實驗室儀器設(shè)備器皿及用具

實驗室儀器設(shè)備器皿及用具實驗室儀器設(shè)備器皿及用具實驗室儀器設(shè)備器皿及用具組織培養(yǎng)實驗室布局的總體要求便于隔離便于操作便于滅菌便于觀察一、實驗室設(shè)置基本布局規(guī)律根據(jù)實驗操作程序排列實驗室；接種室和培養(yǎng)室設(shè)在與外界環(huán)境隔離性好的區(qū)域；滅菌室與接種室相鄰；其他實驗室的布局可根據(jù)條件，以方便使用為宜。2通過閱讀報刊，我們能增長見識，擴大自己的知識面。實驗室儀器設(shè)備器皿及用具實驗室儀器設(shè)備器皿及用具實驗室儀器設(shè)1

組織培養(yǎng)實驗室布局的總體要求

便于隔離便于操作便于滅菌便于觀察一、實驗室設(shè)置基本布局規(guī)律根據(jù)實驗操作程序排列實驗室；接種室和培養(yǎng)室設(shè)在與外界環(huán)境隔離性好的區(qū)域；滅菌室與接種室相鄰；其他實驗室的布局可根據(jù)條件，以方便使用為宜。2組織培養(yǎng)實驗室布局的總體要求一、實驗室設(shè)置基本布局基本實驗室輔助實驗室實驗室組成準備室緩沖室無菌操作室培養(yǎng)室細胞生物學(xué)實驗室溫室生化分析實驗室3基本實驗室輔助實驗室實驗室組成準備室細胞生物學(xué)實驗室3基本實驗室布局平面圖實驗臺擱架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架藥品與儀器柜無菌臺無菌臺擱架拉窗冰箱擱架水槽電爐門4.5m3.0m3.5m4.0m準備室緩沖室無菌室培養(yǎng)室4基本實驗室布局平面圖實驗臺擱架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架藥品與植物組織培養(yǎng)實驗室布局示意圖培養(yǎng)室準備室滅菌室儲藏室接種室緩沖室5植物組織培養(yǎng)實驗室布局示意圖培組織培養(yǎng)準備實驗室6組織培養(yǎng)準備實驗室61.準備室1.1洗滌間根據(jù)工作量的大小決定其大小，一般面積控制在30-50m2。在實驗室的一側(cè)設(shè)置專用的洗滌水槽，用來清洗玻璃器皿。中央實驗臺還應(yīng)配置2個水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以購置一臺洗瓶機。準備1-2個洗液缸，專門用于洗滌對潔凈度要求很高的玻璃器皿。此外還應(yīng)配置落水架、干燥箱、柜子、超聲波清洗器等。地面應(yīng)耐濕并排水良好。71.準備室1.1洗滌間7超聲波清洗器8超聲波清洗器8

面積60平方米左右，配備的主要儀器設(shè)備有：冰箱、天平、微波爐、pH計、培養(yǎng)基分裝器、藥品柜、器械柜、抽氣泵、電爐、各種規(guī)格的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶、儲藏瓶等。冰箱以體積180-200L為宜，用于儲存培養(yǎng)基母液、激素維生素等貴重藥品、彩色膠卷、與保存植物材料。天平應(yīng)有不同感量。

1.2培養(yǎng)基配制間1.準備室9

面積60平方米左右，配備的主要儀器設(shè)備有：1010

配備實驗臺、高壓滅菌鍋、排風(fēng)滅火設(shè)備、細菌過濾設(shè)備、干熱消毒柜、電爐等。滅菌鍋的選擇應(yīng)根據(jù)不同的要求選擇不同型號的滅菌鍋。一般實驗室可選用小型的醫(yī)用手提式高壓滅菌鍋，較大的實驗室可選用立式自動控制壓力和溫度的滅菌鍋。生產(chǎn)性的實驗室可選用大型的臥式滅菌鍋。

如果沒有條件的話，可以將上述工作間合并成一個準備間，要求是設(shè)備的安裝和排列要合理、房間要寬敞、明亮、透風(fēng)，地面要便于清潔、防滑。

1.3消毒間1.準備室11配備實驗臺、高壓滅菌鍋、排風(fēng)滅火設(shè)備、細菌過濾設(shè)2.緩沖室122.緩沖室12無菌操作室主要用于實驗材料的接種操作，所以又叫接種室。通常由里外兩間組成，外間是緩沖間，用于準備工作，還有防止污染的作用。緩沖間的門應(yīng)該與接種室的門錯開，兩個門也不要同時開啟，以保證無菌室不因開門和人的進出帶進雜菌。緩沖間內(nèi)應(yīng)該設(shè)有水槽、實驗臺、鞋帽架、和柜子、紫外燈。無菌操作室的內(nèi)壁應(yīng)當(dāng)用塑鋼板或瓷磚裝修，工作人員進入操作間前要穿上消過毒的工作服和拖鞋。

室內(nèi)應(yīng)配有超凈工作臺，紫外燈、解剖鏡、各種接種器械等。3.無菌操作室13無菌操作室主要用于實驗材料的接種操作，所以又無菌室14無菌室14無菌室15無菌室15

為了控制培養(yǎng)室的溫度和光照時間與其強度，培養(yǎng)室的房間不要窗戶，但應(yīng)當(dāng)留一個通氣窗，并安上排氣扇。室內(nèi)溫度由空調(diào)控制，光照由日光燈控制。天花板和內(nèi)墻最好用塑料鋼板裝修，地面用水磨石或瓷磚鋪設(shè)，一般要分兩間，一為光照培養(yǎng)室，一為暗培養(yǎng)。

培養(yǎng)室外應(yīng)有一預(yù)備間或走廊。

培養(yǎng)室應(yīng)配有培養(yǎng)架、轉(zhuǎn)床、搖床、光照培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、自動控時器等。日光燈一般用40W，固定在培養(yǎng)架的側(cè)面或擱板的下面，每層有兩支日光燈，距離在20cm，光照強度為2000-3000lx。

4.培養(yǎng)室16為了控制培養(yǎng)室的溫度和光照時間與其強度，培養(yǎng)室的設(shè)計組培實驗室時的注意事項為了減少污染，實驗室最好設(shè)一走廊且走廊上方最好安裝紫外燈；培養(yǎng)室最好設(shè)在南面，設(shè)大玻璃窗，以雙層玻璃窗為最好。如果培養(yǎng)室是設(shè)在房屋的邊側(cè)，其東邊或西邊的墻上也可設(shè)置大玻璃窗；培養(yǎng)室房間與門要小，而且密閉性要好，最好裝移門；無菌操作室要小，要設(shè)緩沖間，也最好裝移門，且門要稍大一些。17設(shè)計組培實驗室時的注意事項17二、儀器與設(shè)備1、基本設(shè)備

冰箱、電爐、酸度計、純水器、天平、培養(yǎng)基分裝器、攪拌器等。18二、儀器與設(shè)備1、基本設(shè)備18酸度計電熱套19酸度計電熱套19天平20天平20培養(yǎng)基分裝器攪拌器21培養(yǎng)基分裝器攪拌器212、滅菌設(shè)備蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過濾滅菌裝置、噴霧消毒器、紫外燈。222、滅菌設(shè)備22蒸汽壓力滅菌鍋23蒸汽壓力滅菌鍋23干熱消毒柜

利用高溫干熱對微生物有氧化、蛋白質(zhì)變性、電介質(zhì)濃縮引起中毒等作用。其中主要是通過氧化作用破壞細胞原生質(zhì)，使微生物死亡，所以在一定的加熱時間內(nèi)可殺死一切微生物。24干熱消毒柜利用高溫干熱對微生物有氧化、蛋白質(zhì)變無菌瓶頂過濾裝置噴霧消毒器（參考圖）（參考圖）25無菌瓶頂過濾裝置噴霧消毒器（參考圖）（參考圖）25接種器具消毒器26接種器具消毒器263、無菌操作設(shè)備

超凈工作臺273、無菌操作設(shè)備超凈工無菌接種箱28無菌接種箱284、細胞培養(yǎng)設(shè)備搖床294、細胞培養(yǎng)設(shè)備搖床29培養(yǎng)架30培養(yǎng)架30恒溫振蕩培養(yǎng)箱

光照培養(yǎng)箱31恒溫振蕩培養(yǎng)箱

光照培養(yǎng)箱315、細胞學(xué)鑒定設(shè)備光學(xué)研究顯微鏡、實體顯微鏡、倒置顯微鏡倒置顯微鏡光學(xué)顯微鏡325、細胞學(xué)鑒定設(shè)備倒置顯微鏡光學(xué)顯微鏡321、玻璃器皿三、培養(yǎng)器皿與實驗用具培養(yǎng)皿三角瓶培養(yǎng)瓶331、玻璃器皿三、培養(yǎng)器皿與實驗用具培養(yǎng)皿三角瓶培養(yǎng)瓶332、金屬材質(zhì)用具鑷子解剖刀接種針342、金屬材質(zhì)用具鑷子解剖刀接種針341、玻璃器皿洗滌新購置玻璃器皿1%稀HCl浸漬12h洗衣粉洗滌清水沖洗晾干備用已用過的玻璃器皿四、洗滌技術(shù)351、玻璃器皿洗滌新購置玻璃器皿1%稀HCl浸漬12h洗衣粉洗清洗后器皿內(nèi)外不可掛有水珠，否則重洗，若重洗后仍掛有水珠，則需用洗液浸泡數(shù)小時后（或用去污粉擦洗），重新清洗。

36清洗后器皿內(nèi)外不可掛有水珠，否則重洗，若重洗后仍掛有水珠，則2、塑料用品洗滌新的塑料器皿打開即用已用過的塑料器皿2%NaOH浸泡12h清水沖洗2%—5%鹽酸浸泡30min清水沖洗蒸餾水沖洗晾干備用372、塑料用品洗滌新的塑料器皿打開即用已用過的塑料器皿2%Na

金屬用品一般不宜用各種洗滌液洗滌（新的可以用熱洗衣粉水洗凈），需要清洗時，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。3、金屬用品洗滌38金屬用品一般不宜用各種洗滌液洗滌（新的可以用熱洗衣粉

（一）、滅菌工作是極其重要的。

首先應(yīng)建立有菌和無菌的概念有菌的范疇：

有菌：凡是暴露在空氣中的物體，至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超凈工作臺的臺面，未處理的工具和手等。

無菌：高壓高溫處理（工具、器皿、培養(yǎng)基等）

物理或化學(xué)處理；

火烤后的物體；

健康的動植物不與內(nèi)外部表面接觸的組織

內(nèi)部可能是無菌的（有時也有內(nèi)生菌，但

不會影響培養(yǎng)，也不會污染）

五.滅菌技術(shù)39

（一）、滅菌工作是極其重要的。

首先應(yīng)建立有菌和無1、物理方法：干熱、濕熱、過濾（0.25微米）紫外燈、超聲波等。

2、化學(xué)方法：使用滅菌劑或抗菌素，如酒精、次氯酸鈉、升汞、漂白粉、高錳酸鉀、雙氧水、福爾馬林等。

五.滅菌技術(shù)401、物理方法：干熱、濕熱、過濾（0.25微米）紫外燈、超聲波干熱滅菌玻璃器皿、器械濕熱滅菌培養(yǎng)基、蒸餾水、器械、棉塞等熏蒸滅菌接種室、培養(yǎng)室過濾滅菌液體培養(yǎng)基、蒸餾水藥劑滅菌培養(yǎng)材料燒灼滅菌器械、瓶口、棉塞、包頭紙輻射滅菌

接種室、培養(yǎng)間（一）各種滅菌方法與其使用范圍41干熱滅菌玻璃器皿、器械（一）各

適用于玻璃器皿和金屬器械的滅菌。操作方法：150℃、40min或120℃、120min，如果發(fā)現(xiàn)芽孢桿菌，160℃、90～120min（1）干熱滅菌42

適用于玻璃器皿和金屬器械的滅菌。操作方法：150℃

適用于各種器皿、培養(yǎng)基、器皿、蒸餾水、棉塞、紙等。121℃維持20～30min

注意點：加足水、排盡氣、氣壓降到0時，才能開蓋。（2）濕熱滅菌43

適用于各種器皿、培養(yǎng)基、器皿、蒸餾水、棉塞、紙等。

培養(yǎng)基的滅菌一般用高壓高溫處理，但如果培養(yǎng)基中某些成分遇到高溫分解（如某些生長調(diào)節(jié)劑GA3、玉米素等），就需要過濾滅菌。另外酶、血清等也需要過濾滅菌。

滅菌方法：將生長調(diào)節(jié)劑或酶配成一定濃度，用注射器注入微孔濾膜慮，濾膜孔徑0.22～0.45微米。制培養(yǎng)基時，現(xiàn)將培養(yǎng)基高壓滅菌，待降至50℃左右時，加入適量的激素，然后分裝。

（3）過濾滅菌44

培養(yǎng)基的滅菌一般用高壓高溫處理，但如果培養(yǎng)基中某些主要是利用紫外燈進行照射，適合實驗室空氣、操作臺等，滅菌時間20～30min。

注意：關(guān)燈后5min后再進入。超凈工作臺關(guān)燈后要打開風(fēng)機。（4）射線滅菌45主要是利用紫外燈進行照射，適合實驗室空氣、操作臺等，

用火焰灼燒達到滅菌目的，適用于接種器皿的滅菌。（5）火焰灼燒滅菌46

用火焰灼燒達到滅菌目的，適用于接種器皿的滅菌。（5

適用外植體、實驗器皿、操作表面、皮膚等。

幾種常用消毒劑的效果比較

消毒劑使用濃度(%)消毒時間(min.)效果殘液去除難易乙醇70-750.1-3好易新潔爾滅10～205～30好易氯化汞0.1～12～15最好最難過氧化氫10～125～15較好最易抗菌素4～50mgl-130～60較好較難次氯酸鈣/納9～105～30好易（6）消毒劑47

適用外植體、實驗器皿、操作表面、皮膚等。

幾種常用消毒劑

長期不用的培養(yǎng)室或接種室要進行熏蒸。方法：甲醛、高錳酸鉀熏蒸。

甲醛的用量通常按每立方米空間2-6毫升計算，高錳酸鉀的用量是甲醛的一半。室內(nèi)準備妥當(dāng)后，把稱好的高錳酸鉀放在瓷碗或燒杯內(nèi)(最好在碗或杯下面鋪一張報紙，以利清洗)，然后將甲醛也倒入碗或杯內(nèi)，立即出屋關(guān)門。幾秒鐘后，甲醛溶液即沸騰揮發(fā)。高錳酸鉀是一種氧化劑，當(dāng)它與一部分甲醛作用時，由氧化反應(yīng)產(chǎn)生的熱可使其余的甲醛揮發(fā)為氣體。（7）熏蒸滅菌48長期不用的培養(yǎng)室或接種室要進行熏蒸。方法：甲醛、高錳

甲醛熏蒸接種室應(yīng)至少在使用前24小時進行，熏蒸后密閉保持4小時以上再進入室內(nèi)工作。甲醛對人的眼、鼻有強烈刺激作用。因此，可在使用前用氨進行中和。取與甲醛等量的氨水，倒在另一個燒杯里，迅速放入熏蒸室內(nèi)，使甲醛和氨水發(fā)生中和反應(yīng)，以消除甲醛味，減少對人體的刺激作用。使用氨水應(yīng)在工作前2小時進行。

對有材料的培養(yǎng)室，也可以采用乙二醇加熱熏蒸。49甲醛熏蒸接種室應(yīng)至少在使用前24小時進行，熏蒸后密閉（二）接種室滅菌空氣消毒滅菌接種室超凈工作臺紫外燈照射70%—75%的酒精擦洗培養(yǎng)材料的接種紫外燈照射50（二）接種室滅菌空氣消毒滅菌接種室超凈工作臺紫外燈照射70%（三）外植體滅菌流水沖洗10—20min或更長時間70%—75%酒精中浸泡30s0.1%—0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸餾水沖洗4—5次在10%的次氯酸鈉、飽和漂白粉浸泡30min左右備用51（三）外植體滅菌流水沖洗10—20min或更長時間70%—7常用消毒劑消毒滅菌比較表消毒劑使用濃度（%）去除難易消毒時間（min）效果次氯酸鈣次氯酸鈉漂白粉溴水過氧化氫升汞酒精抗生素硝酸銀9~102飽和溶液1~210~120.1~170~754~5（mg/L1易易易易最易較難易中較難5~305~305~302~105~152~100.2~230~605~30很好很好很好很好好最好好較好好52常用消毒劑消毒滅菌比較表消毒劑使用濃度（%）去除難易消毒時間污染來源人為因素（工作人員本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。物品因素器皿和用具培養(yǎng)皿：洗→熱壓玻璃器皿：洗→干熱（干熱箱）或晾干接種用具：用CCL4布擦→濕布擦→泡75%~95%酒精→燒培養(yǎng)基：濕熱培養(yǎng)材料外部細菌：用水沖洗→化學(xué)藥劑處理內(nèi)部細菌莖尖培養(yǎng)加抗生素：青霉素、利福平操作的空氣：洗刷地板95%酒精擦超凈工作臺用化學(xué)試劑薰蒸六、無菌操作技術(shù)

53污染來源人為因素（工作人員本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手

1、實驗器具和材料的準備

2、用75%的酒精擦拭超凈工作臺，然后室內(nèi)與超凈工作臺用紫外燈殺菌20min-30min。注意：臺面上的用品不要放置太多或重疊放置，以免降低滅菌效果。

3、關(guān)紫外燈、打開風(fēng)機，過5-10min進入緩沖間，以75%洗手和手臂，更換無菌服、帽子和口罩。進入接種室。（注：沒有特別情況，盡量不要下工作臺）

六、無菌操作技術(shù)

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1、實驗器具和材料的準備

2、用75%的酒精擦拭超凈工作

4、用70－75％的酒精拭擦臺面并消毒雙手。試驗用具也應(yīng)該用酒精消毒。點燃酒精燈，將金屬器械在其火焰上灼燒，冷卻待用。

注意：所有操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過灼燒進行。金屬器械不能過度灼燒，以防退火。移液管不能灼燒，培養(yǎng)瓶口、塑料材料、橡膠材料過火焰不能時間太長。55

4、用70－75％的酒精拭擦臺面并消毒雙手。試驗用具也應(yīng)該5、取流水沖洗（至少30min）過的外植體，用一定的消毒劑浸泡消毒，用無菌水沖洗3~4次，放入無菌培養(yǎng)皿中，置于酒精燈火焰下方，用無菌的接種器械進行分離、切割或其他處理。

6、打開培養(yǎng)瓶，瓶口在燈焰處旋轉(zhuǎn)灼燒，用鑷子將培養(yǎng)材料置于培養(yǎng)基上，灼燒鑷子放回，灼燒瓶口，蓋上瓶塞。

7、用酒精擦洗工作臺和手。進行下一輪操作。565、取流水沖洗（至少30min）過的外植體，用一定的消毒劑浸注意（1）進行培養(yǎng)時，動作要準確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動，增加污染機會。（2）不能用手觸與已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。（3）為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央。（4）工作由始至終要保持一定順序性，組織或細胞在未做處理之前，勿過早暴露在空氣中。同樣，培養(yǎng)液在未用前，不要過早開瓶；用過之后如不再重復(fù)使用，應(yīng)立即封閉瓶口直立可增加落菌機會。57注意（1）進行培養(yǎng)時，動作要準確敏捷，但又不必太快，以防空氣（5）吸取營養(yǎng)液、細胞懸液與其它各種用液時，均應(yīng)分別使用吸管，不能混用，以防擴大污染或?qū)е录毎徊嫖廴尽?/p>

（6）工作中不能面向操作區(qū)講話或咳嗽，以免唾沫把細菌或支原體帶入工作臺面發(fā)生污染。

（7）手或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液時如吸管尖碰