長沙地區(qū)臨床分享金黃色葡萄球菌的耐藥特征及femB基因的克隆和原核表達(dá)的開題報告

長沙地區(qū)臨床分享金黃色葡萄球菌的耐藥特征及femB基因的克隆和原核表達(dá)的開題報告開題報告一、研究背景金黃色葡萄球菌是一種常見的人體細(xì)菌，可引起多種感染如皮膚、軟組織、骨骼和心臟內(nèi)膜等。近年來，由金黃色葡萄球菌引起的感染病例不斷增加，部分病例由于耐藥性不斷加強(qiáng)，治療難度大大增加。因此，了解金黃色葡萄球菌的耐藥特征及其調(diào)控機(jī)制對于感染疾病的防控具有重要意義。femB基因是編碼金黃色葡萄球菌幾丁質(zhì)結(jié)合蛋白的基因，其在金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁生物合成中起著重要作用。femB基因突變或缺失可導(dǎo)致金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁合成異常，從而調(diào)節(jié)其藥敏性。二、研究目的本研究旨在探究長沙地區(qū)金黃色葡萄球菌的耐藥特征及其調(diào)控機(jī)制，重點(diǎn)研究femB基因的克隆和原核表達(dá)，以期為金黃色葡萄球菌感染的防控提供科學(xué)依據(jù)。三、研究內(nèi)容及方法3.1研究內(nèi)容1.采集長沙地區(qū)臨床分離的金黃色葡萄球菌菌株，鑒定其耐藥特征。2.克隆金黃色葡萄球菌的femB基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒，驗(yàn)證重組質(zhì)粒的構(gòu)建是否成功。3.將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中，挑選陽性克隆測序進(jìn)行驗(yàn)證。4.將femB基因亞克隆至原核表達(dá)質(zhì)粒，并在細(xì)菌中進(jìn)行原核表達(dá)。5.對金黃色葡萄球菌的femB基因及其表達(dá)進(jìn)行藥敏性測試。3.2研究方法1.采用紙片擴(kuò)散法測定金黃色葡萄球菌對多種抗生素的耐藥性。2.利用PCR方法擴(kuò)增金黃色葡萄球菌的femB基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌。3.利用PCR和酶切測序法確認(rèn)構(gòu)建的重組質(zhì)粒是否正確。4.亞克隆金黃色葡萄球菌的femB基因至原核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)。5.使用m-MRSA檢測試劑測定金黃色葡萄球菌菌株中femB基因的藥敏性。四、預(yù)期成果1.對長沙地區(qū)臨床分離的金黃色葡萄球菌的耐藥特征進(jìn)行探究。2.成功克隆金黃色葡萄球菌的femB基因并構(gòu)建重組質(zhì)粒，驗(yàn)證構(gòu)建的重組質(zhì)粒是否正確。3.成功克隆femB基因至原核表達(dá)質(zhì)粒并在大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)，驗(yàn)證其與金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁合成調(diào)控的關(guān)系。4.獲得金黃色葡萄球菌femB基因及其表達(dá)藥敏性信息，為金黃色葡萄球菌感染病例的臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。五、進(jìn)度安排1.收集金黃色葡萄球菌菌株及其耐藥特征數(shù)據(jù)（兩個月）。2.擴(kuò)增金黃色葡萄球菌的femB基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒并進(jìn)行驗(yàn)證（三個月）。3.將femB基因亞克隆至原核表達(dá)質(zhì)粒，進(jìn)行原核表達(dá)并驗(yàn)證（四個月）。4.進(jìn)行藥敏性測試及數(shù)據(jù)分析，撰寫論文（三個月）。六、參考文獻(xiàn)1.WangY,WangR,JinF,etal.CharacterizationofMethicillin-Resistantand-SusceptibleStaphylococcusaureusIsolatedfromRetailMeatintheNetherlands.IntJFoodMicrobiol,2017:242:34-44.2.YuanX,LouM,JiX,etal.ClinicalCharacteristicsandMolecularTypingofMethicillin-ResistantStaphylococcusaureusinShaanxiProvince,China,2013-2016.MicrobDrugResist,2018:24(4):365-70.3.BaiF,LiuF,YangL,etal.InhibitionofStaphylococcusaureusBiofilmsbytheAntibac