2024年高考生物二輪復(fù)習 生物技術(shù)與工程

專題八生物技術(shù)與工程

A組基礎(chǔ)對點練

考點1發(fā)酵工程

1.（2023?河北滄州模擬）傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)是指直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用

前一次發(fā)酵保存下來的發(fā)酵物中的微生物進行發(fā)酵，制作食品的技術(shù)。通常是家庭式或

作坊式的，可以用于腐乳、醬、醬油、醋、泡菜和豆豉等的加工。下列有關(guān)敘述正確的

是（）

A.在制作酸奶過程中需先通氣培養(yǎng)，后密封發(fā)酵

B.傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)制作果酒、果醋和腐乳通常都不是純種發(fā)酵

C.在一段時間內(nèi)，果醋制作過程中發(fā)酵液pH逐漸降低，果酒制作過程中pH升高

D.泡菜壇內(nèi)有時會長一層白膜，這層白膜是產(chǎn)膜乳酸菌繁殖形成的

2.（2023?重慶模擬）人類很早就能制作果酒，并用果酒進一步發(fā)酵生產(chǎn)果醋,用果酒發(fā)酵生

產(chǎn)果醋時，果酒中的酒精含量對果醋的醋酸產(chǎn)率會產(chǎn)生一定的影響。某技術(shù)組配制發(fā)酵

液研究了初始酒精濃度對醋酸含量的影響，結(jié)果如圖，下列分析錯誤的是（）

(

一5

工

14

0

一

?

？lllllllll

0

345678910

初始酒精濃度設(shè)

A.果酒發(fā)酵生產(chǎn)果醋過程中，酒精為醋酸菌提供碳源

B.用果酒發(fā)酵果醋需要接種醋酸菌，并將發(fā)酵溫度升至30~35℃即可

C.據(jù)圖可知較高濃度的酒精會抑制醋酸菌的生長，使產(chǎn)酸量下降

D.醋酸發(fā)酵過程中會釋放少量能量

3.（2023?福建南平三模）聚乳酸（PLA）是以乳酸為主要原料的聚合物。與聚丙烯等材料相

比，具有更好的生物可降解性，但在自然條件下降解還是較緩慢。某科研機構(gòu)擬從黃粉蟲

腸道中篩選PLA降解菌，按照如圖流程進行培養(yǎng)鑒定。下列敘述錯誤的是（）

梯度挑選單

用PLA粉末制作成腸

60d稀移選擇菌落純化培養(yǎng)

為唯一食物道微生物

培養(yǎng)鑒定菌種

喂養(yǎng)黃粉蟲提取液

A.實驗過程中需要設(shè)置適宜的溫度和pH環(huán)境，并保證嚴格的無菌操作

B.PLA既可為PLA降解菌提供碳源，又對培養(yǎng)基中微生物起選擇作用

C.體外培養(yǎng)可采用平板劃線接種，同時將接種和未接種的平板倒置培養(yǎng)

D.純化培養(yǎng)后，可根據(jù)菌落形狀、大小、顏色及DNA檢測等進行菌種鑒定

4.（2023?福建漳州模擬）某學者用“影印培養(yǎng)法”研究大腸桿菌抗藥性形成與環(huán)境的關(guān)系：

將原始敏感菌種接種在1號培養(yǎng)基上，培養(yǎng)出菌落后,將滅菌絨布在1號上印模,絨布沾

上菌落并進行轉(zhuǎn)印，使絨布上的菌落按照原位接種到2號和3號培養(yǎng)基上。待3號上長

出菌落后，在2號上找到對應(yīng)的菌落，然后接種到不含鏈霉素的4號培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后再

接種到5號培養(yǎng)基上，重復(fù)以上步驟。實驗過程如圖所示。下列相關(guān)敘述錯誤的是

()

A.大腸桿菌抗鏈霉素的變異可能是由基因突變引起的

B.1號和5號采用稀釋涂布平板法將菌種接種在相應(yīng)的培養(yǎng)基上

C.4號、8號、12號培養(yǎng)基中抗性菌落（株）的比例最大的是4號

D.大腸桿菌抗藥性的形成是在施加鏈霉素之前，而發(fā)生選擇作用是在施加鏈霉素之后

考點2細胞工程和胚胎工程

5.（2023?河北張家口一模）種植型茄子是夏季主要蔬菜之一，容易受到線蟲侵染，產(chǎn)量降

低。野生型茄子具有抗線蟲特性。由于種植型茄子和野生型茄子很難采用雜交育種，某

科研小組采用植物體細胞雜交技術(shù)培育出了具有兩個品種優(yōu)良性狀的新品種。下列相

關(guān)敘述正確的是（）

A.利用胰蛋白酶或膠原蛋白酶去除細胞壁,獲得原生質(zhì)體

B.種植型茄子和野生型茄子的原生質(zhì)體融合可用PEG或滅活病毒等誘導(dǎo)

C.雜種細胞經(jīng)外源植物激素誘導(dǎo)脫分化后,可直接形成雜種植物

D.與種植型茄子的染色體組數(shù)目相比，該新品種的染色體組數(shù)目增加

6.（2023?浙江模擬）p-hcg（人絨毛膜促性腺激素）是由滋養(yǎng)層細胞分泌的一種糖蛋白。利

用細胞工程方法以0-hcg為抗原制備單克隆抗體。下列敘述錯誤的是（）

A.制備抗p-hcg單克隆抗體可以應(yīng)用于醫(yī)學診斷

B.聚乙二醇可以誘導(dǎo)B淋巴細胞和B淋巴細胞融合

C.小鼠注射B-hcg后，產(chǎn)生的血清抗體為單克隆抗體

D.制備抗p-hcg單克隆抗體,可以將雜交瘤細胞注射到動物體內(nèi)

7.（2023?遼寧模擬預(yù)測）為了高效分離高質(zhì)量的械柑原生質(zhì)體，科研人員米用組合酶液I

（2%纖維素酶R+2%離析酶）與組合酶液II（2%纖維素酶W+2%離析酶）進行梭柑原生質(zhì)

體的分離，實驗過程中加入適量的甘露醇,其結(jié)果如下圖，其中活性氧會影響原生質(zhì)體的

再生。下列相關(guān)敘述錯誤的是（）

50O(

7田

9?酶液組合I45O

??—?的液組合n40O玄

<2-35O箕

-30O)

、

S印

25O

v20O枇

15O尊

10O更

50ffi

0

產(chǎn)量活性氧含量

A.加入纖維素酶和離析酶是為了水解纖維素和果膠

B.兩實驗中酶的用量、溫度、pH、酶解時間必須相同

C.實驗中加入的甘露醇具有維持溶液滲透壓的作用

D.實驗結(jié)果表明使用組合酶液n獲取原生質(zhì)體的效果較好

考點3基因工程

8.（2023.湖北模擬）為了示蹤衰老細胞在機體中的分布，科研人員綜合利用基因工程和細

胞工程的技術(shù)手段,將綠色熒光蛋白基因珈插入了小鼠加6基因的下游，使兩個基因

“融合轉(zhuǎn)基因小鼠的衰老細胞中,p/6和協(xié)會特異性表達，從而使其在紫外光下呈綠

色。下列分析錯誤的是（）

A.可用PCR技術(shù)特異性地快速擴增綠色熒光蛋白基因gfp

B.轉(zhuǎn)基因小鼠的p/6基因和g加基因具有各自獨立的啟動子

C.常用顯微注射法將改造好的融合基因注入小鼠的受精卵中

D.可選擇發(fā)育到桑意胚期的轉(zhuǎn)基因小鼠胚胎移植到受體母鼠子宮內(nèi)

9.（2023.浙江紹興二模）埃博拉病毒是一種引起人類產(chǎn)生埃博拉出血熱的單鏈RNA病毒,

腺病毒是一類侵染動物細胞的DNA病毒，某研究團隊利用埃博拉病毒跨膜表面糖蛋白

（GP）,以人復(fù)制缺陷腺病毒為載體研發(fā)了埃博拉病毒疫苗。下圖為部分研制流程示意圖,

下列敘述正確的是（）

擴

大培

純

養(yǎng)

分離

含埃博拉病毒導(dǎo)

、

化

檢測

入含基因的

GP基因的質(zhì)粒宿主GP

復(fù)制缺陷重

細胞

含腺病毒基因組腺病毒

組的質(zhì)粒

A.埃博拉病毒中分離的GP基因經(jīng)限制酶切割后，通過DNA連接酶與質(zhì)粒相連接

B.病毒的擴大培養(yǎng)過程中需要使用C02培養(yǎng)箱調(diào)節(jié)pH

C.疫苗在人體內(nèi)發(fā)揮作用的過程中，腺病毒不斷增殖

D.在重組腺病毒中,GP基因上游必須有啟動子以驅(qū)動其復(fù)制和表達

10.（2023?天津南開二模）PCR技術(shù)可用于遺傳多樣性的研究。下圖是對兩個跳蟲（A和

B）DNA分析的實驗過程，有關(guān)敘述錯誤的是（）

A.蛋白酶可以分解組織中的蛋白質(zhì),在提取DNA時加入蛋白酶有助于釋放出DNA

B.hq酶能夠耐高溫，高溫下不會變性，常在PCR中用于DNA鏈的合成

C.將已知長度的DNA片段裝到凝膠上作參照，可用于估測樣本DNA片段的大小

D.陰性對照是已知DNA模板及PCR擴增過程所需的物質(zhì)，以監(jiān)測試劑是否污染

11.（2023?安徽蚌埠模擬）最早被發(fā)現(xiàn)的熒光蛋白是綠色熒光蛋白，科學家通過一定的技術(shù)

手段獲得了黃色熒光蛋白。下列有關(guān)研究思路不正確的是（）

A.需要設(shè)計發(fā)出黃色熒光的蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)

B.需要推測出發(fā)出黃色熒光蛋白的氨基酸序列

C.需要根據(jù)其氨基酸序列合成出相應(yīng)的mRNA

D.需要根據(jù)推測的氨基酸序列合成相應(yīng)的DNA

B組能力提升練

1.（2023?河北唐山三模改編）結(jié)核分枝桿菌可以引起結(jié)核病，主要感染肺部,其細胞壁厚、

脂質(zhì)含量高，能抵御不利自然環(huán)境。為探究不同抗生素對結(jié)核分枝桿菌的抑菌效果，將患

者體內(nèi)的病原菌進行分離培養(yǎng),實驗結(jié)果如圖所示。培養(yǎng)基成分主要含有天冬氨酸、甘

油、雞蛋黃、KH2Po4、MgSCU等。下列分析不正確的是（）

浸抗生素A浸抗生素B

的灌紙片的濾紙片

浸某種液體D

:抗生索A和_：

的濾紙片的濾紙片

結(jié)核分枝桿菌

A.結(jié)核分枝桿菌會引起人體發(fā)生體液免疫和細胞免疫

B.此培養(yǎng)基成分中提供氮源的是天冬氨酸

C.接種過程所用實驗器材有酒精燈、涂布器、微量移液器

D.圖中D為含有無菌水的濾紙片作為對照

2.（2023?廣東汕頭金山中學模擬）科學家在研究基因定位時，將人的不能利用次黃口票吟的

突變細胞株（HGPRT-）和小鼠不能利用胸腺脫氧核甘的突變細胞株（TK）進行融合，然后

利用選擇培養(yǎng)基進行篩選，得到3株能在選擇培養(yǎng)基上增殖的穩(wěn)定的細胞株（如下表）。

據(jù)此分析下列說法錯誤的是（）

細胞株編號123

所含人染

11,14,17,227,11,14,175,7,17,21

色體編號

A.可用PEG誘導(dǎo)人和小鼠細胞融合

B.在選擇培養(yǎng)基上增殖的細胞株1中最多有4條人的染色體

C.該選擇培養(yǎng)基中應(yīng)該添加次黃喋吟和胸腺脫氧核甘

D.由表中信息可推測人的TK基因可能位于17號染色體上

3.（2023?湖南模擬改編）研究人員欲采用“異源囊胚補全法”將人源iPS細胞培育出的腎元

祖細胞導(dǎo)入囊胚，然后移植到去除生腎區(qū)既存的腎元祖細胞的仔豬體內(nèi)，培育出100%人

源iPS細胞來源的腎單位并實際應(yīng)用于移植醫(yī)療（如下圖所示）。下列說法不正確的是

)

熒光蛋白基

因標記的人異源囊胚補全

iPS誘導(dǎo)的腎：??熒光標記的腎臟

元祖細胞?

.期端

代孕母豬

基因的豬

受精卵

A.培育人源腎元祖細胞需向iPS細胞培養(yǎng)液中加入定向誘導(dǎo)分化劑

B.過程②需要將熒光蛋白標記的人源腎元祖細胞植入囊胚的內(nèi)細胞團

C.過程③操作之前不需要對代孕母豬進行超數(shù)排卵和同期發(fā)情處理

D.該技術(shù)培育的人源腎臟需要考慮腎移植個體之間的遺傳差異

4.（2023?山東臨沂二模改編）轉(zhuǎn)基因植物中標記基因的剔除可有效防止基因污染,剔除常

用分離剔除法和重組剔除法。分離剔除法是在轉(zhuǎn)基因時將目的基因和標記基因分別構(gòu)

建在兩個Ti質(zhì)粒上，通過共轉(zhuǎn)化得到轉(zhuǎn)基因植物后讓其自交得到不含標記基因的轉(zhuǎn)基因

個體;重組剔除法利用Cre/LoxP重組酶系統(tǒng),Cre酶能有效剔除重組載體中含有標記基因

的序列，只留下一個LoxP位點，具體原理如下圖。

下列說法不正確的是（）

A.利用分離剔除法時，目的基因和標記基因都應(yīng)插到Ti質(zhì)粒的T-DNA序列內(nèi)部

B.分離剔除時目的基因和標記基因插到植物細胞的同源染色體或非同源染色體上均可

成功

C.上述重組載體中啟動子1在農(nóng)桿菌中可發(fā)揮作用，而在植物細胞中不能發(fā)揮作用

D.經(jīng)重組剔除后的標記基因，因沒有啟動子而無法啟動基因的轉(zhuǎn)錄

5.(2023?湖南二模)癌癥的免疫療法通過重新激活抗腫瘤的免疫細胞，克服腫瘤的免疫逃

逸，在癌癥治療方法中取得越來越突出的地位,科研人員在不斷研究中發(fā)現(xiàn)多種免疫治療

方法的結(jié)合是提高治療效果的途徑之一。

(1)癌細胞由于___________基因突變導(dǎo)致其表面物質(zhì)發(fā)生改變，如某些種類癌細胞表面

高表達膜蛋白PSMA和PD-L1,如圖1PD-L1能抑制T細胞的活化，使癌細胞發(fā)生免疫

逃逸。臨床上可利用PD-1的單克隆抗體進行癌癥治療，據(jù)圖1推測，其原因是PD-1的單

克隆抗體與結(jié)合，阻斷了的結(jié)合，避免抑制T細胞活化。

(2)CD28是T細胞表面受體,T細胞的有效激活依賴于CD28在癌細胞與T細胞結(jié)合部

位的聚集。因此,科研人員嘗試構(gòu)建既能結(jié)合PSMA還能結(jié)合CD28的雙特異性抗體

PSMAXCD28,誘導(dǎo)T細胞定向殺傷癌細胞，如圖2。

PD-L1癌細胞,

圖1

圖2

制備過程:先將分別注射到小鼠體內(nèi)，分離出B淋巴細胞，誘導(dǎo)其與小鼠的

細胞融合，篩選得到兩種雜交瘤細胞，再誘導(dǎo)兩種細胞融合。成功融合的細胞會表達兩種

L鏈和兩種H鏈，由于而產(chǎn)生多種抗體，因此還需進行篩選才能獲

得所需的雙特異性抗體PSMAXCD28。

(3)科研人員將癌細胞和T細胞共同培養(yǎng)，加入不同抗體，比較不同抗體對T細胞活化的

作用。實驗各組由活化T細胞產(chǎn)生的細胞因子IL-2含量如圖3所示，其結(jié)果說

明(言之有理即可)。

71500

1000-OPSMAXCD28+PD-1單抗

0△PD-1單抗+無關(guān)抗體

500。PSMAxCD28+無關(guān)抗體

。無關(guān)抗體+無關(guān)抗體

0

-11-10-9-8-7-6

抗體濃度log/M]

6.(2023.湖南岳陽模擬)為研究干旱脅迫基因LE4和VOC對甘藍型油菜油脂的積累機制,

科研人員構(gòu)建了兩個基因表達載體。其中基因LE4與熒光素酶基因(L“c)構(gòu)建成基因表

達載體甲，基因VOC和標記基因構(gòu)建成基因表達載體乙，相關(guān)序列及酶切位點如圖所

示。箭頭表示轉(zhuǎn)錄方向。

部分載體結(jié)構(gòu)：

多酶切位點

吟〉^基

BamHI終止子

LE4基因序列：

5'ATGGGC........CACTAG3'

3'TACCCGyGTGATC5Z

多前切位點：

5'GA^---VCTAG^--GGATCC3'

ECORVXba\BamHI

(1)利用PCR擴增LEA基因時，需要在引物的(填“3端”或“5,端”)添加限制酶識

別序列，添加序列對應(yīng)的限制酶是，選擇上述酶的依據(jù)是。

(2)為了構(gòu)建基因表達載體甲，依據(jù)圖中己知堿基序列，在PCR擴增儀中加入的引物的堿

基序列為。

(3)乙酰-CoA竣化酶基因(AC)是油脂合成過程的關(guān)鍵酶基因，甘油三酯酯酶基因(ATGL)

是油脂分解過程的關(guān)鍵酶基因。將基因表達載體甲、乙分別導(dǎo)入植物細胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基

因植物A、B,在干旱脅迫的環(huán)境下培養(yǎng)兩種轉(zhuǎn)基因植物和正常植物，分別檢測植物體內(nèi)

AC和ATGL基因的表達水平,結(jié)果如下圖。

正常植株轉(zhuǎn)基因A植株轉(zhuǎn)基因B植株

AC酶■■■

ATGL酶■—一

①在分子水平上，用方法檢測AC酶和ATGL酶的含量可得到上述結(jié)果。

②基于以上研究,干旱脅迫基因LEA和VOC在甘藍型油菜油脂積累中的機制

是

C組專項命題培優(yōu)練

1」單克隆抗體的應(yīng)用］(2023?河南三模)雙特異性抗體可同時與癌細胞和免疫細胞特異性

結(jié)合，它一端與癌細胞結(jié)合,一端與T細胞結(jié)合，將T細胞拉近癌細胞，大大提高了殺滅癌

細胞的效率。CD19是癌細胞表面的抗原蛋白,CD3蛋白受體位于T細胞表面，與抗體結(jié)

合后，其免疫功能得到激活。下圖是研究人員通過雜交瘤細胞技術(shù)生產(chǎn)雙特異性單克隆

抗體的部分過程?；卮鹣铝袉栴}。

骨髓瘤細胞

g由1包-單克隆雜交瘤細胞

罡口/HAT培養(yǎng)基□

細胞y和篩選」＞3無前

注射CD19蛋白...￡造⑤［篩選

注射抗原A目

抗原CD19抗原A恤

提

仔懿

w特

單r

雙特異抗

性抗體

⑴給小鼠注射CD19蛋白，是為了從小鼠的脾臟中分離得到；注射的抗原A是

指O

(2)過程②和④所用誘導(dǎo)方法與誘導(dǎo)植物細胞融合所用方法的不同之處是o過

程③培養(yǎng)雜交瘤細胞時需提供的氣體條件是95%空氣和5%CO2的混合氣體，其中C02

的主要作用是.o過程⑤篩選獲得的細胞具有的特點

是__________

(3)與從血清中提取的CD19抗體、抗A抗原的抗體相比，通過雙雜交瘤細胞得到雙特異

性單克隆抗體的優(yōu)點是.o雙特異性單克隆抗體

治療癌癥的效果往往優(yōu)于抗體CD19和A抗體的聯(lián)合使用,原因是o

2」PCR技術(shù)及其應(yīng)用］(2023?山東煙臺一模)IKK激酶由IKKa、IKKp和IKKy三種亞基

組成，該酶參與動物體內(nèi)免疫細胞的分化。臨床上發(fā)現(xiàn)某重癥聯(lián)合免疫缺陷(SCID)患兒

的IKK。基因編碼區(qū)第1183位堿基T突變?yōu)镃。為研究該患兒發(fā)病機制，研究人員應(yīng)

用大引物PCR定點誘變技術(shù)獲得突變基因，并培育出SCID模型小鼠。圖1為定點誘變

獲得突變基因的過程。

PCR,

PCR2

注：定點誘變獲得突變基因的過程，需要以下3種引物:

引物A：5,-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3'

飛突變堿基

引物B：5z-TAAGCTTCGAACATCCTA-3,

、HindHI識別序列

引物C：5'-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3,

、SacI識別序列

圖1

胸腺淋巴細胞中IKK激

酶的三種亞基含量

圖2

(1)在定點誘變獲取突變基因時,PCRi中使用的引物有,PCR2中使用的引物

有oPCRi和PCR2不能在同一個反應(yīng)體系中進行,原因是。

(2)PCR在第一個循環(huán)之前通常將DNA樣品加熱至95℃數(shù)分鐘進行預(yù)變性處理，其目

的是。由于大引物較長，含C與G的

堿基較多，為減少非目標基因的獲得，在PCR2復(fù)性過程中應(yīng)采取的措施

是。

⑶培育模型鼠的過程中，需用限制酶SacI、“加dill對突變基因和載體進行雙酶切，雙酶

切的優(yōu)點是。研究人員經(jīng)鑒定、篩選獲

得一只轉(zhuǎn)基因雜合鼠HE,讓HE與野生鼠雜交得Fi,Fi雌雄鼠隨機交配得F2O對F2中純

合野生鼠WT、純合突變鼠HO、雜合鼠HE三種小鼠胸腺淋巴細胞中組成IKK激酶的

三種亞基進行提純和電泳，結(jié)果如圖2O據(jù)此結(jié)果推測SCID患者免疫缺陷產(chǎn)生的機制

是0

3.［基因編輯技術(shù)及其應(yīng)用］（2023?天津紅橋二模）CRISPR/Cas9系統(tǒng)可對基因組進行定點

編輯，其工作原理如圖1所示。該系統(tǒng)主要包含單鏈向?qū)NA和Cas9酶兩個部分，能特

異性識別并結(jié)合特定的DNA序歹!］,從而引導(dǎo)Cas9酶到相應(yīng)位置并剪切DNA,最終實現(xiàn)

對靶基因序列的編輯。請回答下列問題。

Cas9-sgRNA拼接基因

圖2

拼接基因插入位置

5Z--CCGTGT-..-X-ATGCCTS^-GGGATC--3'

千-…GGCACA…■…TACGGA…-木廣…CCCTAG…-5；

II

插入部分兩端拼接基因

r-l5z—?GATCCC--3,

3種引物J115,-…AGGCAT…-3，

…CCGTGT…-3'

圖3

（1）圖1為CRISPR/Cas9系統(tǒng)作用示意圖，該系統(tǒng)能精準識別相關(guān)基因的原理是sgRNA

與目標DNA發(fā)生,Cas9酶可催化（化學鍵名稱）水解,剪切特

定DNA片段。

（2）LMNA基因編碼的核纖層蛋白與維持細胞核正常形態(tài)有關(guān)?？蒲腥藛T利用

CRISPR/Cas9技術(shù)對體外培養(yǎng)HepG2（人源肺癌細胞）細胞株進行基因編輯，獲得了

LMNA基因敲除的穩(wěn)定細胞系。

①體外培養(yǎng)HepG2時需要一定比例的02和CO2,其中CO?的主要作用是:

培養(yǎng)基除滅菌外還需要通過來保證無菌無毒環(huán)境。

②HepG2細胞中沒有編碼Cas9的基因，需將Cas9基因及sgRNA基因拼接形成拼接基

因并與質(zhì)粒結(jié)合導(dǎo)入HepG2細胞，用圖2中的質(zhì)粒以及含Cas9-sgRNA拼接基因的

DNA片段構(gòu)建表達載體時，應(yīng)選用進行酶切。

③將構(gòu)建好的表達載體與用處理的細菌置于適宜反應(yīng)體系中培養(yǎng)。然后將培

養(yǎng)的細菌涂布于含的平板培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng),24h后挑取菌落,提取質(zhì)粒作為

模板,選擇圖3中引物組合和，通過PCR和電泳技術(shù)鑒定是否重組成

功。

④用鑒定成功的工程菌對HepG2細胞進行轉(zhuǎn)染，培養(yǎng)三天后收集HepG2細胞，提取基因

組，對其序列進行檢測，判斷Cas9-sgRNA拼接基因是否導(dǎo)入成功。若從細胞水

平進行檢測，可以檢測HepG2細胞數(shù)目增長量或o

答案：

【A組基礎(chǔ)對點練】

1.B解析乳酸菌是厭氧微生物，不能通入空氣,A項錯誤;家庭制作果酒、果醋和腐乳利

用的都是自然界的菌種，通常都不是純種發(fā)酵,B項正確;果醋制作利用的是醋酸菌，醋酸

菌能夠產(chǎn)生醋酸，使溶液的pH逐漸降低，果酒制作過程中，酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生二氧化碳

與酒精，二氧化碳溶于水形成碳酸，隨著二氧化碳濃度的增加，溶液的pH逐漸降低，因此

果酒、果醋制作過程中溶液的pH都是逐漸降低,C項錯誤;泡菜壇內(nèi)有時會長一層白膜，

這層白膜是由于產(chǎn)膜酵母的繁殖形成的,D項錯誤。

2.B解析微生物生長需要營養(yǎng)物質(zhì)(氮,源、碳源、水、無機鹽等),果酒發(fā)酵生產(chǎn)果醋過

程中，酒精作為碳源,A項正確;醋酸菌是好氧菌，酒變醋的過程中除了接種醋酸菌、提高

發(fā)酵溫度外，還應(yīng)通入氧氣,B項錯誤;據(jù)圖可知，初始酒精濃度為6%時,醋酸含量最高，是

發(fā)酵的最適濃度，酒精濃度為10%時醋酸含量最低，則較高濃度的酒精會抑制醋酸菌的生

長，使產(chǎn)酸量下降,C項正確;醋酸發(fā)酵過程中會釋放少量能量，大部分能量儲存在醋酸

中,D項正確。

3.C解析微生物培養(yǎng)需要有一定的營養(yǎng)、適宜的溫度和pH等條件，故實驗過程中需

要設(shè)置適宜的溫度和pH環(huán)境，并保證嚴格的無菌操作,A項正確;聚乳酸(PLA)是以乳酸

為主要原料的聚合物，故可為PLA降解菌提供碳源，不能利用PLA的微生物無法在該培

養(yǎng)基上生存，故PLA又對培養(yǎng)基中微生物起選擇作用,B項正確;根據(jù)圖示可知，體外培養(yǎng)

可采用稀釋涂布平板法進行接種，同時將接種和未接種的平板倒置培養(yǎng),C項錯誤;菌落

形狀、大小、顏色及DNA檢測等是進行菌種鑒定的重要依據(jù)，故純化培養(yǎng)后，可根據(jù)菌

落形狀、大小、顏色及DNA檢測等進行菌種鑒定,D項正確。

4.C解析大腸桿菌是原核生物，大腸桿菌抗鏈霉素的性狀可能是由基因突變引起的,A

項正確;由圖可知」號和5號采用稀釋涂布平板法將菌種接種在相應(yīng)選擇培養(yǎng)基上,B項

正確;4號、8號、12號培養(yǎng)基中，大腸桿菌抗鏈霉素菌株的比例逐漸增大，因此抗性菌落

（株）的比例最大的是12號,C項錯誤;微生物的抗藥性突變是自發(fā)產(chǎn)生的,環(huán)境只能對抗

藥性突變進行選擇,因此大腸桿菌抗藥性的形成是在施加鏈霉素之前，而發(fā)生選擇作用是

在施加鏈霉素之后,D項正確。

5.D解析在進行體細胞雜交之前,必須先利用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁，獲得具有

活力的原生質(zhì)體,A項錯誤;進行原生質(zhì)體間的融合，人工誘導(dǎo)的方法分為物理法和化學

法,滅活的病毒適用于動物細胞融合,B項錯誤;雜種細胞經(jīng)植物組織培養(yǎng)（即脫分化和再

分化）獲得雜種植物,C項錯誤;新品種是通過植物體細胞雜交技術(shù)培育而成，因此，與種植

型茄子的染色體組數(shù)目相比，該新品種的染色體組數(shù)目增加,D項正確。

6.C解析制備抗p-hcg單克隆抗體可以應(yīng)用于醫(yī)學診斷，廣泛運用于早孕的診斷，快速

方便,A項正確;聚乙二醇誘導(dǎo)B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合的同時，也可以誘導(dǎo)B淋巴

細胞與B淋巴細胞融合,B項正確;單克隆抗體是指由單個B淋巴細胞進行無性繁殖形

成的細胞系所產(chǎn)生出的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體,C項錯誤;制備抗p-hcg單克隆

抗體，可以將雜交瘤細胞注射到動物體內(nèi)，屬于體內(nèi)培養(yǎng)，成本低,D項正確。

7.B解析酶具有專一性，加入纖維素酶和離析酶是為了水解纖維素和果膠，進而獲得原

生質(zhì)體,A項正確;兩實驗中酶的種類不同，為保證單一變量，應(yīng)控制好無關(guān)變量，即應(yīng)在各

自酶的最適溫度和pH下進行實驗,酶的用量和時間必須相同,B項錯誤;實驗中加入的甘

露醇具有維持溶液滲透壓的作用，保證細胞具有正常形態(tài)，行使正常功能,C項正確;實驗

結(jié)果表明使用組合酶液II獲取原生質(zhì)體的產(chǎn)量高，活性氧含量差別不大,故效果較好,D

項正確。

8.B解析綠色熒光蛋白基因照為DNA片段，可用PCR技術(shù)特異性地快速擴增,A項

正確;將綠色熒光蛋白基因照插入了小鼠p/6基因的下游，使兩個基因“融合”，因此pl6

基因和蚓基因共用了一個啟動子,它們之間關(guān)聯(lián)表達,B項錯誤;將目的基因?qū)雱游锛?/p>

胞最有效的方法是顯微注射法,C項正確;胚胎移植時，應(yīng)選擇處于桑甚胚或囊胚期的胚

胎,D項正確。

9.B解析埃博拉病毒是RNA病毒,GP基因的本質(zhì)是RNA,而質(zhì)粒的本質(zhì)是DNA,故

GP基因不能被限制酶切割,A項錯誤;培養(yǎng)過程中C02的作用是調(diào)節(jié)pH,B項正確;腺病

毒為復(fù)制缺陷腺病毒，故疫苗在人體內(nèi)發(fā)揮作用的過程中，腺病毒不會增殖,C項錯誤;啟

動子是轉(zhuǎn)錄的起點，故在重組腺病毒中,GP基因上游必須有啟動子以驅(qū)動轉(zhuǎn)錄,D項錯

7夫o

10.D解析跳蟲細胞中大量DNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成染色體，所以在提取DNA時加入蛋白

酶有助于釋放出DNA,A項正確;hq酶是具有熱穩(wěn)定性的DNA聚合酶，耐高溫,可以催

化DNA鏈的合成,B項正確;雙鏈DNA分子通過凝膠的速率與其分子量的常用對數(shù)成

反比。據(jù)此用已知分子量的標準物質(zhì)和待測分子量的DNA片段同時電泳，比較其電泳

速率，即可求出待測片段的分子大小,C項正確;陰性對照是在PCR試劑中不加模板DNA

或RNA,進行PCR擴增，以監(jiān)測試劑是否污染,D項錯誤。

11.C解析對綠色熒光蛋白進行改造獲得黃色熒光蛋白的過程需要利用蛋白質(zhì)工程，蛋

白質(zhì)工程首先要從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，設(shè)計黃色熒光蛋白的三維結(jié)構(gòu),A項正確;根

據(jù)中心法則逆推以確定目的基因的堿基序列，預(yù)期蛋白質(zhì)功能一設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)

一推測應(yīng)有氨基酸序列一找到對應(yīng)的脫氧核普酸序列（基因），故設(shè)計得到黃色熒光蛋白

的三維結(jié)構(gòu)之后,進一步推測其應(yīng)有的氨基酸序列,B項正確;推測出黃色熒光蛋白應(yīng)有

的氨基酸序列之后，應(yīng)對綠色熒光蛋白的脫氧核普酸序列進行改造或合成相應(yīng)的

DNA（基因），不需要合成相應(yīng)的mRNA,C項錯誤,D項正確。

【B組能力提升練】

1.B解析結(jié)核分枝桿菌主要感染肺部，屬于寄生細菌，會引起體液免疫和細胞免疫,A項

正確;培養(yǎng)基中的天冬氨酸和雞蛋黃都含有N,故此培養(yǎng)基成分中提供氮源的是天冬氨酸

和雞蛋黃,B項錯誤;結(jié)合圖示，本探究實驗采用的是稀釋涂布平板法,故接種過程所用實

驗器材有酒精燈、涂布器、微量移液器,C項正確;實驗中圓紙片D（不含有抗生素）用作

實驗對照，為了保證單一變量，對圓紙片D的處理方法是浸過無菌水,D項正確。

2.B解析誘導(dǎo)動物細胞融合的方法有物理法、化學法（PEG,又稱聚乙二醇）、滅活的病

毒誘導(dǎo),A項正確;在選擇培養(yǎng)基上增殖的細胞株1中,如果細胞處于有絲分裂后期,則一

個細胞中含有8條人的染色體,B項錯誤;結(jié)合題干“將人的不能利用次黃噤吟的突變細

胞株（HGPRT）和小鼠不能利用胸腺脫氧核苛的突變細胞株（TK）進行融合，然后利用選

擇培養(yǎng)基進行篩選，得到3株能在選擇培養(yǎng)基上增殖的穩(wěn)定的細胞株”可知，該選擇培養(yǎng)

基上應(yīng)添加次黃喋吟和胸腺脫氧核甘以篩選出成功融合的細胞,C項正確;分析表格數(shù)據(jù)

可知,細胞株1、2、3均含有人的17號染色體，結(jié)合題干“和小鼠不能利用胸腺脫氧核普

的突變細胞株（TK?）進行融合”可推測人的TK基因可能位于17號染色體上,D項正確。

3.C解析培育人源腎元祖細胞需向iPS細胞培養(yǎng)液中加入定向誘導(dǎo)分化劑從而獲得腎

元祖細胞,A項正確;過程②需要將熒光蛋白標記的人源腎元祖細胞植入囊胚的內(nèi)細胞

團，從而保證人源腎細胞的正常發(fā)育，因為內(nèi)細胞團會發(fā)育成完整胚胎,B項正確;過程③

操作之前需對代孕母豬進行同期發(fā)情處理，但不需要進行超數(shù)排卵處理，因為不需要代孕

母豬提供卵母細胞,C項錯誤;該技術(shù)培育的人源腎臟依然需要考慮腎移植個體之間的遺

傳差異，因為該方法獲得的腎臟在不同個體中的排斥反應(yīng)可能不同,D項錯誤正確。

4.C解析Ti質(zhì)粒的T-DNA序列可轉(zhuǎn)移至受體細胞,并且轉(zhuǎn)移到受體細胞染色體DNA

上，所以利用分離剔除法時,目的基因和標記基因都應(yīng)插到Ti質(zhì)粒的T-DNA序列內(nèi)部，

進而成功整合到受體細胞染色體上,A項正確;分離剔除時目的基因和標記基因插到植物

細胞的同源染色體（這種情況下，目的基因和標記基因需要分別位于一條染色體上）或非

同源染色體上均可最終獲得不含標記基因的轉(zhuǎn)基因個體，即均可成功,B項正確;啟動子1

具有物種特異性，故上述重組載體中啟動子1在農(nóng)桿菌中不能發(fā)揮作用，而在植物細胞中

能發(fā)揮作用,C項錯誤;由圖可知，經(jīng)重組剔除后的標記基因沒有啟動子，而啟動子的作用

是驅(qū)動轉(zhuǎn)錄，故經(jīng)重組剔除后的標記基因無法啟動基因的轉(zhuǎn)錄,D項正確。

5.答案（1）原癌基因和抑癌PD-1PD-1和PD-L1

（2）PSMA、CD28骨髓瘤L鏈和H鏈的隨機組合

（3）PSMAxCD28和PD-1單抗聯(lián)合使用能夠顯著激活T細胞，且隨PSMAxCD28濃度增

加激活作用增強;單獨使用PSMAXCD28或PD-1單抗，都不能顯著激活T細胞

解析（1）癌細胞是由于原癌基因和抑癌基因發(fā)生突變導(dǎo)致遺傳物質(zhì)改變。圖1中癌細胞

表面的PD-L1和T細胞表面的PD-1結(jié)合，抑制T細胞的活化。PD-1的單克隆抗體與

PD-1特異性結(jié)合,阻斷了PD-L1和PD-1的結(jié)合，避免抑制T細胞活化。⑵制備雙特異

性抗體PSMAXCD28,則抗原是PSMA和CD28,將兩種物質(zhì)分別注射到小鼠體內(nèi)，刺激B

細胞增殖分化出相應(yīng)的漿細胞片等兩類漿細胞分別和小鼠的骨髓瘤細胞融合，形成雜交瘤

細胞，再誘導(dǎo)雜交瘤細胞融合。成功融合的細胞會表達兩種L鏈和兩種H鏈，所需的雙

特異性抗體PSMAXCD28是特定的L鏈和H鏈結(jié)合，由于L鏈和H鏈的隨機組合，需要

進行篩選。（3）自變量是抗體種類，其中PSMAXCD28和PD-1單抗聯(lián)合使用能夠顯著激

活T細胞，且隨PSMAXCD28濃度增加激活作用增強;單獨使用PSMAxCD28或PD-1單

抗，都不能顯著激活T細胞。

6.答案（1）5,端EcoRV和XbaILuc中存在BamHI識別序列,&I會將切

斷;一種酶切會導(dǎo)致載體、L而自身環(huán)化及LEA反向連接

（2）5'-GATATCATGGGC-3'和5'-TCTAGACTAGTG-3'

（3）①抗原一抗體雜交②在干旱脅迫的環(huán)境下,LEA通過促進AC的表達使植物油脂增

加;VOC通過抑制ATGL的表達減弱油脂的降低

解析（1）耐高溫的DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA,而只能從引物的3'端延伸DNA

鏈，因此PCR擴增需要引物。引物與目的基因所在DNA分子遵循堿基互補配對原則，所

以擴增LEA基因時，需要在引物的5'端添加限制酶的識別序列。由于中存在BamH

I識別序列,Ba〃汨I會將L“c切斷;一種酶切會導(dǎo)致載體、LEA自身環(huán)化及LEA反向連

接等,因此選擇的限制酶是EcoRV和XmIo（2）根據(jù)已知序列，由于引物只能引導(dǎo)子鏈

從5'—3'延伸，根據(jù)堿基互補配對原則,用PCR擴增時的兩個引物對應(yīng)的序列為:5'-

GATATCATGGGC-3'和5'-TCTAGACTAGTG-3'o（3）①檢測酶：（蛋白質(zhì)）分子水平上采用

抗原—抗體雜交技術(shù)進行檢測。②根據(jù)檢測結(jié)果，轉(zhuǎn)基因A植株的AC酶變高了,轉(zhuǎn)基因

B植株的ATGL酶變低了，可以推測在干旱脅迫的環(huán)境下,LEA通過促進AC的表達使植

物油脂增加;VOC通過抑制ATGL的表達減弱油脂的降低。

【C組專項命題培優(yōu)練】

1.答案⑴免疫的B淋巴細胞CD3蛋白

（2）滅活的病毒維持培養(yǎng)液的pH既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體

（3）雙特異性單克隆抗體可以識別兩種抗原既不損傷正常細胞，又減少了用藥劑量

解析（1）給小鼠注射CD19蛋白，是為了從小鼠的脾臟中獲得已免疫的B淋巴細胞，該細

胞能夠產(chǎn)生特定抗體。分析題意，本過程的目的是得到雙特異性抗體，故為保證最終雙特

異性抗體的產(chǎn)生，注射的抗原A應(yīng)是CD3蛋白。（2）過程②和④是誘導(dǎo)動物細胞融合，該

過程所用誘導(dǎo)方法與誘導(dǎo)植物細胞融合所用方法的不同之處是用滅活的病毒誘導(dǎo);過程

③培養(yǎng)雜交瘤細胞時需提供的氣體條件是95%空氣和5%CO2的混合氣體，其中C02的

主要作用是維持培養(yǎng)液的pH;過程⑤是融合細胞的篩選，篩選后得到的雜交瘤細胞，特點

是既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體。（3）與從血清中提取的CD19抗體、抗A抗原的

抗體相比，通過雙雜交瘤細胞得到雙特異性單克隆抗體的優(yōu)點是能同時識別CD19和A

兩種抗原，作用效果更顯著。雙特異性單克隆抗體治療癌癥的效果往往優(yōu)于抗體CD19

和A抗體的聯(lián)合使用，原因是該特異性抗體可以借助單克隆抗體的識別作用，將藥物帶

到癌細胞位置,既不損傷正常細胞,又減少了用藥劑量。

2.答案（1）引物A、弓|物C弓I物B、大引物b引物之間能結(jié)合,會干擾引物和模板鏈

的結(jié)合，影響PCR過程

（2）增加大分子模板DNA徹底變性的概率適當提高復(fù)性溫度

（3）防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及反向連接/K跖基因突變導(dǎo)致IKKp含量減

少,IKK激酶活力降低，不利于免疫細胞的分化

解析⑴在PCR反應(yīng)體系中，除需要加入引物和IKK/3基因，還需要加入Tag酶（耐高溫

DNA聚合酶）、4種脫氧核苛酸（原料）、緩沖液（維持pH）、Mg2+（激活DNA聚合酶）等；

在圖1獲取突變基因過程中，分析題圖可知，在PCRi中,需要兩種引物，將來在