(2024年)公開課微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)人教選修

公開課微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)人教選修2024/3/261目錄contents微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)概述微生物營養(yǎng)與培養(yǎng)基微生物接種與培養(yǎng)技術(shù)微生物分離純化技術(shù)微生物計(jì)數(shù)與生長測定微生物菌種保藏與復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)安全與廢棄物處理2024/3/26201微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)概述2024/3/263010204培養(yǎng)目的與意義了解微生物的生長繁殖規(guī)律探究微生物的生理生化特性為微生物的工業(yè)應(yīng)用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)促進(jìn)微生物學(xué)領(lǐng)域的研究與發(fā)展032024/3/264將微生物接種于液體培養(yǎng)基中，通過振蕩或靜置進(jìn)行培養(yǎng)。液體培養(yǎng)固體培養(yǎng)半固體培養(yǎng)將微生物接種于固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部，通過觀察菌落形態(tài)和生長情況來判斷微生物的種類和特性。介于液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)之間的一種培養(yǎng)方法，常用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)性和擴(kuò)散性。030201培養(yǎng)類型與方法2024/3/265無菌器具如無菌吸管、無菌移液管等，用于取樣、接種等操作，保證實(shí)驗(yàn)的無菌性。高壓蒸汽滅菌器對(duì)培養(yǎng)基、器皿等進(jìn)行滅菌處理，保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。顯微鏡觀察微生物的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，判斷其種類和特性。無菌操作臺(tái)提供無菌操作環(huán)境，避免雜菌污染。恒溫培養(yǎng)箱提供適宜的溫度和濕度條件，促進(jìn)微生物的生長繁殖。實(shí)驗(yàn)室設(shè)備及要求2024/3/26602微生物營養(yǎng)與培養(yǎng)基2024/3/267碳源氮源無機(jī)鹽生長因子微生物營養(yǎng)需求01020304提供微生物細(xì)胞合成所需的碳元素，如葡萄糖、蔗糖等。提供微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等含氮物質(zhì)的原料，如銨鹽、硝酸鹽等。維持微生物細(xì)胞滲透壓、酸堿平衡以及酶活性，如磷酸鹽、硫酸鹽等。某些微生物生長所必需的微量有機(jī)物質(zhì)，如維生素、氨基酸等。2024/3/268

培養(yǎng)基類型與成分天然培養(yǎng)基成分不確定，如麥芽汁、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基成分明確，根據(jù)微生物營養(yǎng)需求設(shè)計(jì)，如MS培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)基等。選擇性培養(yǎng)基加入某種試劑或化學(xué)物質(zhì)，依據(jù)微生物的某種特性進(jìn)行選擇培養(yǎng)，如伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基用于篩選大腸桿菌。2024/3/269按照一定比例稱取各種成分，混合均勻后調(diào)節(jié)pH值至適宜范圍。培養(yǎng)基配制采用高壓蒸汽滅菌法或干熱滅菌法等方法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理，以消除雜菌污染。在配制過程中要注意避免產(chǎn)生沉淀或分層現(xiàn)象，確保培養(yǎng)基成分均勻分布。同時(shí)，根據(jù)微生物的不同需求，可以選擇添加適當(dāng)?shù)目股亍⒖寡趸瘎┑任镔|(zhì)以提高培養(yǎng)效果。培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)基配制與滅菌2024/3/261003微生物接種與培養(yǎng)技術(shù)2024/3/2611通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。平板劃線法將駿業(yè)進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。稀釋涂布平板法用接種針將菌種穿刺接入半固體培養(yǎng)基中，此法用于觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)能力和保藏菌種。穿刺接種法接種方法2024/3/2612pH值微生物的生長還需要適宜的pH值。不同種類的微生物對(duì)pH值的要求不同，因此在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中需要選擇合適的緩沖液或調(diào)節(jié)劑來控制pH值。溫度微生物的生長需要適宜的溫度，不同種類的微生物對(duì)溫度的要求不同。在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中，一般通過恒溫培養(yǎng)箱或水浴等方式控制溫度。濕度濕度對(duì)微生物的生長也有重要影響。在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)微生物時(shí)，需要保持一定的濕度，以利于菌落的生長和繁殖。光照某些微生物的生長需要光照，而另一些則不需要。在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中，可以通過控制光照時(shí)間和強(qiáng)度來滿足不同微生物的需求。培養(yǎng)條件控制2024/3/2613通過觀察菌落的大小、形狀、顏色、透明度等特征來判斷微生物的種類和生長情況。菌落形態(tài)觀察通過定期測量微生物的生長量（如菌落直徑、菌液濃度等），繪制生長曲線，了解微生物的生長規(guī)律和特點(diǎn)。生長曲線測定檢測微生物代謝產(chǎn)生的物質(zhì)，如有機(jī)酸、酒精、抗生素等，以了解微生物的代謝類型和產(chǎn)物特點(diǎn)。代謝產(chǎn)物檢測通過一系列的生理生化試驗(yàn)，如糖發(fā)酵試驗(yàn)、蛋白質(zhì)分解試驗(yàn)等，進(jìn)一步了解微生物的生理特性和分類地位。生理生化試驗(yàn)生長現(xiàn)象觀察與記錄2024/3/261404微生物分離純化技術(shù)2024/3/2615通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。原理滅菌接種環(huán)、取菌種、連續(xù)劃線、培養(yǎng)觀察。操作步驟操作簡單，但易產(chǎn)生雜菌污染，分離效果相對(duì)較差。優(yōu)缺點(diǎn)平板劃線法2024/3/2616操作步驟制備稀釋液、涂布平板、培養(yǎng)觀察。原理將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。優(yōu)缺點(diǎn)能夠分離得到單菌落，但操作相對(duì)復(fù)雜，且對(duì)菌液的濃度有一定要求。稀釋涂布平板法2024/3/2617123利用液體培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行增菌培養(yǎng)，然后通過離心、過濾等手段將微生物分離出來。液體培養(yǎng)基分離法利用選擇性培養(yǎng)基對(duì)特定種類的微生物進(jìn)行篩選和分離，如利用高鹽培養(yǎng)基分離耐鹽微生物。選擇性培養(yǎng)基分離法在顯微鏡下直接對(duì)微生物進(jìn)行觀察和操作，如利用顯微操作器對(duì)微生物進(jìn)行單細(xì)胞分離。顯微操作法其他分離純化方法2024/3/261805微生物計(jì)數(shù)與生長測定2024/3/2619原理利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。缺點(diǎn)不能區(qū)分死菌和活菌。優(yōu)點(diǎn)直觀、快速。注意事項(xiàng)保證計(jì)數(shù)室清潔無污染，蓋玻片下無氣泡，計(jì)數(shù)時(shí)通常選擇計(jì)數(shù)室四角及中央的5個(gè)中方格內(nèi)的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法2024/3/2620原理優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)注意事項(xiàng)比濁法微生物的生長引起培養(yǎng)物混濁度的增高，通過測量培養(yǎng)液的混濁度來間接測量微生物的生長量。準(zhǔn)確性較低，受多種因素影響。操作簡便，可用于連續(xù)測定。選擇合適的比濁管，保證比濁管清潔無污染，比濁前需充分搖勻。2024/3/2621原理：將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液涂布到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。平板菌落計(jì)數(shù)法2024/3/2622優(yōu)點(diǎn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可測定樣品中的活菌數(shù)。缺點(diǎn)操作繁瑣，需要時(shí)間較長。注意事項(xiàng)選擇合適的稀釋度，保證平板表面干燥、無菌落生長；涂布時(shí)要均勻，不要出現(xiàn)堆積現(xiàn)象；培養(yǎng)條件要適宜，包括溫度、濕度和pH值等。平板菌落計(jì)數(shù)法2024/3/262306微生物菌種保藏與復(fù)蘇2024/3/2624方法常用的菌種保藏方法包括斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、濾紙保藏法、真空冷凍干燥保藏法等。液體石蠟保藏法向斜面菌種培養(yǎng)物中加入滅菌后的液體石蠟，使其與空氣隔絕，降低菌種代謝活性。真空冷凍干燥保藏法將菌種懸浮液進(jìn)行真空冷凍干燥處理，然后密封在安瓿管中保藏。原理菌種保藏是通過降低微生物體內(nèi)的代謝活性，使其處于休眠狀態(tài)，從而達(dá)到長期保存菌種的目的。斜面低溫保藏法將菌種接種在斜面培養(yǎng)基上，置于4℃左右的冰箱中保藏。濾紙保藏法將帶有菌種的濾紙放入密封袋中，低溫干燥保藏。010203040506菌種保藏原理與方法2024/3/2625接種后需對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行定期檢查，確保菌種生長正常。復(fù)蘇操作需在無菌條件下進(jìn)行，避免雜菌污染。復(fù)蘇前需對(duì)保藏菌種進(jìn)行仔細(xì)檢查，確保無雜菌污染。操作步驟：從保藏庫中取出菌種→在無菌操作臺(tái)內(nèi)打開安瓿管或取出濾紙→將菌種接種到適宜的培養(yǎng)基上→置于適宜的溫度和濕度條件下培養(yǎng)。注意事項(xiàng)菌種復(fù)蘇操作及注意事項(xiàng)2024/3/2626菌種保藏庫管理規(guī)范保藏庫環(huán)境要求保藏庫應(yīng)位于陰涼、干燥、通風(fēng)良好的地方，避免陽光直射和高溫高濕環(huán)境。菌種存放要求菌種應(yīng)按種類、編號(hào)、保藏日期等信息有序存放，便于查找和管理。定期檢查與維護(hù)定期對(duì)保藏庫進(jìn)行清潔、消毒和除濕處理，確保環(huán)境符合菌種保藏要求；同時(shí)定期對(duì)菌種進(jìn)行檢查，及時(shí)淘汰污染或變異的菌種。安全與保密措施保藏庫應(yīng)設(shè)置門禁系統(tǒng)和監(jiān)控設(shè)備，確保菌種安全；同時(shí)建立菌種信息檔案和保密制度，防止信息泄露。2024/3/262707實(shí)驗(yàn)安全與廢棄物處理2024/3/2628實(shí)驗(yàn)前必須充分了解實(shí)驗(yàn)步驟和操作規(guī)程，確保個(gè)人和他人的安全。穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)服，如實(shí)驗(yàn)服、手套、護(hù)目鏡等，避免直接接觸有害物質(zhì)。使用尖銳工具或玻璃器皿時(shí)要小心謹(jǐn)慎，避免割傷或刺傷。熟悉緊急情況下的應(yīng)對(duì)措施，如火災(zāi)、泄漏等，知道如何正確使用滅火器和緊急洗眼器等設(shè)備。01020304實(shí)驗(yàn)安全注意事項(xiàng)2024/3/2629根據(jù)廢棄物的性質(zhì)和危害程度進(jìn)行分類，如感染性廢棄物、化學(xué)廢棄物、放射性廢棄物等?；瘜W(xué)廢棄物應(yīng)按照其化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分類，使用專用容器收集，并標(biāo)注明顯的標(biāo)識(shí)和警示信息。對(duì)于感染性廢棄物，必須在指定地點(diǎn)進(jìn)行高壓滅菌或化學(xué)消毒處理，確保無害化。放射性廢棄物應(yīng)嚴(yán)格按照國家相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行處理和處置，確保不會(huì)對(duì)環(huán)境和人類造成危害。廢棄物分類與處理流程2024/3/2630實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配