紫外可見(jiàn)分析法

關(guān)于紫外可見(jiàn)分析法2概述紫外-可見(jiàn)分光光度法：根據(jù)物質(zhì)分子對(duì)200-800nm波長(zhǎng)范圍的光選擇性吸收的特性，建立起來(lái)的定性、定量分析方法。分子吸收紫外可見(jiàn)光發(fā)生電子能級(jí)躍遷；產(chǎn)生紫外可見(jiàn)吸收光譜分子結(jié)構(gòu)中有產(chǎn)生紫外可見(jiàn)吸收的能級(jí)躍遷類(lèi)型-分子才能吸收紫外可見(jiàn)光。特點(diǎn)：靈敏度可達(dá)10-4-10-6g/ml準(zhǔn)確度0.2%-0.5%可用于結(jié)構(gòu)鑒定、定性和定量分析第2頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天3

紫外可見(jiàn)光譜是由分子中價(jià)電子在不同的分子軌道之間躍遷產(chǎn)生的。

一、電子躍遷類(lèi)型第一節(jié)基本原理和概念飽和單鍵的

電子不飽和雙鍵的

電子未成鍵的n電子（弧對(duì)電子）軌道：電子圍繞原子或分子運(yùn)動(dòng)的幾率軌道不同，電子所具有能量不同第3頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天4反鍵軌道成鍵軌道原子軌道線性組合成分子軌道第4頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天5躍遷類(lèi)型：分子軌道：第5頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天6

（1）σ→σ*躍遷飽和烴（甲烷，乙烷）

ε很高，λ<150nm（遠(yuǎn)紫外區(qū)）（2）

→*躍遷處于

成鍵軌道上的電子躍遷到*反鍵軌道，不飽和有機(jī)化合物-C=C-,ε很大（＞104）為強(qiáng)吸收。共軛體系λmax↑（3）n→*躍遷

孤對(duì)n電子躍遷到*反鍵軌道,C＝O；C＝N；—N＝N—,ε較?。?0-100），吸收波長(zhǎng)200~400nm

（4）n→

*躍遷孤對(duì)n電子躍遷到

*反鍵軌道，含雜原子的飽和有機(jī)化合物第6頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天7λmax<150nm200nm180-200nm200-400nmε摩爾吸收系數(shù)很高較大

>104

10_100按能量大?。害摇?>n→σ*>π→π*>n→π*

→

*n→

*

→*n→

*CH3—CH3—NH2—OHC=CC=OC=SN=N△E躍遷類(lèi)型實(shí)例C=O第7頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天8（5）電荷遷移躍遷電磁輻射照射時(shí)，電子在分子內(nèi)從給予體向接受體相聯(lián)系的軌道上躍遷。特點(diǎn)：摩爾吸光系數(shù)較大。εmax>104,定量分析的檢測(cè)靈敏度比較高（6）配位場(chǎng)躍遷發(fā)生在過(guò)渡元素的配位化合物中。能量相等的d軌道或f軌道分裂成能量不等的軌道特點(diǎn)：摩爾吸光系數(shù)較小。εmax<102第8頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天91.吸收光譜（吸收曲線）：不同波長(zhǎng)光對(duì)樣品作用不同，吸收強(qiáng)度不同以吸光度A為縱坐標(biāo)，波長(zhǎng)λ為橫坐標(biāo)作圖所得到的曲線2.吸收光譜特征—定性依據(jù)

吸收峰→λmax

吸收谷→λmin

肩峰→λsh

末端吸收→飽和σ-σ*躍遷產(chǎn)生強(qiáng)吸收不成峰二、相關(guān)的基本概念第9頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天103.生色團(tuán)（發(fā)色團(tuán)）:能吸收紫外-可見(jiàn)光的基團(tuán)有機(jī)化合物：具有不飽和鍵和未成對(duì)電子的基團(tuán)具n電子和π電子的基團(tuán)產(chǎn)生n→π*躍遷和π→π*躍遷例：

C＝C；C＝O；C＝N；—N＝N—注：當(dāng)出現(xiàn)幾個(gè)發(fā)色團(tuán)共軛，則幾個(gè)發(fā)色團(tuán)所產(chǎn)生的吸收帶將消失，代之出現(xiàn)新的共軛吸收帶，其波長(zhǎng)將比單個(gè)發(fā)色團(tuán)的吸收波長(zhǎng)長(zhǎng)，強(qiáng)度也增強(qiáng)二、相關(guān)的基本概念第10頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天114．助色團(tuán)：本身無(wú)紫外吸收，但可以使生色團(tuán)吸收峰加強(qiáng)同時(shí)使吸收峰長(zhǎng)移的基團(tuán)連有雜原子的飽和基團(tuán)例：—OH，—OR，—NH—，—NR2，—X5．紅移和藍(lán)移：由于化合物結(jié)構(gòu)變化（共軛、引入助色團(tuán)取代基）或采用不同溶劑后

吸收峰位置向長(zhǎng)波方向的移動(dòng)，叫紅移（長(zhǎng)移）

吸收峰位置向短波方向移動(dòng)，叫藍(lán)移（紫移，短移）二、相關(guān)的基本概念第11頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天126.增色效應(yīng)和減色效應(yīng)增色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度增強(qiáng)的效應(yīng)

減色效應(yīng)：吸收強(qiáng)度減小的效應(yīng)

7.強(qiáng)帶和弱帶：

εmax>104→強(qiáng)帶

εmax<102→弱帶二、相關(guān)的基本概念第12頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天13

吸收帶：吸收峰在紫外-可見(jiàn)光譜中的位置

可分為：R帶、K帶、B帶、E帶、電荷轉(zhuǎn)移吸收帶、

配位體場(chǎng)吸收帶1．R帶：由n→π*躍遷產(chǎn)生含雜原子的不飽和基團(tuán):C＝O；C＝N；—N＝N—

E小，εmax<100;λmax250~400nm，溶劑極性增強(qiáng)，短移2．K帶：由共軛雙鍵的π→π*躍遷產(chǎn)生

(—CH＝CH—)n，—CH＝C—CO—

λmax>200nm;εmax>104共軛體系增長(zhǎng)，λmax↑→紅移，εmax↑溶劑極性↑，λmax↑

→紅移（長(zhǎng)移）三、吸收帶與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系第13頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天143．B帶：芳香族化合物的主要特征吸收帶

苯λmax

～256nm，寬帶，具有精細(xì)結(jié)構(gòu)；εmax=200極性溶劑中，或苯環(huán)連有取代基，其精細(xì)結(jié)構(gòu)消失三、吸收帶與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系第14頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天154．E帶：

芳香族化合物的特征吸收帶

E1180nmεmax>104

（常觀察不到）E2200nmεmax=7000

強(qiáng)吸收苯環(huán)被發(fā)色團(tuán)取代且與苯環(huán)共軛時(shí)，E2帶與K帶合并一起紅移（長(zhǎng)移），被助色團(tuán)取代E2帶λmax

和ε都變大三、吸收帶與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系第15頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天161.位阻影響共軛效應(yīng)，吸收帶長(zhǎng)移，吸光系數(shù)增加發(fā)色團(tuán)在同一平面，易形成共軛位阻影響分子的平面性

λmax280nm(10500)λmax295.5nm(29000)順式二苯乙烯反式二苯乙烯四、影響吸收帶位置的因素第16頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天172.跨環(huán)效應(yīng)有β、γ不飽和醛酮結(jié)構(gòu)，適當(dāng)?shù)牧Ⅲw排列使R帶長(zhǎng)移，吸收強(qiáng)度增強(qiáng)

四、影響吸收帶位置的因素第17頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天183.溶劑效應(yīng)（1）對(duì)λmax影響：

n-π*躍遷：溶劑極性↑，λmax↓藍(lán)移

π-π*躍遷：溶劑極性↑，λmax↑紅移

四、影響吸收帶位置的因素（2）對(duì)吸收光譜精細(xì)結(jié)構(gòu)影響

溶劑極性↑，苯環(huán)精細(xì)結(jié)構(gòu)消失第18頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天194.pH值的影響影響物質(zhì)存在型體，影響吸收波長(zhǎng)λmax210.5nm,270nmλmax235nm,287nmOH-H+-四、影響吸收帶位置的因素：第19頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天20描述物質(zhì)對(duì)單色光吸收強(qiáng)弱與液層厚度和待測(cè)物濃度的關(guān)系五、朗伯-比爾定律1、Lambert定律：A∝l（吸收層厚度）2、Beer定律：A∝C（吸收物質(zhì)濃度）二者的結(jié)合稱(chēng)為朗伯—比耳定律，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：

A：吸光度E：吸光系數(shù)C：溶液濃度l：光路長(zhǎng)度第20頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天211、適用條件：

1.單色光2.稀溶液（10-2～10-5M）2、吸收度的加和性：a、b、c三種物質(zhì)共存時(shí)3、該定律適用于固體、液體和氣體樣品公式討論：第21頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天224、吸光系數(shù)（E）：吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時(shí)的

吸光度。根據(jù)濃度單位的不同，分為：（1）摩爾吸光系數(shù)ε在一定λ下，c=1mol/L，l=1cm時(shí)的吸光度（2）百分吸光系數(shù)在一定λ下，c=1g/100ml，l=1cm時(shí)的吸光度。（3）兩者關(guān)系公式討論：第22頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天23吸光系數(shù)的討論1、吸光系數(shù)不隨濃度和光程長(zhǎng)度的改變而改變，

僅與物質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)，與待測(cè)物濃度無(wú)關(guān)；2、（1）不同物質(zhì)，對(duì)同一λ，ε一般不同；（ε↑，吸光能力↑）（2）同一物質(zhì)，對(duì)不同λ，ε一般不同（εmax）第23頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天24例：氯霉素（323.15），λmax=278nm，C=2.00mg/100mlT%=24.3%求：,ε第24頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天25六、偏離Beer定律的因素第25頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天26（一）化學(xué)因素Lambert-Beer定律適用范圍：稀溶液（＜10-2mol/L）當(dāng)溶液中濃度改變時(shí)，溶液可能產(chǎn)生離解，締合與溶劑間的作用等而產(chǎn)生偏離。a.6.36×10-6mol/Lb.1.27×10-4mol/Lc.5.79×10-4mol/L亞甲藍(lán)陽(yáng)離子水溶液的吸收光譜六、偏離Beer定律的因素例：亞甲藍(lán)陽(yáng)離子水溶液?jiǎn)误w吸收峰在660nm，二聚體吸收峰在610nm。隨濃度增大660nm吸收峰減弱，610nm處吸收峰增強(qiáng)，從而使吸收度與濃度關(guān)系發(fā)生偏離。第26頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天27（二）光學(xué)因素a.非單色光

理論要求：平行單色光，實(shí)際：光源復(fù)合光

六、偏離Beer定律的因素照射物質(zhì)的光經(jīng)單色器分光后并非真正單色光其波長(zhǎng)寬度由入射狹縫的寬度和棱鏡或光柵的分辨率決定為了保證透過(guò)光對(duì)檢測(cè)器的響應(yīng)，必須保證一定的狹縫寬度這就使分離出來(lái)的光具一定的譜帶寬度第27頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天28b.雜散光的影響：

雜散光是指從單色器分出的光不在入射光譜帶寬度范圍內(nèi)，與所選波長(zhǎng)相距較遠(yuǎn)雜散光來(lái)源：儀器本身缺陷；光學(xué)元件污染造成雜散光可使吸收光譜變形，吸光度變值c.反射光和散射光的影響：

反射光和散射光均是入射光譜帶寬度內(nèi)的光可使透射光減弱，A↑，一般可用空白對(duì)比校正消除d．非平行光的影響：使光程↑，l↑，A↑六、偏離Beer定律的因素第28頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天29（三）透光率的測(cè)量誤差——ΔT

影響測(cè)定結(jié)果的相對(duì)誤差兩個(gè)因素：T和ΔT

六、偏離Beer定律的因素第29頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天30ΔT影響因素：

1）暗噪音：與檢測(cè)器和放大電路等各部件的不確切性有關(guān)，與光訊號(hào)無(wú)關(guān)，可視為一個(gè)常量。其在A為0.2～0.7范圍內(nèi)，造成相對(duì)誤差較小，為測(cè)量最適宜范圍。

0.4343第30頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天31

訊號(hào)噪音亦稱(chēng)訊號(hào)散粒噪音。光敏元件受光照射時(shí)的電子遷移，每一單位時(shí)間中電子遷移數(shù)量是不相等的，而是在某一均值周?chē)碾S機(jī)數(shù)，形成測(cè)量光強(qiáng)時(shí)的不確定性。隨機(jī)數(shù)變動(dòng)的幅度隨光照增強(qiáng)而增大，與光的波長(zhǎng)及光敏元件的品質(zhì)有關(guān)。2）訊號(hào)噪音：與光訊號(hào)有關(guān)第31頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天32

第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)第32頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天33第33頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天34一、基本組成光源單色器樣品室檢測(cè)器顯示1.光源

鎢燈或鹵鎢燈——可見(jiàn)光源350~1000nm氫燈或氘燈——紫外光源200~400nm2．單色器：包括狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件第34頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天35

棱鏡——對(duì)不同波長(zhǎng)的光折射率不同色散元件分出光波長(zhǎng)不等距光柵——衍射和干涉分出光波長(zhǎng)等距第35頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天363．吸收池：玻璃——能吸收UV光，僅適用于可見(jiàn)光區(qū)石英——不吸收紫外光，適用于紫外和可見(jiàn)光區(qū)要求：匹配性（對(duì)光的吸收和反射應(yīng)一致）4．檢測(cè)器：將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)的裝置5．記錄裝置：訊號(hào)處理和顯示系統(tǒng)光電池光電管光電倍增管二極管陣列檢測(cè)器第36頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天37二、分光光度計(jì)的類(lèi)型1．單光束分光光度計(jì)：特點(diǎn)：使用時(shí)來(lái)回拉動(dòng)吸收池→移動(dòng)誤差對(duì)光源要求高比色池配對(duì)(一)幾種光路類(lèi)型第37頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天382．雙光束分光光度計(jì)：

特點(diǎn)：不用拉動(dòng)吸收池，可以減小移動(dòng)誤差對(duì)光源要求不高可以自動(dòng)掃描吸收光譜第38頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天393．雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)特點(diǎn)：利用吸光度差值定量消除干擾和吸收池不匹配引起的誤差第39頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天404．光多道二極管陣列檢測(cè)分光光度計(jì)第40頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天41第41頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天42(二)光學(xué)性能1.波長(zhǎng)范圍：190-1100nm2.波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：儀器顯示波長(zhǎng)與實(shí)際波長(zhǎng)之差≤±0.3nm3.波長(zhǎng)重現(xiàn)性：≤±0.2nm4.透光率范圍：0-300%5.吸光度測(cè)量范圍：-0.447～+3.006.光度準(zhǔn)確度：≤±0.3%7.光度重復(fù)性：≤±0.3%8.分辨率：?jiǎn)紊鞣直鎯蓷l靠近的譜線的能力.260nm，△λ=0.3nm9.雜散光：220nm處（1%NaI）≤0.1%第42頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天43(三)儀器的校正1.波長(zhǎng)的校正氫燈或氘中的較強(qiáng)譜線486.13nm(F線)和656.28nm（C線）稀土玻璃（鐠釹、鈥）、某些元素（汞、鉀、銫）苯蒸汽檢查和校正波長(zhǎng)讀數(shù)。第43頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天442.吸光度的校正60mg重鉻酸鉀用0.005mol/L的硫酸溶液稀釋至1000ml，在規(guī)定波長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算吸收系數(shù)，與規(guī)定值比較。規(guī)定值：235nm123.0～126.0257nm142.8～146.2313nm47.0～50.3350nm105.5～108.53.吸收池校正

兩吸收池測(cè)定的差值小于1%第44頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天45一、定性分析二、定量分析定性鑒別純度檢查和雜質(zhì)限量測(cè)定單組分的定量方法多組分的定量方法第三節(jié)紫外－可見(jiàn)分光光度分析方法三、結(jié)構(gòu)分析第45頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天46一、定性分析（一）定性鑒別定性鑒別的依據(jù)→吸收光譜的特征吸收光譜的形狀吸收峰的數(shù)目吸收峰的位置（波長(zhǎng)）吸收峰的強(qiáng)度相應(yīng)的吸光系數(shù)結(jié)構(gòu)完全相同的化合物應(yīng)有完全相同的吸收光譜但吸收光譜相同的化合物卻不一定結(jié)構(gòu)相同第46頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天471.對(duì)比吸收光譜的特征值一、定性分析第47頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天482.對(duì)比吸光度或吸光系數(shù)的比值：例：一、定性分析第48頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天493.對(duì)比吸收光譜的一致性同一測(cè)定條件下,與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物譜圖或標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行對(duì)照比較一、定性分析第49頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天50（二）純度檢查和雜質(zhì)限量測(cè)定1．純度檢查（雜質(zhì)檢查）1）主成分無(wú)吸收，雜質(zhì)有吸收直接考察雜質(zhì)

例如：測(cè)乙醇中是否含有少量苯。苯在256nm處有吸收峰，乙醇沒(méi)有2）主成分強(qiáng)吸收，雜質(zhì)無(wú)吸收/弱吸收與純品比較，E↓3）雜質(zhì)強(qiáng)吸收>>主成分吸收→與純品比較

E↑，光譜變形一、定性分析第50頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天512．雜質(zhì)限量的檢測(cè)：例：腎上腺素中微量雜質(zhì)——腎上腺酮含量計(jì)算制成2mg/ml的HCl溶液，λ＝310nm下測(cè)定規(guī)定A310≤0.05.求雜質(zhì)限量？腎上腺酮值為435一、定性分析第51頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天52（一）單組分的定量方法

1．吸光系數(shù)法

2．標(biāo)準(zhǔn)曲線法

3．對(duì)照法：外標(biāo)一點(diǎn)法注意:1）選擇吸收光譜中的吸收峰對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)

2）多個(gè)吸收峰，選擇無(wú)干擾的、較高的峰

3）測(cè)定波長(zhǎng)大于溶劑的截止波長(zhǎng)二、定量分析第52頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天531．吸光系數(shù)法（絕對(duì)法）例：維生素B12

的水溶液在361nm處的百分吸光系數(shù)為207，用1cm比色池測(cè)得某維生素B12溶液的吸光度是0.414，求該溶液的濃度?解：二、定量分析第53頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天例：精密稱(chēng)取B12樣品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm處測(cè)定吸光度為0.507，求B12的百分含量？

已知361nm處的百分吸光系數(shù)為207解：第54頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天552．標(biāo)準(zhǔn)曲線法配制一系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定波長(zhǎng)下分別測(cè)定吸光度A。以A為縱坐標(biāo)，濃度c為橫坐標(biāo)，繪制A-c標(biāo)準(zhǔn)曲線。完全相同的條件下，測(cè)定被測(cè)溶液的吸光度，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出對(duì)應(yīng)的被測(cè)溶液濃度或含量。BlankStandardSampleSample二、定量分析第55頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天56示例

蘆丁含量測(cè)定0.710mg/25mL第56頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天573．對(duì)照法

相同條件下配制樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，在同一波長(zhǎng)處測(cè)二者吸光度例：精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀釋至10.00mL；另配制對(duì)照液，精密稱(chēng)定對(duì)照品25.00mg，加水稀釋至1000mL。在361nm處，用1cm吸收池，分別測(cè)定吸光度為0.508和0.518，求B12注射液注射液的濃度？二、定量分析第57頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天58注：當(dāng)樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的稀釋倍數(shù)相同時(shí)第58頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天59

（二）多組分的定量方法三種情況：

1．兩組分吸收光譜不重疊（互不干擾）

2．兩組分吸收光譜部分重疊

3.兩組分吸收光譜完全重疊二、定量分析第59頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天601．兩組分吸收光譜不重疊（互不干擾）兩組分在各自λmax下測(cè)定→分別按單組分定量二、定量分析第60頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天612．兩組分吸收光譜部分重疊

λ1→測(cè)A1→b組分不干擾→可按單組分定量測(cè)caλ2→測(cè)A2→a組分干擾→不能按單組分定量測(cè)cb

定量Ca定量Cb二、定量分析第61頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天623．兩組分吸收光譜完全重疊——混合樣品測(cè)定

（1）解線性方程組法二、定量分析第62頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天63（2）等吸收雙波長(zhǎng)法測(cè)定a，消除b的影響步驟：1.選擇λ1和λ2

對(duì)于干擾組分b，λ1和λ2是等吸收波長(zhǎng)；對(duì)于a，兩波長(zhǎng)的吸光度之差足夠大；3．兩組分吸收光譜完全重疊——混合樣品測(cè)定二、定量分析第63頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天64步驟2.a的對(duì)照品溶液在λ1和λ2處測(cè)定吸光度，得二、定量分析b的對(duì)照品溶液在λ1和λ2處測(cè)定吸光度，得樣品溶液在λ1和λ2處測(cè)定吸光度，得E1a和E2a第64頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天65二、定量分析第65頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天66同理消除a的影響，測(cè)b二、定量分析第66頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天67（一）有機(jī)物的紫外吸收光譜從紫外吸收光譜推斷：

a.分子骨架

b.發(fā)色團(tuán)之間的共軛關(guān)系

c.取代基的種類(lèi)、位置和數(shù)目1.飽和碳?xì)浠衔镘S遷類(lèi)型：σ→σ*,需很大能量

吸收峰位置：遠(yuǎn)紫外區(qū)，200～400nm無(wú)吸收

三、結(jié)構(gòu)分析第67頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天682.含孤立助色團(tuán)和生色團(tuán)的有機(jī)化合物

1）含有孤立助色團(tuán)電子類(lèi)型：σ和n電子躍遷類(lèi)型：n→σ*

2）含有孤立生色團(tuán)電子類(lèi)型：σπ和n電子躍遷類(lèi)型：n→σ*(190nm)

π→π*（150-180nm）

n→π*(275-295nm)3.共軛烯烴兩個(gè)雙鍵只隔一個(gè)單鍵成共軛大π鍵躍遷類(lèi)型及吸收峰位置：

π→π*較孤立雙鍵能級(jí)差減少，吸收長(zhǎng)移三、結(jié)構(gòu)分析第68頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天694.αβ-不飽和醛、酮、酸、酯

1）分子特點(diǎn)：C=O與C=C共軛

2）躍遷類(lèi)型及吸收峰位置：

π→π*200～260nmε約10000n→π*310～350nmε<1003）一般溶劑極性增加使π→π*吸收紅移（長(zhǎng)移）使n→π*吸收藍(lán)移（短移）

三、結(jié)構(gòu)分析第69頁(yè),共77頁(yè)，2024年2月25日，星期天705.芳香族化合物

（1）苯和取代苯分子特點(diǎn)：環(huán)狀共軛體系躍遷類(lèi)型和吸收峰位置：

π→π*E1，E2，B三個(gè)吸收帶，有取代基長(zhǎng)移，

B帶精細(xì)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)化

助色團(tuán)取代基：產(chǎn)生n→π*，E2，B吸收帶長(zhǎng)移，ε增大，溶劑極性增加，B精