微生物細(xì)胞大小的測(cè)定

關(guān)于微生物細(xì)胞大小的測(cè)定一、目的要求

了解目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺的構(gòu)造和使用原理；掌握微生物細(xì)胞大小的測(cè)定方法。第2頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、基本原理

微生物細(xì)胞大小，是微生物的形態(tài)特征之一，也是分類(lèi)鑒定的依據(jù)之一。由于菌體很小，只能在顯微鏡下測(cè)量。用來(lái)測(cè)量微生物細(xì)胞大小的工具有目鏡測(cè)微尺（圖3）和鏡臺(tái)測(cè)微尺（圖4）。第3頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天

目鏡測(cè)微尺（圖3，A）是一塊可放在接目鏡內(nèi)的隔板上的圓形小玻片，其中央刻有精確的刻度，有等分50小格或100小格兩種，每5小格間有一長(zhǎng)線相隔。由于所用接目鏡放大倍數(shù)和接物鏡放大倍數(shù)的不同，目鏡測(cè)微尺每小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度也就不同，因此，目鏡測(cè)微尺不能直接用來(lái)測(cè)量微生物的大小，在使用前必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺進(jìn)行校正，以求得在一定放大倍數(shù)的接目鏡和接物鏡下該目鏡測(cè)微尺每小格的相對(duì)值，然后才可用來(lái)測(cè)量微生物的大小。第4頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天第5頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天

鏡臺(tái)測(cè)微尺（圖4）是中央部分刻有精確等分線的載玻片。一般將1mm等分為100格（2mm等分為200格），每格長(zhǎng)度等于0.01mm（即10μm），是專(zhuān)用于校正目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度的。第6頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天圖4目測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺

①目鏡測(cè)微尺②鏡臺(tái)測(cè)微尺③鏡臺(tái)測(cè)微尺的中心部放大

④鏡臺(tái)測(cè)微尺標(biāo)實(shí)目鏡測(cè)微尺時(shí)兩者重疊

A.目鏡測(cè)微尺B.鏡臺(tái)測(cè)微尺

第7頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、器材

釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）斜面菌種，目鏡測(cè)微尺，鏡臺(tái)測(cè)微尺，顯微鏡，擦鏡紙，香柏油，二甲苯等。第8頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、操作步驟

1．目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定

（1）放置目鏡測(cè)微尺取出接目鏡，旋開(kāi)接目鏡透鏡，將目鏡測(cè)微尺的刻度朝下放在接目鏡筒內(nèi)的隔板上（圖3，B），然后旋上接目透鏡，最后將此接目鏡插入鏡筒內(nèi)（圖3，C）。（2）放置鏡臺(tái)測(cè)微尺將鏡臺(tái)測(cè)微尺置于顯微鏡的載物臺(tái)上，使刻度面朝上。第9頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）校正目鏡測(cè)微尺

先用低倍鏡觀察，對(duì)準(zhǔn)焦距，當(dāng)看清鏡臺(tái)測(cè)微尺后，轉(zhuǎn)動(dòng)接目鏡，使目鏡測(cè)微尺的刻度與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度平行，移動(dòng)推動(dòng)器，使目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺的某一區(qū)間的兩對(duì)刻度線完全重合，然后計(jì)數(shù)出兩對(duì)重合線之間各自所占的格數(shù)。例如圖4④中A（目鏡測(cè)微尺）上5格對(duì)準(zhǔn)B鏡臺(tái)測(cè)微尺上的2格，B的1格為10μm，2格的長(zhǎng)度為20μm,所以目鏡測(cè)微尺上1小格的長(zhǎng)度為4μm。第10頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天

根據(jù)計(jì)數(shù)得到的目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺重合線之間各自所占的格數(shù)，通過(guò)如下公式換算出目鏡測(cè)微尺每小格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度：

目鏡測(cè)微尺每小格長(zhǎng)度（μm）=（兩對(duì)重合線間鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)×10）/兩對(duì)重合線間目鏡測(cè)微尺格數(shù)

同法校正在高倍鏡和油鏡下目鏡測(cè)微尺每小格所代表的長(zhǎng)度。第11頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天2．菌體大小的測(cè)定

（1）將酵母菌斜面制成一定濃度的菌懸液（10-2）。（2）取一滴酵母菌菌懸液制成水浸片。（3）移去鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上酵母菌水浸片，先在低倍鏡下找到目的物，然后在高倍鏡下用目鏡測(cè)微尺來(lái)測(cè)量酵母菌菌體的長(zhǎng)，寬各占幾格（不足一格的部分估計(jì)到小數(shù)點(diǎn)后一位數(shù)）。測(cè)出的格數(shù)乘上目鏡測(cè)微尺每格的校正值，即等于該菌的長(zhǎng)和寬。一般測(cè)量菌體的大小要在同一個(gè)標(biāo)本片上測(cè)定10-20個(gè)菌體，求出平均值，才能代表該菌的大小。而且一般是用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體進(jìn)行測(cè)定。第12頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天

3．取出目鏡測(cè)微尺，將接目鏡放回鏡筒，再將目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺分別用擦鏡紙擦試后，放回盒內(nèi)保存。第13頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1．將目鏡測(cè)微尺校正結(jié)果填入下表。接物鏡接物鏡倍數(shù)目鏡測(cè)微尺格數(shù)鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)目鏡測(cè)微尺每格代表的長(zhǎng)度（μm）低倍鏡

高倍鏡

油鏡

接目鏡倍數(shù)_______________________第14頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天2．在高倍鏡和油鏡下測(cè)量酵母菌大小，將結(jié)果填入下表。菌體編號(hào)長(zhǎng)（μm）寬（μm）菌體大小（平均值）長(zhǎng)×寬（μm）目鏡測(cè)微尺格數(shù)菌體長(zhǎng)度目鏡測(cè)微尺格數(shù)菌體寬度1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

注：結(jié)果計(jì)算

長(zhǎng)/μm＝平均格數(shù)×校正值；寬/μm＝平均格數(shù)×校正值；

大小表示為寬/μm×長(zhǎng)/μm第15頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天

3．當(dāng)接目鏡不變，目鏡測(cè)微