胚胎工程的應(yīng)用及前景

關(guān)于胚胎工程的應(yīng)用及前景胚胎工程技術(shù)：胚胎移植體外受精胚胎分割胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)目前應(yīng)用較多的是：胚胎移植、胚胎分割、體外生產(chǎn)胚胎技術(shù)。第2頁,共68頁，2024年2月25日，星期天1.胚胎移植——P74

將雌性動物的早期胚胎,或者通過體外受精及其他方式得到的胚胎,移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動物的體內(nèi),使之發(fā)育為新個體的技術(shù)。一胚胎移植第3頁,共68頁，2024年2月25日，星期天胚胎的來源：雌性動物的早期胚胎或體外受精及其他方式得到的胚胎。供體：提供胚胎的個體。受體：接受胚胎的個體。受體的條件：同種、生理狀態(tài)相同。第4頁,共68頁，2024年2月25日，星期天

胚胎移植實(shí)際上是生產(chǎn)胚胎的供體和孕育胚胎的受體共同繁殖后代的過程。在胚胎工程中通過任何一項(xiàng)技術(shù)，如轉(zhuǎn)基因、核移植，或體外受精等技術(shù)獲得的胚胎，都必須移植給受體才能獲得后代。因此，胚胎移植又是胚胎工程其他技術(shù)的最后一道“工序”。第5頁,共68頁，2024年2月25日，星期天2.胚胎移植的現(xiàn)狀和意義1)保持供體優(yōu)良特性(加速育種工作和品種改良)2)節(jié)約成本\費(fèi)用(大量節(jié)省購買種畜的費(fèi)用)；3)大規(guī)模繁殖(一胎多產(chǎn))；4)

保存品種資源和保護(hù)瀕危物種；5)充分發(fā)揮雌性個體的繁殖潛力,縮短供體本身的繁殖周期。第6頁,共68頁，2024年2月25日，星期天為什么胚胎移植能成功?移動到任何一頭動物子宮內(nèi)都能發(fā)育嗎?同種動物發(fā)情排卵后,在一段時間內(nèi)供體\受體具有相同的生理環(huán)境為什么能收集到胚胎?早期胚胎一定時間內(nèi)處于游離狀態(tài)供體和受體會不會發(fā)生排斥/同種動物之間基本上不排斥為什么移植的胚胎能保留供體雙親的特性?胚胎雖然與受體有生理和組織上的聯(lián)系,但遺傳特性不受受體的影響.生理學(xué)基礎(chǔ)3.胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)P76第7頁,共68頁，2024年2月25日，星期天胚胎移植的實(shí)質(zhì)

胚胎移植實(shí)質(zhì)上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)換，而胚胎本身的遺傳物質(zhì)并不發(fā)生改變，因此各種性狀均能保持其原來的優(yōu)良特性。第8頁,共68頁，2024年2月25日，星期天思考與討論:P76

1、在胚胎移植操作中，怎樣才能使胚胎在移植前后所處的生理環(huán)境保持一致？例如，供、受體的發(fā)情時間要一致嗎？供體胚胎移入受體子宮的位置，應(yīng)與在供體內(nèi)的位置相同后相似嗎？答案：應(yīng)對供體和受體母畜進(jìn)行同期發(fā)情處理，使它們的生理?xiàng)l件達(dá)到同步后一致，這樣才能使供體的胚胎移入受體后有相同或相似的生存條件，這是胚胎移植成功與否的關(guān)鍵。因此，必須做到供、受體母畜的發(fā)情時間一致。同時還要做到移入受體子宮胚胎的位置應(yīng)該與其在供體內(nèi)的位置相同或相似，移入胚胎一側(cè)的受體子宮對應(yīng)的卵巢必須有黃體存在。第9頁,共68頁，2024年2月25日，星期天2、胚胎移植實(shí)質(zhì)上是早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移。你認(rèn)為這樣的概括正確嗎？

正確。第10頁,共68頁，2024年2月25日，星期天4、胚胎移植的基本程序閱讀課本，思考胚胎移植的基本程序包括哪幾個步驟？P76（1）供體、受體的選擇和處理（2）配種或進(jìn)行人工授精（3）胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存（4）胚胎移植（5）移植后的檢查第11頁,共68頁，2024年2月25日，星期天（1）對供體、受體進(jìn)行選擇供體：遺傳性能和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的個體；受體：健康和正常繁殖能力的個體處理：同期發(fā)情具體做法：注射相關(guān)激素。第12頁,共68頁，2024年2月25日，星期天（2）采集卵母細(xì)胞方法：超數(shù)排卵具體做法：注射促性腺激素第13頁,共68頁，2024年2月25日，星期天（3）配種或人工授精精子來源：同種優(yōu)良的雄性動物。第14頁,共68頁，2024年2月25日，星期天（4）胚胎的收集

在配種或輸精后第7天，用特制的沖卵裝置，把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來。

為什么在第7天進(jìn)行沖卵？第15頁,共68頁，2024年2月25日，星期天（5）對胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查

你知道檢查的目的嗎？此時胚胎處于什么時期？第16頁,共68頁，2024年2月25日，星期天（6）胚胎的保存或移植胚胎保存的條件是什么？胚胎為什么要保存？第17頁,共68頁，2024年2月25日，星期天（7）胚胎的移植方法一：手術(shù)法具體做法：引出受體子宮和卵巢，將胚胎注入子宮角，縫合創(chuàng)口。方法二：非手術(shù)法將裝有胚胎的移植管送入受體母牛子宮的相應(yīng)部位，注入胚胎。第18頁,共68頁，2024年2月25日，星期天（8）對受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查第19頁,共68頁，2024年2月25日，星期天（9）受體母牛產(chǎn)下胚胎移植的犢牛第20頁,共68頁，2024年2月25日，星期天選擇供體母牛受體母?！诎l(fā)情處理……超數(shù)排卵供體公牛配種沖卵質(zhì)量檢查、培養(yǎng)胚胎移植妊娠檢查分娩（胚胎移植的犢牛）總結(jié)：第21頁,共68頁，2024年2月25日，星期天【歸納總結(jié)】①該過程中兩次使用促性腺激素，第一次對受、供體進(jìn)行同期發(fā)情處理；第二次用于供體的超數(shù)排卵。②該過程中的兩次檢查：第一次對收集的胚胎進(jìn)行檢查；第二次對受體母牛是否妊娠進(jìn)行檢查。③產(chǎn)下的犢牛性狀取決于所用公牛和供體牛，性別取決于公牛提供何種類型的精子，二者與受體牛沒有關(guān)系。④沖卵的含義是從子宮中沖出胚胎，而非沖出卵子。第22頁,共68頁，2024年2月25日，星期天胚胎移植成功與否要有兩個條件（1）胚胎移植一般應(yīng)在同種的雌性供體和受體之間進(jìn)行。（2）進(jìn)行胚胎移植的供體和受體的生理狀態(tài)要相同。第23頁,共68頁，2024年2月25日，星期天二、胚胎分割閱讀課本，思考以下問題：（1）胚胎分割的概念（2）胚胎分割特點(diǎn)（3）胚胎分割的理論基礎(chǔ)（4）胚胎分割操作過程第24頁,共68頁，2024年2月25日，星期天1.概念:

采用顯微手術(shù)（機(jī)械方法）的方法將早期胚胎分割成2分胚,4分胚或8分胚,經(jīng)體內(nèi)或體外培養(yǎng)后植入受體，以得到同卵雙胎或同卵多胎的技術(shù)。第25頁,共68頁，2024年2月25日，星期天2.特點(diǎn)：

后代具有相同的遺傳物質(zhì)，因此胚胎分割可以看做動物無性繁殖或克隆的方法之一。3、理論基礎(chǔ)

動物胚胎細(xì)胞的全能性。所以胚胎分割的時期為：

囊胚或桑椹胚。第26頁,共68頁，2024年2月25日，星期天4、選擇的胚胎：

發(fā)育良好的,形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚。5、使用的主要儀器：

實(shí)體顯微鏡和顯微操作儀。6、具體操作

用分割針或分割刀片將胚胎切開，吸出其中的半個胚胎，注入預(yù)先準(zhǔn)備好的空透明帶中，或直接將裸半胚移植給受體。第27頁,共68頁，2024年2月25日，星期天.切幾份,之間關(guān)系,有什么方法,目前主要是2份,原因概念.切什么時期第28頁,共68頁，2024年2月25日，星期天.注入空透明帶.半裸胚直接到受體選擇良好的桑椹胚或囊胚移入培養(yǎng)皿中，用分割針或分割刀片將其切開，吸出其中的半個胚胎注入透明帶中或直接移植給受體?；具^程：第29頁,共68頁，2024年2月25日，星期天.半裸胚直接移植,均等,為什么只能2份.還存在什么問題第30頁,共68頁，2024年2月25日，星期天..性別鑒定2第31頁,共68頁，2024年2月25日，星期天精子分離流程示意圖第32頁,共68頁，2024年2月25日，星期天精子分離Chamber第33頁,共68頁，2024年2月25日，星期天（二）早期胚胎的性別鑒定1、核型分析法：細(xì)胞遺傳學(xué)方法又稱為核型分析法。常采用切割胚，一半用于鑒定性別，一半用于冷凍或移植。其基本原理是取一部分細(xì)胞，先用秋水仙素處理，再固定染色，檢查性染色體，根據(jù)人色體中期的譜帶差異、Y染色體的大小及形態(tài)判斷性別，準(zhǔn)確率達(dá)100%。但過程復(fù)雜，且要求操作人員有豐富的經(jīng)驗(yàn)。第34頁,共68頁，2024年2月25日，星期天胚

胎

性

別

鑒

定2、SRY—PCR鑒定法：從早期胚胎中取出一個或幾個卵裂球，用特異性引物擴(kuò)增SRY基因，能夠產(chǎn)生出擴(kuò)增DNA片段的胚胎即為雄性，反之為雌性。再把確定性別的胚胎移植到子宮。第35頁,共68頁，2024年2月25日，星期天7、操作注意事項(xiàng)：①對囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時，要將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割。原因：內(nèi)細(xì)胞團(tuán)一般到囊胚階段才出現(xiàn)，它是發(fā)育為胚胎本身的基礎(chǔ)細(xì)胞，其他細(xì)胞為滋養(yǎng)細(xì)胞，只為胚胎和胎兒發(fā)育提供營養(yǎng)。若分割時不能將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，會出現(xiàn)含內(nèi)細(xì)胞團(tuán)多的部分正常發(fā)育的能力強(qiáng)，少的部分發(fā)育受阻或發(fā)育不良，甚至不能發(fā)育等問題。第36頁,共68頁，2024年2月25日，星期天②胚胎分割的份數(shù)越多，操作的難度會越大，移植的成功率也越低。早期胚胎的體積很小，只有在顯微鏡下才能看到；再者，細(xì)胞數(shù)目是有限的。分割的份數(shù)越多，不但難以做到均等分割，每一份的細(xì)胞數(shù)會越少，而且作為囊胚期的胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞所受的影響會更大。因此，分割的份數(shù)越多，技術(shù)的難度會越大，移植后的恢復(fù)和發(fā)育的難度會越大，移植成功率自然會降低。第37頁,共68頁，2024年2月25日，星期天8、胚胎分割技術(shù)的缺陷（1）剛出生動物的體重偏低，毛色和斑紋還存在差異；（2）采用胚胎分割技術(shù)產(chǎn)生同卵多胎的可能性是有限的。9、胚胎分割技術(shù)的應(yīng)用:

為轉(zhuǎn)基因技術(shù)、性別控制技術(shù)提供活胚材料。第38頁,共68頁，2024年2月25日，星期天歸納小結(jié)第39頁,共68頁，2024年2月25日，星期天三.胚胎干細(xì)胞閱讀課本，思考以下問題：（1）什么是胚胎干細(xì)胞？簡稱是什么？（2）胚胎干細(xì)胞的來源。（3）胚胎干細(xì)胞的特性。（4）胚胎干細(xì)胞的應(yīng)用。第40頁,共68頁，2024年2月25日，星期天提醒

試管嬰兒(動物)技術(shù)為有性生殖，胚胎分割移植為無性生殖。胚胎移植是有性生殖還是無性生殖取決于胚胎是由受精卵形成的還是核移植技術(shù)形成重組細(xì)胞發(fā)育而成的。第41頁,共68頁，2024年2月25日，星期天干細(xì)胞干細(xì)胞是一種具有多項(xiàng)分化潛能和自我復(fù)制、更新能力的原始未分化細(xì)胞，是形成哺乳類各種組織器官的祖宗細(xì)胞。第42頁,共68頁，2024年2月25日，星期天多能、專能.全能細(xì)胞根據(jù)來源和個體發(fā)育過程中先后次序不同，干細(xì)胞可分為：胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞／組織干細(xì)胞

第43頁,共68頁，2024年2月25日，星期天分類全能干細(xì)胞（胚胎干細(xì)胞）桑椹胚及以前（如受精卵）由內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞、原始性腺細(xì)胞分離出來能發(fā)育成完整個體多能干細(xì)胞(成體干細(xì)胞)能分化出動物體內(nèi)的多種組織（造血干細(xì)胞）專能干細(xì)胞如成肌細(xì)胞、皮膚生發(fā)層細(xì)胞等能分化出特定的（一種或兩種）組織.分別指什么,分化程度,潛能；核全能性；目前初始化.應(yīng)用按照分化潛能大小來分類第44頁,共68頁，2024年2月25日，星期天..分類第45頁,共68頁，2024年2月25日，星期天干細(xì)胞可以通過以下四個途徑獲得：(1)從體外培養(yǎng)的胚胎獲得；

(2)從早期流產(chǎn)的胎兒中獲得；(3)從克隆的胚胎中獲得；(4)從成體中獲得。第46頁,共68頁，2024年2月25日，星期天胚胎干細(xì)胞:第47頁,共68頁，2024年2月25日，星期天.加圖，歸納.特點(diǎn)胚胎干細(xì)胞:內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞原始性腺細(xì)胞概念：由

或_______中分離出來的一類細(xì)胞。簡稱ES或EK細(xì)胞。早期胚胎原始性腺第48頁,共68頁，2024年2月25日，星期天形態(tài)、功能形態(tài)：體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯功能：具有發(fā)育的全能性，可以分化成任何一種組織。體外培養(yǎng)，只增殖不分化?？衫鋬霰４?；可進(jìn)行遺傳改造.為什么要移植，練習(xí)冊P5611.全能細(xì)胞胚胎干細(xì)胞第49頁,共68頁，2024年2月25日，星期天.鼠應(yīng)用第50頁,共68頁，2024年2月25日，星期天.應(yīng)用前景第51頁,共68頁，2024年2月25日，星期天

3.主要用途

閱讀課本相關(guān)內(nèi)容，說說胚胎干細(xì)胞有什么具體用途？（1）治療人類的某些頑癥。

人類由于細(xì)胞壞死、退化或功能異常引起的疾病，如帕金森綜合癥、少年糖尿病和老年癡呆癥等，已成為醫(yī)學(xué)上尚未攻克的頑癥。利用ES細(xì)胞可以誘導(dǎo)分化形成新的組織細(xì)胞的特性，移植ES細(xì)胞可使壞死或退化的部位得以修復(fù)并恢復(fù)正常功能。目前，在動物實(shí)驗(yàn)方面，用ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化出的某些組織細(xì)胞已成功地治愈糖尿病、肝衰竭、心衰竭和成骨不良等疑難病癥。第52頁,共68頁，2024年2月25日，星期天（2）培育出人造組織器官，用于器官移植

隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展，通過ES細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化，還可以培育出人造組織器官，解決目前臨床上存在的供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題。（3）ES細(xì)胞也是研究體外細(xì)胞分化的理想材料。ES細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上，或在添加抑制因子的培養(yǎng)液中，能夠維持不分化的狀態(tài)。誘導(dǎo)因子：誘導(dǎo)ES細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化。第53頁,共68頁，2024年2月25日，星期天胚胎干細(xì)胞的應(yīng)用前景.優(yōu)點(diǎn)1）移植ES細(xì)胞修復(fù)壞死或退化部位，治愈糖尿病、肝(心)衰竭、________等病癥2）ES細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化，可培育________3)ES細(xì)胞在牛黃酸、丁酰環(huán)腺苷酸等誘導(dǎo)因子作用下可向不同類型組織細(xì)胞________成骨不良人造組織器官分化第54頁,共68頁，2024年2月25日，星期天

干細(xì)胞應(yīng)用前景非常廣闊，比如可用于細(xì)胞治療、基因治療、藥物篩檢和毒性的檢測、生物體發(fā)育機(jī)制研究等。其中最吸引人的應(yīng)用，是將干細(xì)胞分化成某一特定的細(xì)胞、組織，甚至器官，通過移植，使之再建起受損的組織，甚至器官。比如，將干細(xì)胞在體外分化為胰島素細(xì)胞，注入病人胰臟中，通過增殖，構(gòu)成病人新的胰島組織，它就可以替代病人受損的胰島組織，使依賴注射胰島素維持生命的病人得到根治。人們預(yù)言，干細(xì)胞有可能用于治療人類幾乎所有的組織壞死性或退化性疾病，它將是人類醫(yī)療史上的一次革命。第55頁,共68頁，2024年2月25日，星期天衰老細(xì)胞、癌細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞的特征比較第56頁,共68頁，2024年2月25日，星期天1.概念：簡稱ES或EK細(xì)胞,是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞。

干細(xì)胞的分類：（1）全能干細(xì)胞（2）多能干細(xì)胞（3）專能干細(xì)胞第57頁,共68頁，2024年2月25日，星期天2.特點(diǎn):（1）形態(tài)：

體積小.細(xì)胞核大,核仁明顯；（2）功能：

具有發(fā)育的全能性.可分化為成年動物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞.體外培養(yǎng)可增殖不分化；（3）在體外培養(yǎng)的條件下，ES細(xì)胞可以增殖而不發(fā)生分化。對它可以進(jìn)行冷凍保存，也可以進(jìn)行遺傳改造。第58頁,共68頁，2024年2月25日，星期天練習(xí)1.下列有關(guān)動物胚胎移植的敘述中，錯誤的是（）A.受孕母畜體內(nèi)的受精卵或胚胎均能移植B.受體母畜必須處于與供體母畜同步發(fā)情的狀態(tài)C.超數(shù)排卵技術(shù)要使用一定的激素D.試管嬰兒只是受精及早期卵裂過程在試管中進(jìn)行A第59頁,共68頁，2024年2月25日，星期天2.下列對于優(yōu)良種畜的胚胎移植的說法不正確的是（）A.供體母牛必須是同一物種的良種B.受體母牛必須是同一物種的良種C.供體公牛必須是同一物種的良種D.受體母?？梢允峭晃锓N的一般健康牛B第60頁,共68頁，2024年2月25日，星期天3.供體的胚胎移植到受體后，游離的胚胎在發(fā)育過程中形成胎盤與受體相連，并通過胎盤與受體的血液進(jìn)行物質(zhì)交換。以下說法正確的是（）A.受體是為供體胚胎提供發(fā)育的條件B.受體與胚胎血型應(yīng)相同，否則會發(fā)生免疫排斥反應(yīng)C.受體與胚胎血液混融在一起D.胚胎心肺功能都能正常運(yùn)行A第61頁,共68頁，2024年2月25日，星期天4.利用胚胎干細(xì)胞治療肝衰竭，實(shí)現(xiàn)此過程的重要原因是（）

A.細(xì)胞分裂

B.細(xì)胞特化

C.細(xì)胞分化

D.細(xì)胞增殖C第62頁,共68頁，2024年2月25日，星期天10、（多選）克隆動物的方法有（）A.細(xì)胞核移植B.胚胎分割C.體外受精D.轉(zhuǎn)基因技術(shù)11、（多選）胚胎分割所需要的主要儀器設(shè)備為（）A.顯微操作儀B.電子顯微鏡C.電子切割儀D.實(shí)體顯微鏡12、（多選）下列各項(xiàng)中，屬于胚胎干細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用的有（）

A．為新藥的研究和開發(fā)提供材料

B．為細(xì)胞和組織移植提供無免疫原性的材料

C．有目的地促進(jìn)某種生物的進(jìn)化

D．改良并創(chuàng)造動物新品種ABADABD第63頁