細菌的分布與外界因素對細菌的影響

關(guān)于細菌的分布與外界因素對細菌的影響實驗內(nèi)容一、細菌的分布檢查1.空氣中細菌的檢查2.水中細菌的檢查3.皮膚消毒試驗4.飛沫中細菌的檢查二、外界因素對細菌的影響1.高壓蒸汽滅菌法2.紫外線殺菌試驗3.藥物敏感試驗第2頁,共28頁，2024年2月25日，星期天實驗?zāi)康?.掌握標準紙片擴散法（Ｋ－Ｂ）的原理、操作方法、結(jié)果的判讀及臨床意義．2.掌握皮膚消毒方法．3.熟悉人體咽喉部細菌檢查方法．4.熟悉高壓蒸汽滅菌法，紫外線滅菌方法．5.了解空氣、水中細菌的檢查方法．第3頁,共28頁，2024年2月25日，星期天一、細菌的分布檢查

了解微生物在自然界及正常人體的分布，對于在醫(yī)療實踐及某些科學(xué)實驗中樹立無菌觀念有著重要的意義。

第4頁,共28頁，2024年2月25日，星期天材料

普通瓊脂平板血瓊脂平板

MH瓊脂平板３７℃溫箱無菌棉簽等普通瓊脂平板血瓊脂平板第5頁,共28頁，2024年2月25日，星期天空氣中細菌的檢查（示教）

左邊培養(yǎng)皿菌落是未被過濾空氣中的細菌，右邊是經(jīng)過濾空氣中留有的少量細菌第6頁,共28頁，2024年2月25日，星期天水中細菌的檢查（示教）

取水樣1ml

注入無菌空平皿內(nèi)加15mL已融化并冷卻至約45℃的培養(yǎng)基混勻倒置于３７℃溫箱培養(yǎng)18-２４h后觀察結(jié)果第7頁,共28頁，2024年2月25日，星期天

1.分區(qū)標記

2.接種

3.培養(yǎng)皮膚細菌的檢查：空白對照消毒后消毒前常用的皮膚消毒劑第8頁,共28頁，2024年2月25日，星期天飛沫中細菌的檢查

用咳碟法將咽喉部細菌接種于血平板第9頁,共28頁，2024年2月25日，星期天二、外界因素對細菌的影響

當(dāng)外界環(huán)境條件發(fā)生巨大改變，可導(dǎo)致微生物的主要代謝活動發(fā)生障礙，生長停頓，甚至死亡。第10頁,共28頁，2024年2月25日，星期天消毒與滅菌

原理：微生物由蛋白質(zhì)、核酸、脂類等構(gòu)成，極易受外界條件的影響，對多種物理、化學(xué)因素都敏感。消毒與滅菌就是根據(jù)這一原理抑制或殺死外環(huán)境中的病原微生物。第11頁,共28頁，2024年2月25日，星期天1.高壓蒸汽滅菌法（示教）

原理：利用密閉的金屬鍋，密閉加熱使鍋內(nèi)蒸汽壓力增大，溫度隨之升高，殺菌力增強。第12頁,共28頁，2024年2月25日，星期天手提式高壓蒸汽滅菌器第13頁,共28頁，2024年2月25日，星期天高壓蒸汽滅菌器構(gòu)造：為一雙層的金屬圓筒，兩層之間盛水，外層堅厚，上方有金屬厚蓋。螺旋能緊閉蓋門，使蒸汽不能外溢，因而蒸汽壓力升高，其溫度亦相應(yīng)的增高。第14頁,共28頁，2024年2月25日，星期天1.加水至外筒內(nèi)，被滅菌物品放入內(nèi)筒。2.蓋上滅菌器蓋，擰緊螺旋使之密閉。3.加熱，同時打開排氣閥門，排凈其中冷空氣，關(guān)閉排氣閥。繼續(xù)加熱，待壓力表漸漸升至所需壓力時(103.4kPa,121.3℃)，保持壓力和溫度維持15～30min。4.待壓力自行降至零時，慢慢打開排氣閥，排除余氣，開蓋取物。使用方法第15頁,共28頁，2024年2月25日，星期天注意事項：1）冷空氣徹底排除；2）壓力降為“0”時方可打開。在使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸氣的膨脹壓，所以，當(dāng)水蒸氣中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸氣的溫度低于飽和蒸氣的溫度。滅菌鍋內(nèi)留有不同分量空氣時，壓力與溫度的關(guān)系見表第16頁,共28頁，2024年2月25日，星期天用途

凡耐高溫和潮濕的物品，如培養(yǎng)基、生理鹽水、衣服、紗布、棉花、敷料、玻璃器材、傳染性污物等都可應(yīng)用本法滅菌。第17頁,共28頁，2024年2月25日，星期天2.紫外線殺菌試驗

原理：通過紫外線的照射，破壞及改變微生物的DNA結(jié)構(gòu)，使細菌當(dāng)即死亡或不能繁殖后代，達到殺菌的目的。第18頁,共28頁，2024年2月25日，星期天波長200～300nm的紫外線具有殺菌作用，其中以265～266nm最強，這與DNA的吸收光譜范圍一致。紫外線主要作用于DNA，使一條DNA鏈上相鄰的二個胸腺嘧啶共價結(jié)合而形成雙聚體，因而改變DNA的分子構(gòu)型，干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細菌的死亡或變異。紫外線釋放的能量較低，故穿透力較弱，普通玻璃、紙張、塵埃、水蒸氣等均能阻擋紫外線，故只能用于手術(shù)室、傳染病房、細菌實驗室的空氣消毒，或用于不耐熱物品的表面消毒。殺菌波長的紫外線對人體皮膚、眼睛有損傷作用，使用時應(yīng)注意防護。紫外線殺菌試驗第19頁,共28頁，2024年2月25日，星期天

優(yōu)點

簡單便捷、廣譜高效、無二次污染、便于治理和實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。

缺點穿透能力弱特點第20頁,共28頁，2024年2月25日，星期天材料普通瓊脂平板18-24h細菌培養(yǎng)物紫外線燈等第21頁,共28頁，2024年2月25日，星期天方法

細菌接種于普通平板

皿蓋蓋住半邊做對照，置紫外燈下約30cm處，照射30分鐘。

培養(yǎng)第22頁,共28頁，2024年2月25日，星期天藥物敏感試驗

進行藥敏試驗的方法主要有紙片擴散法、稀釋法、抗生素濃度法、自動化儀器等。第23頁,共28頁，2024年2月25日，星期天標準紙片擴散法（Ｋ－Ｂ）原理：將含抗生素的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂上，藥物在瓊脂中擴散，在藥物濃度到達的范圍內(nèi)對此藥敏感的細菌不能生長而形成透明的抑菌圈。不同細菌形成的抑菌圈各不相同，抑菌圈的大小反映了測試菌對該藥的敏感程度，并與該藥物對測試菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負相關(guān)。第24頁,共28頁，2024年2月25日，星期天材料菌種：葡萄球菌、大腸桿菌菌液培養(yǎng)基：水解酪蛋白瓊脂（MH瓊脂）試劑：各種抗菌藥物紙片（PEN、GEN、STR、CHL)第25頁,共28頁，2024年2月25日，星期天方法

棉試蘸取試驗菌涂抹在MH培養(yǎng)基表面，均勻涂抹3次

以無菌鑷子取各抗生素紙片貼于表面

培養(yǎng)各紙片中心距>24mm,紙片距平板邊緣應(yīng)>15mmPENGENSTRCHL第26頁,共28頁，2024年2月2