凝血分析儀校準(zhǔn)規(guī)范

JJF××××—××××PAGE15凝血分析儀校準(zhǔn)規(guī)范范圍本規(guī)范適用于臨床上用于對(duì)患者的血液進(jìn)行凝血和抗凝、纖溶和抗纖溶功能分析的凝血分析儀。本規(guī)范不適用于血小板聚集功能和血流變功能檢測(cè)、即時(shí)檢測(cè)（POCT）的儀器。引用文件本規(guī)范引用下列文件：JJF1001-2011通用計(jì)量術(shù)語(yǔ)及定義JJF1071-2010國(guó)家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫(xiě)規(guī)則JJF1101-2003環(huán)境試驗(yàn)設(shè)備溫度、濕度校準(zhǔn)規(guī)范YY/T0659-2017凝血分析儀CLSIH30-A2測(cè)定血漿中纖維蛋白原的方法。批準(zhǔn)的指南——第二版（Procedureforthedeterminationoffibrinogeninplasma.Approvedguideline-secondedition）注：凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本規(guī)范；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本規(guī)范。術(shù)語(yǔ)與計(jì)量單位JJF1001-2011、YY/T0659-2017和CLSIH30-A2中界定的及以下術(shù)語(yǔ)和定義適用于本規(guī)范。樣本sample可用于檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定的待測(cè)液體，主要包括校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、新鮮血漿或全血等。反應(yīng)體系reactionsystem包括樣本和所加入試劑所組成的液相系統(tǒng)，可獲得測(cè)定結(jié)果相關(guān)參數(shù)。半自動(dòng)semi-automated儀器或測(cè)試系統(tǒng)的某些分析步驟實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化，其他步驟仍需操作者參與。全自動(dòng)full-automated儀器或測(cè)試系統(tǒng)的所有分析步驟都實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化，包括樣本和試劑添加、樣本/試劑互相反應(yīng)、化學(xué)/生物學(xué)分析、結(jié)果計(jì)算和結(jié)果讀出。通道channel在一個(gè)測(cè)量周期內(nèi),能檢測(cè)反應(yīng)體系并獲得檢測(cè)結(jié)果的通路。凝固法coagulationmethod模擬生理血液凝固條件，加入某種試劑，啟動(dòng)血液凝集反應(yīng)，使樣本中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為交聯(lián)纖維蛋白，使樣本發(fā)生凝固。通過(guò)連續(xù)監(jiān)測(cè)此過(guò)程中反應(yīng)體系所發(fā)生的光學(xué)（例如吸光度）、物理學(xué)（例如黏度）或電學(xué)（例如電流）特性變化確定反應(yīng)終點(diǎn)，并作為纖維蛋白原的轉(zhuǎn)化時(shí)間，利用這種原理測(cè)定血液樣本凝固特性或纖溶特性的方法。發(fā)色底物法chromgenicsubstrateassay以人工合成具有某種裂解位點(diǎn)的化合物（如苯丙氨酸-纈氨酸-精氨酰胺，Phe-Val-Arg）與產(chǎn)色物質(zhì)結(jié)合（如對(duì)硝基苯胺—PNA）連接形成酶的特異性底物，由于待測(cè)樣本中存在或反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生了有活性的酶，底物被水解并釋放產(chǎn)色物質(zhì)，使反應(yīng)體系發(fā)生顏色變化，通過(guò)比色的方法檢測(cè)其顏色變化程度，并與酶活性或待測(cè)物含量成一定的比例關(guān)系。免疫比濁法immuno-nephelometry利用抗原與抗體之間特異性結(jié)合的特點(diǎn)，使待測(cè)物與標(biāo)記有其特異性抗體的微粒結(jié)合，使得反應(yīng)體系的濁度發(fā)生變化，通過(guò)檢測(cè)其光強(qiáng)度的變化定量待測(cè)物的方法。概述凝血分析儀（以下簡(jiǎn)稱儀器）是用于凝血、抗凝、纖維蛋白原溶解系統(tǒng)檢測(cè)的一類儀器，儀器的檢測(cè)項(xiàng)目至少應(yīng)該包括血漿凝血酶原時(shí)間（PT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）、纖維蛋白原（FIB）、凝血酶時(shí)間（TT）測(cè)定，可為出血性和血栓性疾病的診斷及鑒別診斷、抗凝及溶栓治療的監(jiān)測(cè)及療效觀察提供有價(jià)值的指標(biāo)。儀器依據(jù)測(cè)試方法分為凝固法、發(fā)色底物法和免疫比濁法，按照不同的自動(dòng)化程度分為半自動(dòng)凝血分析儀和全自動(dòng)凝血分析儀，半自動(dòng)凝血分析儀根據(jù)可同時(shí)檢測(cè)樣本的數(shù)量分為單通道和多通道。半自動(dòng)凝血分析儀一般由檢測(cè)單元、控制單元、數(shù)據(jù)處理、顯示與打印單元等組成。全自動(dòng)凝血分析儀一般由自動(dòng)進(jìn)樣單元、檢測(cè)單元、控制單元、數(shù)據(jù)處理、顯示與打印單元等組成。計(jì)量特性凝血分析儀各項(xiàng)計(jì)量性能指標(biāo)見(jiàn)表1。表1凝血分析儀的主要計(jì)量性能指標(biāo)計(jì)量性能計(jì)量性能指標(biāo)溫度控制溫育部和溫育位恒溫裝置部（37.0℃）溫度示值誤差±1.0℃試劑冷卻位溫度≤20℃通道差（半自動(dòng)凝血分析儀）≤10％FIB攜帶污染率（全自動(dòng)凝血分析儀）≤10％測(cè)量重復(fù)性半自動(dòng)凝血分析儀PT正常樣本(樣本要求:11s~14s)≤5.0%異常樣本≤10.0%APTT正常樣本(樣本要求:25s~37s)≤5.0%異常樣本≤10.0%FIB正常樣本(樣本要求:2g/L~4g/L)≤10.0%異常樣本≤20.0%TT正常樣本(樣本要求:12s~16s)≤15.0%異常樣本≤20.0%全自動(dòng)凝血分析儀PT正常樣本(樣本要求:11s~14s)≤3.0%異常樣本≤8.0%APTT正常樣本(樣本要求:25s~37s)≤4.0%異常樣本≤8.0%FIB正常樣本(樣本要求:2g/L~4g/L)≤8.0%異常樣本≤15.0%TT正常樣本(樣本要求:12s~16s)≤10.0%異常樣本≤15.0%FIB示值誤差±10.0%FIB線性相關(guān)性r0.980注：以上技術(shù)指標(biāo)不用于合格性判別，僅供參考。校準(zhǔn)條件環(huán)境條件環(huán)境溫度：18℃～25℃；相對(duì)濕度：≤80%；校準(zhǔn)設(shè)備和試劑溫度測(cè)試儀，測(cè)量端可經(jīng)任意彎曲折疊放入半封閉儀器內(nèi)部溫場(chǎng)，測(cè)量范圍：（0~50）℃，最大允許誤差：±0.1℃。血漿纖維蛋白原標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，相對(duì)擴(kuò)展不確定度一般應(yīng)不大于5%（k=2），或根據(jù)用戶及儀器的技術(shù)要求選擇國(guó)際參考物質(zhì)。校準(zhǔn)過(guò)程中需要的儀器配套診斷試劑和臨床質(zhì)控血漿樣本。試劑應(yīng)按照說(shuō)明書(shū)要求的條件儲(chǔ)存并在有效期內(nèi)。校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法溫度控制溫育部和溫育位恒溫裝置部溫度示值誤差開(kāi)機(jī)后按照廠家要求進(jìn)行預(yù)熱，將溫度測(cè)試儀的測(cè)量端通過(guò)彎曲折疊后放入儀器溫育部和溫育位恒溫裝置部中心點(diǎn)，待儀器顯示溫度達(dá)到設(shè)定溫度37℃穩(wěn)定后，每2min記錄測(cè)試點(diǎn)的溫度一次，在30min內(nèi)共測(cè)試15次，根據(jù)公式（1）計(jì)算溫育部和溫育位恒溫裝置部溫度示值誤差：（1）式中：——溫育部和溫育位恒溫裝置部溫度示值誤差，℃；——儀器顯示溫度設(shè)定值，℃；——中心點(diǎn)溫度15次測(cè)量的平均值，℃。試劑冷卻位溫度（適用于全自動(dòng)凝血分析儀）儀器開(kāi)機(jī)預(yù)熱后，將溫度測(cè)試儀的測(cè)量端放入儀器試劑冷卻位，待儀器顯示溫度達(dá)到設(shè)定溫度穩(wěn)定后，每2min記錄測(cè)試點(diǎn)的溫度一次，在30min內(nèi)共測(cè)試15次，根據(jù)公式（2）計(jì)算15次溫度測(cè)量平均值表征試劑冷卻位溫度：（2）式中：——試劑冷卻位溫度15次測(cè)量的平均值，℃；——溫度測(cè)試儀單次測(cè)量的溫度值，℃。通道差（適用于半自動(dòng)凝血分析儀）正常條件下，在至少3個(gè)以上通道中連續(xù)測(cè)定同一正常標(biāo)本PT、APTT、TT、FIB各三次。分別計(jì)算各通道測(cè)定值的算術(shù)平均值（）及所有通道測(cè)定值的總算術(shù)平均值（），然后按式（3）計(jì)算通道差（R）。（3）式中：——通道差；——各通道測(cè)定值的算術(shù)平均值中最大值；——各通道測(cè)定值的算術(shù)平均值中最小值；——所有通道測(cè)定值的總算術(shù)平均值。FIB攜帶污染率（適用于全自動(dòng)凝血分析儀）取一份高濃度的臨床質(zhì)控樣本，混合均勻后連續(xù)測(cè)定3次，再取一份低濃度的臨床質(zhì)控樣本，混合均勻后連續(xù)測(cè)定3次，按式（4）計(jì)算攜帶污染率。（4）式中：——攜帶污染率，%；——低值臨床質(zhì)控樣本第1次測(cè)定值，g/L；——低值臨床質(zhì)控樣本第3次測(cè)定值，g/L；——高值臨床質(zhì)控樣本第3次測(cè)定值，g/L；注：高濃度樣本測(cè)定值應(yīng)大于低濃度樣本測(cè)定值的2倍。測(cè)量重復(fù)性采用凝血分析儀配套的試劑、校準(zhǔn)品及相應(yīng)的測(cè)定程序，對(duì)計(jì)量特性中規(guī)定的項(xiàng)目和樣本，每個(gè)項(xiàng)目重復(fù)測(cè)定至少6次，并根據(jù)公式（5）計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD作為重復(fù)性的表征。

（5）式中：RSD——相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差；——第次的測(cè)量值；——測(cè)定平均值；n——測(cè)定次數(shù)，n≥6。FIB示值誤差用儀器測(cè)定血漿纖維蛋白原標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物質(zhì)，重復(fù)測(cè)量3次，計(jì)算3次測(cè)量結(jié)果的平均值。根據(jù)公式（6）計(jì)算FIB示值誤差：（6）式中：——示值誤差，%；——標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物質(zhì)3次測(cè)量結(jié)果的平均值，g/L；——標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值或參考物質(zhì)的參考值，g/L。FIB線性相關(guān)性將FIB高濃度樣本至少稀釋為5個(gè)濃度（涵蓋測(cè)試范圍的上、下限和中間值），再將各濃度的樣本上機(jī)測(cè)定，每份樣本測(cè)定3次，取其平均值。將測(cè)量結(jié)果的平均值與樣本的標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行線性回歸，按公式（7）計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)r作為線性相關(guān)性的表征。（7）式中：r——線性相關(guān)系數(shù)；——各個(gè)濃度水平樣本的標(biāo)準(zhǔn)值，g/L；——各個(gè)濃度水平樣本的平均值，g/L；——各個(gè)濃度水平樣本的測(cè)量值，g/L；——各個(gè)濃度水平樣本的測(cè)量值平均值，g/L。校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)校準(zhǔn)結(jié)果處理經(jīng)校準(zhǔn)后的凝血分析儀應(yīng)填發(fā)校準(zhǔn)證書(shū)，校準(zhǔn)證書(shū)應(yīng)符合JJF1071－2010中5.12的要求，并給出各校準(zhǔn)項(xiàng)目名稱和測(cè)量結(jié)果以及擴(kuò)展不確定度。校準(zhǔn)原始記錄參考格式見(jiàn)附錄A，校準(zhǔn)證書(shū)結(jié)果頁(yè)參考格式見(jiàn)附錄B。8.2校準(zhǔn)結(jié)果的測(cè)量不確定度凝血分析儀校準(zhǔn)結(jié)果的不確定度按JJF1059.1－2012的要求評(píng)定，溫度和FIB示值誤差的不確定度評(píng)定示例見(jiàn)附錄C。復(fù)校時(shí)間間隔由于復(fù)校時(shí)間間隔的長(zhǎng)短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等諸因素所決定的，因此，送校單位可根據(jù)實(shí)際使用情況自主決定復(fù)校時(shí)間間隔，建議不超過(guò)1年。

附錄A校準(zhǔn)原始記錄（參考）格式儀器名稱型號(hào)制造廠商出廠編號(hào)委托單位名稱聯(lián)系人地址電話溫度濕度記錄編號(hào)試劑批號(hào)校準(zhǔn)員核驗(yàn)員溫度控制時(shí)間/min24681012141618202224262830控制溫育部和溫育位恒溫裝置部測(cè)量值/℃設(shè)定值/℃溫度示值誤差/℃試劑冷卻位溫度測(cè)量值/℃平均值/℃通道差（適用于半自動(dòng)凝血分析儀）項(xiàng)目…RPT（s）APTT（s）FIB（g/L）TT（s）FIB攜帶污染率（適用于全自動(dòng)凝血分析儀）項(xiàng)目低值高值FIB攜帶污染率FIB（g/L）測(cè)量重復(fù)性項(xiàng)目樣本類型測(cè)定值RSDPT(s)APTT(s)FIB(g/L)TT(s)FIB示值誤差項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)值測(cè)量值平均值示值誤差FIB（g/L）FIB線性相關(guān)性樣本測(cè)定值平均值標(biāo)準(zhǔn)值線性相關(guān)系數(shù)12345校準(zhǔn)證書(shū)結(jié)果頁(yè)（參考）格式溫度控制溫育部和溫育位恒溫裝置部（37.0℃）溫度示值誤差試劑冷卻位溫度通道差（半自動(dòng)凝血分析儀）FIB攜帶污染率（全自動(dòng)凝血分析儀）測(cè)量重復(fù)性半自動(dòng)凝血分析儀PT正常樣本異常樣本APTT正常樣本異常樣本FIB正常樣本異常樣本TT正常樣本異常樣本全自動(dòng)凝血分析儀PT正常樣本異常樣本APTT正常樣本異常樣本FIB正常樣本異常樣本TT正常樣本異常樣本FIB示值誤差FIB線性相關(guān)性溫度測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度：FIB測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度：校準(zhǔn)員：核驗(yàn)員：附錄B附錄C溫度和FIB測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)定示例C.1溫度測(cè)量結(jié)果不確定度評(píng)定C.1.1測(cè)量方法開(kāi)機(jī)后按照廠家要求進(jìn)行預(yù)熱，將溫度測(cè)試儀的測(cè)量端通過(guò)彎曲折疊后放入儀器溫育部和溫育位恒溫裝置部中心點(diǎn)，待儀器顯示溫度達(dá)到設(shè)定溫度37℃穩(wěn)定后，每2min記錄測(cè)試點(diǎn)的溫度一次，在30min內(nèi)共測(cè)試15次。C.1.2測(cè)量模型示值誤差可由公式（C.1.1）給出：（C.1.1）式中：——溫育部和溫育位恒溫裝置部溫度示值誤差，℃；——儀器顯示溫度設(shè)定值，℃；——中心點(diǎn)15次測(cè)量的平均值，℃。C.1.3方差和靈敏系數(shù)依據(jù)，有，則由公式(C.1.1)得：，由于與完全不相關(guān)，故輸出量估計(jì)方差的完整表達(dá)式應(yīng)為：（C.1.2）由公式（C.1.2）得：（C.1.3）C.1.4不確定度來(lái)源不確定度來(lái)源包括：a）測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度；b）分辨力引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度；c）溫度測(cè)試儀引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度；C.1.5標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量計(jì)算C.1.5.1測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量選定一臺(tái)全自動(dòng)凝血分析儀，使用溫度測(cè)試儀對(duì)溫育部和溫育位恒溫裝置部連續(xù)測(cè)量10次，得到一組測(cè)量值：36.8℃，36.9℃，37.2℃，37.4℃，37.3℃，37.1℃，37.3℃，37.1℃，36.9℃，37.0℃。則單次測(cè)量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差：實(shí)際校準(zhǔn)時(shí)在重復(fù)性條件下連續(xù)測(cè)量15次，以15次測(cè)量的算術(shù)平均值作為結(jié)果，則由測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量為：C.1.5.2分辨力引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量?jī)x器的最小分辨力為0.1℃，區(qū)間半寬a=0.05℃，按均勻分布，包含因子取k=，由此引起的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：從以上計(jì)算可以看出，由于重復(fù)測(cè)量引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量大于分辨力引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量，由JJF1033-2016《計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)考核規(guī)范》可知，當(dāng)重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量大于分辨力引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量時(shí)，可不考慮分辨力引入的不確定度分量，故分辨力引入的不確定度分量在標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成時(shí)不列入。C.1.5.3溫度測(cè)試儀引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量由溫度測(cè)試儀引入的不確定度分量可以根據(jù)其最大允許誤差假設(shè)服從均勻分布，k=，根據(jù)公式（C.1.4）計(jì)算：（C.1.4）溫度測(cè)試儀的最大允許誤差為±0.1℃，則由溫度測(cè)試儀引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量：C.1.6標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表見(jiàn)表C.1.1。表C.1.1全自動(dòng)凝血分析儀溫度測(cè)定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表不確定度來(lái)源標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量測(cè)量重復(fù)性0.052℃溫度測(cè)試儀0.058℃C.1.7合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度由公式（C.1.3）可得：C.1.8擴(kuò)展不確定度取k=2，則：C.2FIB測(cè)量結(jié)果不確定度評(píng)定C.2.1測(cè)量方法采用凝血分析儀測(cè)定血漿纖維蛋白原參考物質(zhì)，重復(fù)測(cè)量3次，計(jì)算3次測(cè)量結(jié)果的平均值，并與參考物質(zhì)參考值進(jìn)行比較。C.2.2測(cè)量模型相對(duì)示值誤差可由公式（C.2.1）給出：（C.2.1）式中：——示值誤差，g/L；——參考物質(zhì)3次測(cè)量結(jié)果的平均值，g/L；——參考物質(zhì)的參考值，g/L。C.2.3方差和靈敏系數(shù)依據(jù)，有，則由公式（C.2.1）得：，由于與完全不相關(guān)，故輸出量估計(jì)方差的完整表達(dá)式應(yīng)為：（C.2.2）由公式（C.2.2）得：（C.2.3）C.2.4不確定度來(lái)源不確定度來(lái)源包括：a）凝血分析儀測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度；b）分辨力引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度；c）參考物質(zhì)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度；C.2.5標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量計(jì)算C.2.5.1