梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷

關(guān)于梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷梅毒是一種幾乎可以侵犯全身所有器官，而產(chǎn)生多種癥狀和體征的慢性傳染性疾病。十六世紀(jì)初由歐洲傳入亞洲，后蔓延我國。梅毒又稱為楊梅瘡、廣東瘡、疳瘡、下疳、霉瘡等。第2頁,共35頁，2024年2月25日，星期天《本草綱目》：“楊梅瘡，古方不載，亦有無病者；近時起于嶺南，傳及四方?！钡谝徊空撌雒范咀钔晟频膶Ｖ骸睹汞徝劁洝访鞔愅晌覈夥藕螅旧舷麥缌舜瞬?，但近年來又有新的病例發(fā)現(xiàn)第3頁,共35頁，2024年2月25日，星期天病原體為梅毒螺旋體，屬于密螺旋體屬，蒼白密螺旋體蒼白亞種(Treponemapallidumsubspeciespallidum)

蒼白亞種梅毒蒼白螺旋體地方亞種地方性梅毒極細(xì)亞種雅司病密螺旋體屬

品他螺旋體品他病第4頁,共35頁，2024年2月25日，星期天梅毒螺旋體的生物學(xué)特性1、直徑0.10~0.15μm，有8~14個致密而規(guī)則的小螺旋，兩端尖直。2、原生質(zhì)圓柱體上緊繞著3~4根周漿鞭毛，故運(yùn)動活躍，運(yùn)動方式多樣。3、G-，但不易著色。Fontana鍍銀染色呈棕褐色。4、在無活細(xì)胞的人工培養(yǎng)基中難培養(yǎng)，生長慢。第5頁,共35頁，2024年2月25日，星期天5、抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感；對青霉素、四環(huán)素、紅霉素等抗生素敏感。梅毒螺旋體第6頁,共35頁，2024年2月25日，星期天梅毒的傳播途徑1、直接性接觸2、血液傳播：輸血3、垂直傳播：胎盤傳播。4、間接傳播：日常用品、接吻、哺乳、醫(yī)療器械等途徑。第7頁,共35頁，2024年2月25日，星期天梅毒的分期第8頁,共35頁，2024年2月25日，星期天梅毒螺旋體皮膚或粘膜局部繁殖淋巴管附近淋巴結(jié)局部無任何癥狀14～40天(潛伏期平均3周)入侵部位炎癥反應(yīng)初瘡（硬下疳）一期梅毒不治療4～8周自然消失一期潛伏梅毒Ⅰ期（初期）梅毒：第9頁,共35頁，2024年2月25日，星期天Ⅰ期（初期）梅毒：Ⅰ期梅毒（包皮硬下疳）Ⅰ期梅毒（巨大下疳）部位：絕大部份在外生殖器。形態(tài)：園形或橢園形，直徑約1～2cm，邊界清楚，周圍稍隆起，內(nèi)含大量梅毒螺旋體，傳染性極強(qiáng)。特點(diǎn):常單個；觸診有軟骨樣感；無痛可自愈。第10頁,共35頁，2024年2月25日，星期天梅毒螺旋體血液人體免疫作用大部分螺旋體被殺死其余的螺旋體繁殖低熱、淺表淋巴結(jié)腫大皮膚粘膜疹骨骼、眼晴、神經(jīng)系統(tǒng)等的炎癥癥狀不治療癥狀可自然消失，呈現(xiàn)潛伏狀態(tài)二期潛伏梅毒二期梅毒Ⅱ期（中期）梅毒第11頁,共35頁，2024年2月25日，星期天Ⅱ期（中期）梅毒發(fā)生于硬下疳出現(xiàn)后2~8周。皮疹泛發(fā)對稱，一般無自覺癥狀梅毒疹和淋巴結(jié)中，存在大量梅毒螺旋體。Ⅱ期梅毒（玫瑰疹）Ⅱ期梅毒（梅毒疹）第12頁,共35頁，2024年2月25日，星期天二期復(fù)發(fā)梅毒可反復(fù)出現(xiàn)2年后晚期梅毒侵犯皮膚粘膜骨骼心血管系統(tǒng)神經(jīng)系統(tǒng)Ⅲ期（晚期）梅毒：第13頁,共35頁，2024年2月25日，星期天Ⅲ期（晚期）梅毒：基本損害為慢性肉芽腫病損內(nèi)螺旋體少但破壞性大Ⅲ期梅毒（樹膠腫）Ⅲ期梅毒（潰瘍壞死）第14頁,共35頁，2024年2月25日，星期天梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢測方法顯微鏡檢測法：

（1）暗視野顯微鏡檢查（2）鍍銀染色檢查血清學(xué)檢測法：

非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)

（1）VDRL(性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn))：需滅活（2）USR（不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)）（3）RPR(加速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn))

（4）TRUST(甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn))

梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（1）FTA-ABS

（2）TPPA/TPHA

（3）TP-ELISA

（4）發(fā)光法（5）膠體金法

第15頁,共35頁，2024年2月25日，星期天暗視野顯微鏡檢查標(biāo)本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損的滲出液、淋巴結(jié)穿刺液方法：暗視野顯微鏡下查找梅毒螺旋體。結(jié)果：典型的梅毒螺旋體呈白色發(fā)光,其螺旋較密而均勻。運(yùn)動方式：①伸縮其螺旋間距離而移動（主要方式）②蛇行式③旋轉(zhuǎn)式評價：①.簡單、可靠。②.早期：硬下疳（梅毒血清學(xué)試驗(yàn)仍陰性）。③.陰性不能排出患梅毒的可能性

第16頁,共35頁，2024年2月25日，星期天暗視野顯微鏡下的梅毒螺旋體螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最好方法，WHO指定其為性病實(shí)驗(yàn)室必備項(xiàng)目之一第17頁,共35頁，2024年2月25日，星期天鍍銀染色檢查基本原理：梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體結(jié)果：棕褐色的梅毒螺旋體第18頁,共35頁，2024年2月25日，星期天血清學(xué)檢測法梅毒螺旋體侵入人體后產(chǎn)生：抗心磷脂抗體：即非特異性抗體、反應(yīng)素。兩種抗體抗梅毒螺旋體抗體：第19頁,共35頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)TRUST（甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)）基本原理：在心磷脂、卵磷脂和膽固醇等組成的抗原中加入甲苯胺紅，與待檢血清中的反應(yīng)素結(jié)合，形成肉眼可見的紅色絮狀物。第20頁,共35頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)定性試驗(yàn)

(1)加樣：吸取50微升血清（漿）放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈中。

(2)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原。

(3)反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘[(100±5)轉(zhuǎn)/分鐘]，立即在亮光下觀察結(jié)果第21頁,共35頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)

定量試驗(yàn)（1）稀釋液準(zhǔn)備：在圈內(nèi)加入50微升生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。（2）加樣：吸取50微升血清與各圈中生理鹽水做系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。（3）同定性試驗(yàn)中的(2)、(3)。第22頁,共35頁，2024年2月25日，星期天非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)?zāi)磻?yīng)強(qiáng)度分級：3+～4+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中到大的紅色絮狀物，液體清亮。2+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到大的紅色絮狀物，液體較清亮。1+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的紅色絮狀物，液體渾濁?！簣A圈內(nèi)僅見紅色集中于中央一點(diǎn)或均勻分散。第23頁,共35頁，2024年2月25日，星期天

孔號12345678

稀釋倍數(shù)

原倍1:21:41:81:161:32陽性K

陰性K生理鹽水(ul)-50.050.050.050.050.0--樣品(ul)50.0

50.050.050.050.050.0棄50.0-

-陽性血清(ul)------50.0-陰性血清(ul)-------50.0抗原懸液(ul)505050505050

操作步驟第24頁,共35頁，2024年2月25日，星期天VDRLUSRRPRTRUST抗原成分心磷脂、卵磷脂、膽固醇同前+EDTA+氯化膽堿同前+EDTA+氯化膽堿+活性炭同前+EDTA+氯化膽堿+甲苯胺紅抗原穩(wěn)定性不穩(wěn)定,1天穩(wěn)定4℃～8℃保存12個月穩(wěn)定4℃～8℃保存12個月穩(wěn)定4℃～8℃保存12個月血清試驗(yàn)前處理需滅活不需滅活不需滅活不需滅活反應(yīng)板及結(jié)果判斷玻片，肉眼或顯微鏡玻片，肉眼或顯微鏡紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼注釋唯一用于檢查腦脊液的試驗(yàn)，診斷神經(jīng)梅毒結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷一期敏感性（未經(jīng)治療）74%-87%77%-88%77%-99%77%-99%二期敏感性（未經(jīng)治療）100%100%100%100%晚期敏感性（未經(jīng)治療）98%99%98%99%四種非特異性試驗(yàn)方法比較第25頁,共35頁，2024年2月25日，星期天TPHA基本原理：用超聲裂解梅毒螺旋體制備抗原，致敏雞紅細(xì)胞，其致敏細(xì)胞與待檢血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的凝集。第26頁,共35頁，2024年2月25日，星期天操作步驟1.試劑準(zhǔn)備：試驗(yàn)前將試劑和待檢標(biāo)本恢復(fù)到室溫。

2.加稀釋液：每份樣本做4孔，加標(biāo)本稀釋液加至微量反應(yīng)板孔內(nèi)，第1孔100微升，第2～4孔各25微升。

3.樣本稀釋：取血清25微升加至第1孔，混勻后取25微升至第2孔，混勻后取25微升至第3孔，混勻后取25微升至第4孔，混勻后棄去25微升。

4.加對照液：第3孔加未致敏顆粒25微升，第4孔加致敏顆粒25微升。

5.混合：將反應(yīng)板置振蕩器振蕩30秒。

6.反應(yīng)：置有蓋濕盒，孵育2h，或放4℃冰箱過夜觀察結(jié)果。

第27頁,共35頁，2024年2月25日，星期天結(jié)果判斷1.觀察加未致敏顆粒的第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗(yàn)。

2.觀察凝集反應(yīng)強(qiáng)度：分級如下。

4+：顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊。

3+：顆粒光滑覆蓋大部分孔底。

2+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán)。

1+：

顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán)。

±：顆粒沉集孔底，中央形成一小點(diǎn)。

一：顆粒緊密沉積孔底中央。第28頁,共35頁，2024年2月25日，星期天TPHA第29頁,共35頁，2024年2月25日，星期天梅毒血清試驗(yàn)影響因素：

非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)

梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實(shí)驗(yàn)

感染因素 細(xì)菌性心內(nèi)膜炎 傳染性單核細(xì)胞增多癥 軟下疳 麻風(fēng) 病毒性肝炎 瘧疾 傳染性單核細(xì)胞增多癥 萊姆病 結(jié)核、麻風(fēng)、麻疹、瘧疾、水痘 支原體或肺炎雙球菌肺炎

非感染因素 妊娠結(jié)締組織病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡 使用毒品 甲狀腺炎 惡性腫瘤 結(jié)締組織病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡 多發(fā)性骨髓瘤 慢性肝臟損害 第30頁,共35頁，2024年2月25日，星期天各種試驗(yàn)的敏感性和特異性

敏感性（%）特異性（%）

一期二期隱性晚期TRUST86100987398TPHA76100979499TP-Ab841001009697第31頁,共35頁，2024年2月25日，星期天結(jié)果判讀TRUSTTPHATP-Ab臨床意義

———初期梅毒早期或排出

+++現(xiàn)癥梅毒

+——生物學(xué)假陽性

+—+現(xiàn)癥梅毒

—++梅毒經(jīng)治療后

——+梅毒經(jīng)治療后第32頁,共35頁，2024年2月25日，星期天梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測的特