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文檔簡介

崗位演練凝膠層析分離蛋白質(zhì)混合物1任務(wù)八細(xì)胞色素C的凝膠層析查閱資料；檢索蛋白質(zhì)的分子量；理解凝膠層析法分離的原理查閱設(shè)計(jì)《凝膠層析分離蛋白質(zhì)混合物操作記錄》在任務(wù)實(shí)施過程中同步、如實(shí)填寫。分離血紅蛋白與魚精蛋白混合物，獲得血紅蛋白溶液和魚精蛋白溶液。設(shè)計(jì)目標(biāo)設(shè)計(jì)（一）任務(wù)描述2（二）實(shí)訓(xùn)材料1.材料、試劑血紅蛋白和魚精蛋白混合物2.儀器設(shè)備鐵架臺(tái)、層析柱、膠管、交聯(lián)葡聚糖凝膠G-50、恒流泵。3（三）實(shí)訓(xùn)操作4凝膠預(yù)處理裝置組裝裝柱灌膠加樣洗脫凝膠回收保溫3h后，冷卻至室溫，抽真空30min排出氣泡。待凝膠沉降后，用傾瀉法除去不沉降的微粒。凝膠的預(yù)處理除泡和雜質(zhì)自行溶脹：取SephadexG-50干凝膠30g，加蒸餾水800mL浸泡。加熱至100℃，保溫3h。凝膠溶脹5（三）實(shí)訓(xùn)操作裝柱將層析柱垂直固定于鐵架上，端柱頭為適配器加蒸餾水至柱高度的一半。攪拌條件下，緩慢且均勻加入全部凝膠。膠床頂加滿水，裝入并擰緊適配器，制備凝膠床打開出水口，用洗脫液洗滌凝膠床，用量微2倍柱床體積。恒流泵流速為2mL/min。平衡6（三）實(shí)訓(xùn)操作7

加樣濾膜過濾蛋白質(zhì)混合物溶液以1mL/min泵入柱中洗脫泵入洗脫液（1mL/min）收集洗脫液，直至紅色消失，合并洗脫液即為細(xì)胞色素C原液凝膠回收將洗凈的凝膠回收，以便再次利用。注意：規(guī)范填寫《細(xì)胞色素C的凝膠層析操作記錄》，不可補(bǔ)填和篡改?。ㄈ?shí)訓(xùn)操作（四）任務(wù)分析與總結(jié)（1）根據(jù)血紅蛋白和黃色的魚精蛋白移動(dòng)情況，參照兩者分子量大小，總結(jié)說明一下凝膠層析法物質(zhì)分離的原理及分子量與移動(dòng)速度的關(guān)系。（2）本任務(wù)的凝膠層析是用于分組分離還是分級分離？請根據(jù)分離目的為該凝膠層析操作選取適當(dāng)體積和徑高比的層析柱（答案不唯一）。（3）凝膠層析法中全排阻分子、全滲透分子、部分滲透的較大分子和部分滲透的較小分子，從層析柱中流出的先后順序是（

）。A.全排阻分子、部分滲透的較大分子、部分滲透的較小分子、全滲透分子B.全排阻分子、部分滲透的較大分子、全滲透分子、部分滲透的較小分子C.全滲透分子、部分滲透的較小分子、部分滲透的較大分子、全排阻分子D.全滲透分子、部分滲透的較大分子、部分滲透的較小分子、

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