基因芯片技術發(fā)現(xiàn)疾病有關基因,克隆建立穩(wěn)定細胞株大規(guī)模藥物篩選9精選課件ppt(5)細胞模型的材料來源較容易9精選課件ppt目前：(1)微量化，超高通量化1536孔板，熒光方法可達3456－9600孔微量化技術是實行超高通量篩選(uHTS)的基礎載體微孔板硬度、自動化加樣精度檢測系統(tǒng)數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)(2)均質檢測：一步加入10精選課件ppt目前：10精選課件ppt(3)多指標、多靶點、多通道檢測是現(xiàn)今細胞水平高通量篩選技術的核心和關鍵光顯微熒光成像技術是進行多指標檢測的基礎多指標、多靶點檢測有助于發(fā)現(xiàn)藥物作用的新途徑，深入認識藥物作用的機制為篩選具有互補的多靶點作用機制的單一治療藥物提供了手段和工具(4)實時動態(tài)檢測和可視化對活細胞進行熒光標記，熒光成像技術，分子水平的實時動態(tài)檢測和可視化研究自動圖像分析和數(shù)據(jù)量化分析11精選課件ppt(3)多指標、多靶點、多通道檢測是現(xiàn)今細胞水平高通量篩選技第３節(jié)常用技術1細胞水平重組技術重組技術是細胞水平高通量常用技術手段經(jīng)典方法是通過重組基因在宿主細胞基因組的隨機整合而產(chǎn)生穩(wěn)定細胞株不足：重組基因的定位不可預測，表達水平受重組位點的影響，基因拷貝數(shù)不確定，陽性克隆的產(chǎn)生率低，篩選時間長等現(xiàn)用游離體載體(episomalvector)：轉染效率高，陽性克隆篩選速度快12精選課件ppt第３節(jié)常用技術1細胞水平重組技術12精選課件ppt2報告基因技術將靶基因連接到細胞上，通過激活或抑制靶基因導致報告基因的表達，通過比色、熒光或發(fā)光的方法檢測簡便，如熒光素酶(luciferase)和β-半乳糖苷酶報告基因系統(tǒng)，不需裂解分離可直接均質檢測用于活體細胞的報告基因多是綠色熒光蛋白(GFP)，適于活體細胞檢測，被稱為生物傳感蛋白13精選課件ppt2報告基因技術13精選課件ppt優(yōu)點：GFP自發(fā)熒光，且熒光穩(wěn)定；不需其他的底物和輔因子；GFP與其他蛋白嵌合后不影響其自身熒光特性GFP及其變體：用于實時動態(tài)研究體內(nèi)或細胞水平的蛋白定位和轉位，蛋白的降解，蛋白-蛋白的相互作用，細胞骨架動力學，細胞周期，檢測目的基因表達變化β-內(nèi)酰胺酶，水解熒光能量共振轉移(FRET)底物CCF4/AM行定量檢測，或作為核因子調(diào)節(jié)的指示蛋白，用于受體功能篩選14精選課件ppt優(yōu)點：14精選課件ppt3熒光檢測分析技術定量讀取熒光密度；單次實驗中同時獲得其他熒光特性，如熒光壽命、極化、淬滅，提高篩選的有效性，可快速、多參數(shù)地評價樣品和靶之間的相互作用(1)極化熒光(fluorescencepolarization,FP)分析生物體系中分子間相互作用，根據(jù)熒光標記的小分子在游離和與大分子結合靶標2種狀態(tài)時的極化熒光值不同而區(qū)分優(yōu)點：不用分離熒光標記物，反應在均相溶液中進行檢測時間不會影響結果高靈敏性、高穩(wěn)定性、可重復性操作簡便，假陰性或假陽性率低用于細胞水平的膜受體如GPCR、核受體調(diào)節(jié)劑的HTS篩選，如促腎上腺皮質激素2α亞型受體(CRF2αR)的功能分析中cAMP的直接檢測15精選課件ppt3熒光檢測分析技術15精選課件ppt(2)熒光共振能量轉移(fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET)指非放射性能量在適當能量給予體和接受體之間轉移當供體激發(fā)態(tài)能量滿足光學和空間上的要求時，其能量能有效轉移給受體，導致受體發(fā)射熒光供體和受體空間距離的變化能顯著影響能量的有效轉移效率熒光底物設計和人工合成：細胞篩選用的β-內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)報告基因檢測系統(tǒng)采用的熒光底物就是基于FRET的原理，合成底物CCF4，為１分子頭孢菌素聯(lián)上１分子7-羥基香豆素和１分子熒光素(fluorescein)。當體系無配基激活時，底物完整，激發(fā)香豆素發(fā)射530nm綠光；如加入所研究受體的特異性配基，報告基因系統(tǒng)激活，表達β-lactamase，裂解底物，破壞了FRET，激發(fā)香豆素發(fā)射460nm藍光。用于GPCR受體-催產(chǎn)素受體(hO-TR)的篩選采用FRET原理設計淬滅型底物進行激酶的篩選16精選課件ppt(2)熒光共振能量轉移(fluorescencereso(3)時間分辨熒光能量傳遞分析法(timeresolved-fluorescenceresonanceenergytransfer,TREForTR-FRET)

雙標記方法原理是在長壽熒光鑭系復合物和共振能量受體之間的長范圍能量傳遞液態(tài)條件下進行，不需固定相支持和分離步驟，不需對試劑進行特殊處理優(yōu)點：減少背景，使長期存在的供體和受體信號隨時間顯示很高的敏感性用于蛋白與蛋白結合分析、受體配體結合分析等用長壽熒光金屬銪作供體成分，用另一個熒光分子XL665(一個改型別藻藍蛋白的片斷)作為受體進行了β-分泌酶抑制劑的細胞水平篩選17精選課件ppt(3)時間分辨熒光能量傳遞分析法(timeresolve4熒光影像(fluorescenceimaging)技術(1)高內(nèi)涵篩選(highcontentscreening,HCS)

指在保持細胞結構和功能完整性的前提下，同時檢測被篩樣品對活細胞形態(tài)、生長、分化、遷移、凋亡、代謝途徑及信號轉導各個環(huán)節(jié)的影響，單一實驗中獲取大量相關信息，確定樣品生物活性和潛在毒性應用高分辨率的熒光數(shù)碼影像系統(tǒng)，在細胞水平上檢測多個指標的多元化、功能性篩選技術獲得被篩樣品對固定化或動態(tài)細胞產(chǎn)生的多維立體和實時快速的生物效應信息18精選課件ppt4熒光影像(fluorescenceimaging)技檢測范圍：靶點激活、細胞分裂及凋亡、蛋白轉位、細胞活力、細胞遷移、受體內(nèi)化、細胞毒性、細胞周期和信號轉導；監(jiān)測細胞器、活性物質釋放(一氧化氮、活性氧、胞內(nèi)鈣離子)等用于藥靶的證實和藥物初篩,尤宜于諸如GPCR功能性研究，藥物多靶點研究，癌癥的綜合研究，多指標形態(tài)學觀察，激酶級聯(lián)反應，信號轉導途徑的研究等如用HCS對細胞水平的17種蛋白同時進行了檢測19精選課件ppt檢測范圍：靶點激活、細胞分裂及凋亡、蛋白轉位、細胞活力、細胞CellCardTM系統(tǒng)：新的多通道(multiplexed)HCS篩選技術，由VitraBioscience公司開發(fā)可在96孔板單孔中實現(xiàn)對多個細胞系或多靶點的同時檢測，是一種基于多通道的全自動影像系統(tǒng)可在單一檢測中應用多參數(shù)檢測，可定量單一細胞類型中多個細胞內(nèi)事件或對多個細胞類型實行同一檢測，在獲得樣品活性的同時得到樣品對不同細胞株上設計的不同靶點的選擇性信息關鍵點為CellCardCarrier微載體技術，允許多種細胞株在96孔板的同一孔中進行生長并檢測優(yōu)點：增大檢測容量，提高檢測數(shù)據(jù)質量，節(jié)省時間，降低成本對細胞培養(yǎng)的要求很高，培養(yǎng)環(huán)境必須適合所有被檢細胞株生長20精選課件pptCellCardTM系統(tǒng)：新的多通道(multiplexe(2)共聚焦顯微成像技術(fluorescenceconfocalmicroscopeimaging)

采用共聚焦激光微掃描，并結合數(shù)字化影像和光穩(wěn)熒光染料，特別適合于微量、快速的細胞水平生物分子的多熒光標記檢測，活細胞和亞細胞影像分析和多維成像共聚焦顯微光學系統(tǒng)如EVOscreen系統(tǒng),均質檢測,檢測體積小而不損失信號質量利用共聚焦的熒光技術有熒光共振能量轉移(FRET),熒光壽命顯微成像(fluorescencelifetimeimagingmicroscopy,FLIM)，光漂白后熒光復現(xiàn)FRAP(fluorescentrecoveryafterphotobleaching),光漂白熒光損失FLIP(fluorescencelossinphotobleaching),FCS(fluorescencecorrelationspectroscopy)等21精選課件ppt(2)共聚焦顯微成像技術(fluorescencecon(3)熒光相關光譜(fluorescencecorrelationspectroscopy，F(xiàn)CS)

超高通量篩選檢測技術，通過共焦鏡提供高聚激發(fā)光，消除背景可實現(xiàn)單分子檢測共聚焦光學系統(tǒng)可實現(xiàn)輸出信號的微量化分析可評價單個分子的熒光信號，提供熒光粒子的擴散特征信息可進行多參數(shù)、多維熒光檢測監(jiān)測分子結合時的相互作用如進行受體結合分析和其他分子事件采用FCS用于活細胞篩選GPCR調(diào)節(jié)劑，在3456孔板，最小測活體積小于2μL22精選課件ppt(3)熒光相關光譜(fluorescencecorrel(4)

FLIPR(fluorescentimagingplatereader)

FlIPR96和FLIPR384是由MolecularDevices公司開發(fā)的針對活細胞熒光檢測鈣流的技術檢測熒光信號快速、準確，可達到亞秒級水平，允許短暫信號的檢測，尤其適用于鈣指示劑檢測胞內(nèi)鈣均質、動態(tài)、細胞水平的熒光檢測方法用于胞內(nèi)鈣離子、鈉離子、膜電位和pH的檢測但因由水冷的氬激光提供激發(fā)能量，用冷的CCD成像系統(tǒng)檢測，受到光源限制，染料多為Fluo-3/AM和calciumgreen23精選課件ppt(4)FLIPR(fluorescentimagin(5)FMATTM(fluometricmicrovolumeassaytechnology)

由PEBiosystem開發(fā)基于熒光發(fā)光團Cy5，以紅色的633nm氦/氖激光為光源的多孔板掃描技術可有效扣除背景，靈敏度較高、均質的活細胞檢測用于細胞因子調(diào)控表達、GPCR、核受體、蛋白-蛋白相互作用、蛋白-核酸相互作用的功能性測定如用FMAT技術改良的ELISA一步法的FLISA技術24精選課件ppt(5)FMATTM(fluometricmicrovTransflour技術Transflour技術，適用于各種GPCR(Gi,Gs,Gq,G12/13)受體功能研究，原理為不同的GPCR受體與配體相互作用時激活特定的G蛋白Gα亞單元，導致相關的下游信號的級聯(lián)激活胞漿銜接子(adaptor)蛋白Arrestin，在幾乎所有的GPCR受體脫敏過程中發(fā)揮作，從胞漿轉位至胞膜與受體結合形成復合體，隨后GPCR受體和其特定G蛋白解偶聯(lián)導致受體脫敏；Arrestins蛋白還介導受體的胞漿內(nèi)化并與之結合，內(nèi)化受體或形成顆粒狀蛋白散布于胞漿中,重新循環(huán)發(fā)揮功能或在溶酶體中降解利用Arrestin蛋白的轉位、結合和內(nèi)化，將報告基因和Arrestin蛋白表達成融合蛋白，作為GPCR受體功能研究的指示蛋白，用于細胞水平的高通量篩選25精選課件pptTransflour技術Transflour技術，適用于優(yōu)點：動態(tài)直觀、可量化、易操作避免了以往GPCR受體研究中因不同的受體亞型激活特定的信號通路而需要設計不同的篩選方法特別適用于無配基的孤兒核受體的功能研究利用報告基因GFP和Arrestins蛋白表達成融合蛋白的穩(wěn)轉U2OS細胞系進行加壓素受體V2R的高內(nèi)涵篩選研究利用報告基因β-半乳糖苷酶的兩個互補片段分別結合GPCR受體和Arrestins蛋白用于細胞水平的β2腎上腺素受體和CXCR2趨化因子受體篩選26精選課件ppt優(yōu)點：26精選課件ppt重組受體藥物篩選系統(tǒng)—重組受體應用基因工程技術改進藥物篩選方法和建立新的藥物篩選模型受體技術是近年發(fā)展起來的一種體外實驗模型，世界上幾乎所有的大的制藥公司和實驗室都已將受體技術作為一種常規(guī)的藥物篩選手段重組受體又稱克隆受體或高級受體，是把受體或受體亞型的基因從人體組織中克隆出來，再在微生物或哺乳動物細胞內(nèi)表達，是對受體技術的完善。優(yōu)點：高敏感性、高專一性、快速經(jīng)濟且受體為人的而不是動物的，結果與人體實驗結果直接相關，可大量制備，被越來越多地應用于藥物的篩選27精選課件ppt重組受體藥物篩選系統(tǒng)—重組受體27精選課件ppt28精選課件ppt28精選課件pptSynaptic制藥公司研究了能調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)功能的腎上腺素受體亞型、含5-HT的受體亞型及人類轉移因子受體亞型，并已克隆了許多受體，用于篩選治療精神失常及神經(jīng)功能失調(diào)疾病?？寺∪梭w多巴胺D4受體亞型用于篩選抗精神失常藥，克隆人體5-HT4B亞型用于篩選抗動脈粥樣硬化藥物；克隆的重組腎上腺素受體a2cI亞型、膽囊收縮素-B/促胃酸激素受體、血管緊張素Ⅱ的受體也已用于藥物篩選功能篩選和異源表達的問題：功能檢測最簡單方法是在哺乳動物細胞系表達受體基因，這一細胞系需合適的G蛋白，而發(fā)現(xiàn)G蛋白要克隆G蛋白基因或轉染一系列細胞，還需合適的功能篩選指標29精選課件pptSynaptic制藥公司研究了能調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)功能的腎上腺素受高通量篩選技術Highthroughputscreening,HTS，新藥發(fā)現(xiàn)新技術依賴于含有大量化合物的樣品庫,利用計算機控制的自動化操作系統(tǒng)和微量靈敏的生物反應及檢測系統(tǒng),采用體外的實驗方法(分子和細胞水平藥物篩選模型)評價化合物的生物活性優(yōu)勢：明確化合物生物活性的分子機制，速度快，規(guī)模大(每日可篩選數(shù)萬至數(shù)十萬樣品)，消耗樣品量小(微克級)，一藥多篩30精選課件ppt高通量篩選技術Highthroughputscreeni高新技術為高通量藥物篩選提供了有效的手段和方法蛋白質組學為高通量篩選提供了大量的新的藥物靶點分子和細胞生物學闡明了藥物的作用機制生物芯片技術為高通量篩選提供了更多的信息組合化學合成與組合生物合成技術為高通量藥物篩選提供了大量化合物,擴大了藥物發(fā)現(xiàn)的范圍31精選課件ppt高新技術為高通量藥物篩選提供了有效的手段和方法31精選課件p第４節(jié)細胞模型舉例1Caco2單層細胞模型Caco2細胞是一種人類結腸腺癌細胞,由Fogh等在1977年分離特征:在培養(yǎng)過程中，一旦細胞達到單層厚度便自發(fā)地進行分化，并在20d內(nèi)完成這種分化分化了的Caco2單層細胞在其腸腔側形成一個界定明確的刷狀邊緣且具有緊密的細胞連接,形態(tài)學上類似小腸吸收細胞且表達了典型的小腸微絨毛水解酶和營養(yǎng)物質轉運體Caco2單層細胞具有完整性：顯微鏡觀察、堿性磷酸酶活性和跨膜電阻(transepithelialelectricresistance,TEER)、標志物被動擴散跨膜通量測定等32精選課件ppt第４節(jié)細胞模型舉例1Caco2單層細胞模型32精選課Caco2細胞模型與原位灌流等較為復雜的模型劃分的藥物轉運程度是一致的Caco2細胞模型是用來預測藥物體內(nèi)被動轉運吸收的良好模型，被動擴散藥物在Caco2細胞上的轉運吸收與體內(nèi)吸收差異較小對于吸收慢且不完全的藥物,體內(nèi)吸收速率約為Caco2體外模型吸收速率的30～80倍優(yōu)點：同時測定藥物攝取和跨膜轉運Caco2細胞內(nèi)具有藥物代謝酶，可在代謝狀況下測定藥物的跨膜轉運細胞來源于人結腸腺癌細胞，同源性好，生命力強可區(qū)分腸腔內(nèi)不同吸收途徑的差別操作簡單，藥物消耗量少，開發(fā)前期的藥物篩選33精選課件pptCaco2細胞模型與原位灌流等較為復雜的模型劃分的藥物轉運缺點：缺少腸壁的粘液層；缺少細胞異質性；缺少部分代謝酶；Caco2細胞層是平面結構，而小腸褶皺及微絨毛結構使得體內(nèi)吸收面積劇增別用途：藥物的吸收轉運機制研究藥物制劑處方組成透膜性和粘膜毒性的評價藥物吸收過程中相互作用的預測藥物的化學結構和體內(nèi)轉運間關系的研究揭示物腸吸收限速因素藥物代謝穩(wěn)定性的估計腸腔pH值對藥物吸收影響的評價34精選課件ppt缺點：缺少腸壁的粘液層；缺少細胞異質性；缺少部分代謝酶；Ca2肝臟體外毒理學模型(1)原代肝細胞模型：最常用，含有分離后的肝實質細胞，用來研究藥物或毒素對細胞的作用，是一個比較可靠的研究體外毒理學的模型優(yōu)點：材料來源廣，任何動物、人類，整個肝臟或活組織；能冰凍保存，減少了實驗動物的使用量；可檢測多種化合物多個濃度的細胞毒性,為體外高通量篩選模型的建立奠定了基礎缺點：不能測量膽汁的成分，缺少器官特異性的細胞間相互作用，沒有完整的解剖學上的結構35精選課件ppt2肝臟體外毒理學模型35精選課件ppt(2)離體肝臟模型：灌流后分離的離體肝臟更接近在體情況優(yōu)點：保留了肝臟完整的三維結構,細胞間可以相互作用,也可以實時收集膽汁，如用血液作為灌流液還可測量血液動力學參數(shù)，很多藥物或者化合物引起的肝臟毒性研究中都采用了這一模型缺點：培養(yǎng)時間不長(2-3h)；功能不可能完整保留；費用昂貴(3)肝臟切片模型：優(yōu)點：有細胞間的相互作用,不過于復雜,功能和體內(nèi)肝臟比較接近不足：無法收集膽汁,不同切片之間細胞的一致性也不高根據(jù)不同化合物的代謝特點選擇最佳厚度的切片(150～300μm,

200～250μm)新的組織切片技術可解決存在的氧分布和營養(yǎng)分布不均勻等36精選課件ppt(2)離體肝臟模型：灌流后分離的離體肝臟更接近在體情況36(4)肝細胞系模型:從人類肝臟制備細胞系可能是一種最好的選擇從肝腫瘤或者轉染了病毒或其他細胞DNA的肝細胞中可以獲取肝細胞系具有相對的無限生長能力和較高的存活率沒有可以表達完整肝臟代謝酶系的肝細胞系；維持肝細胞的正常功能卻非常困難(5)亞細胞模型即組織勻漿、微粒體、純化的細胞器如線粒體、細胞核等，上述亞細胞成分都可以應用于藥物或化合物引起的肝臟毒性的研究微粒體內(nèi)的代謝和二相代謝酶反應不相關，這些亞細胞體外模型也只是在短期內(nèi)有效37精選課件ppt(4)肝細胞系模型:37精選課件ppt(6)基因工程細胞模型在酵母、細菌、昆蟲細胞和非肝臟細胞中轉染編碼人類肝臟CYPs的cDNA,使代謝酶具有正常穩(wěn)定的表達利用這種模型研究藥物代謝過程中CYPs的作用以及藥物對CYPs的抑制或誘導作用及藥物與其結合情況已成功得到轉染了二相酶系cDNA的基因工程細胞，存活率較高,可同時表達一個或者多個人類CYPs僅適用于某些特殊研究，代謝酶表達水平和體內(nèi)相比也有較大差異38精選課件ppt(6)基因工程細胞模型38精選課件ppt3

藥物誘導的胰島素抵抗模型以適宜的高濃度胰島素誘發(fā)的HepG2胰島素抵抗細胞模型在48h內(nèi)較穩(wěn)定以地塞米松作用3T32L1脂肪細胞后,96h達胰島素抵抗的最高狀態(tài)，胰島素抵抗細胞模型在撤掉地塞米松后24h內(nèi)穩(wěn)定39精選課件ppt3藥物誘導的胰島素抵抗模型39精選課件ppt4

表達乙肝病毒YVDD變異株肝癌細胞模型HBV基因組為雙鏈閉環(huán)狀態(tài),不同編碼基因相互重疊,啟動子和增強子等調(diào)控序列又位于編碼基因之內(nèi),開放讀碼框分布于全長DNAHe