培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)報(bào)告材料

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試驗(yàn)4選擇性培育基的配制

【目的】

了解選擇性培育基的原理，并掌撮配制選擇性培育基的方法和步驟。

【概述】

選擇性培育基是一類(lèi)依據(jù)某微生物的特別養(yǎng)分要求或?qū)δ郴瘜W(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培育基，具有使混合苗樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌的功能，廣泛用于菌種篩選等領(lǐng)域。選擇性培育基均含有增菌劑和選擇劑Y樣接種子這類(lèi)培育基后，由于抑蔭劑的選擇性抑制作用.使所要分別的目的菌得到較好的繁殖，而其他菌被抑制。經(jīng)過(guò)肯定的培育時(shí)間后.再將目的菌接種到鑒別培育基上，可以提高目的菌的分別陽(yáng)性率。抑菌劑的種類(lèi)許多，如孔雀綠、煌綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉或抗生素等，但加人量需精確?????，有的可以水溶液無(wú)菌配制冷藏備用。以上成分的用量、加人方法均按各類(lèi)配方進(jìn)行。

馬丁氏培育基常用于從自然環(huán)境中分別真菌，培育基中的去氧膽酸鈉和鏈霉素不是微生物的養(yǎng)分成分。由于去氧膽酸鈉為表面活性劑，不僅可防止霉菌菌絲擴(kuò)散，還可抑制G一細(xì)菌生長(zhǎng)，而鏈霉素對(duì)多數(shù)G一細(xì)菌具抑制生長(zhǎng)作用，所以它們是用于抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)，而對(duì)于真菌的生長(zhǎng)則沒(méi)有影響，從而達(dá)到分別真菌的目的。

Ashby無(wú)氮培育基常用于從自然界環(huán)境中分別固氮菌。培育基中只含有基本的碳源和無(wú)機(jī)鹽，沒(méi)有氮源。一般的細(xì)菌不能在此培育基上生長(zhǎng)，一些固氮的細(xì)菌可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?，可以在此培育基上生長(zhǎng)，從而達(dá)到分別固氮菌的目的。

【材料和器皿】

(1)試劑:蛋白胨，葡萄糖，甘露醇，孟加拉紅，鏈霉素，去氧膽酸鈉，KH2PO4，MgSO4·7H2O,NaC1，CaSO4·2H2O，CaCO3，瓊脂。

(2)器皿:臺(tái)秤，燒杯，共角燒瓶，量筒，漏斗，試管，玻棒，加壓蒸汽滅菌鍋等。

(3)其他:藥匙，pH試紙，稱(chēng)量紙，記號(hào)筆，棉花塞，紗布，線繩，不銹鋼試管帽，牛皮紙，報(bào)紙等。

【方法和步驟】

1.馬丁氏培育基的配制

(l)培育基成分:

葡萄糖10g

蛋白胨5g

KH2PO41g

MgSO4·7H2O0.5g

0.1％孟加拉紅溶液3.3ml

瓊脂16g

蒸餾水1000ml

自然PH

2％去氧膽酸鈉溶液20ml（預(yù)先滅菌，臨用前加入）

鏈霉素溶液(10000U/ml)3.3ml（臨用前加入）

(2)配制方法:

①稱(chēng)量:稱(chēng)取培育基各成分的所需量。

②溶化:在燒杯中加入約2/3所需水量，然后依次逐一加人并溶化培育基各成分，再按每1000ml培育基加人3.3ml的0.1%孟加拉紅溶液。

③定容:待各成分完全溶化后，補(bǔ)足水量至所需體積。

④加瓊脂:加人所需瓊脂量，加熱溶化，補(bǔ)足失水。

⑤分裝，加塞，包扎。

⑥加壓蒸汽滅菌;12I℃滅菌20min。

⑦臨用前，加熱溶化培育基，待冷至60℃左右，按每1000ml培育基以無(wú)菌操作加入20ml2%去氧膽酸鈉溶液及3.3ml的鏈霉素溶液，快速混勻。

2.Ashby氏無(wú)氮培育基的配制

(l)培育基成分:

甘露醇10g

KH2PO40.2g

MgSO4·7H2O0.2g

NaCl0.2ml

CaSO4·2H2O0.1g

CaCO35g

瓊脂15~20g

蒸餾水1000ml

pH7.2~7.4

(2)配制方法:

①稱(chēng)量:稱(chēng)取培育墓各成分的所需量。

②溶化:在燒杯中加人約2/3所需水量，依次逐一溶化培育基各成分。

③定容。

④調(diào)pH至7.2一7.4。

⑤加瓊脂:加入所需瓊脂量，加熱溶化，補(bǔ)足失水。

⑥分裝，加塞，包扎。:

⑦加壓蒸汽滅菌;121℃(0.07MPa)滅菌20min。

【結(jié)果記錄】

記錄本試驗(yàn)配制培育基的時(shí)問(wèn)、名稱(chēng)和數(shù)量。

【留意事項(xiàng)】

1.稱(chēng)藥品用的牛角匙不要混用。

2.稱(chēng)完藥品應(yīng)準(zhǔn)時(shí)蓋緊瓶蓋。

3.調(diào)pH時(shí)要當(dāng)心