常見病毒鑒定

關(guān)于常見病毒鑒定本章內(nèi)容第一節(jié)呼吸道病毒

1第二節(jié)2第五節(jié)5肝炎病毒第六節(jié)6第四節(jié)4第三節(jié)3反轉(zhuǎn)錄病毒皰疹病毒腸道病毒朊粒及其他病毒第2頁,共105頁，2024年2月25日，星期天學習目標及重點學習目標：

掌握流感病毒、肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、腸道病毒的主要生物學特點,各病毒的傳播途徑、臨床檢驗和防治原則區(qū)別乙型肝炎病毒常見抗原抗體的組成及其臨床意義五種肝炎病毒常用鑒定方法解釋流感病毒變異和流行的關(guān)系了解朊粒的生物學特征本章重點：★流感病毒、肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、腸道病毒的生物學特性和致病性★常見病毒的檢驗方法第3頁,共105頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)呼吸道病毒呼吸道病毒一詞并非是病毒分類學上的名稱，而是指主要以呼吸道為侵入門戶，首先在呼吸道粘膜上皮細胞中增殖引起呼吸道以及全身感染，造成呼吸道及其他器官損害的病毒的總稱。第4頁,共105頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)呼吸道病毒一、流感病毒流行性感冒病毒（influenzavirus），簡稱流感病毒，是流感的病原體甲（A）:抗原性易發(fā)生變異，多次引起世界性大流行乙（B）:對人類致病性較低丙（C）:只引起人類不明顯的或輕微的上呼吸道感染，很少造成流行（一）生物學特性1.形態(tài)結(jié)構(gòu)（1）形態(tài)第5頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（2）結(jié)構(gòu)

核衣殼核酸(單股負鏈RNA)

核蛋白（NP）

RNA多聚酶核衣殼包膜基質(zhì)蛋白（MP）脂蛋白（LP）刺突血凝素（HA）神經(jīng)氨酸酶（NA）第一節(jié)呼吸道病毒第6頁,共105頁，2024年2月25日，星期天2.分型與變異分型：根據(jù)NP和MP的不同流感病毒分為甲（A）、乙（B）、丙（C）三型。甲型流感病毒根據(jù)其表面HA和NA抗原性的不同，又分為若干亞型。變異：最主要的是抗原性變異:HA和NA抗原漂移（antigenicdrift）抗原轉(zhuǎn)變（antigenicshift）第一節(jié)呼吸道病毒第7頁,共105頁，2024年2月25日，星期天3.培養(yǎng)特性：在雞胚羊膜腔和尿囊腔中增殖紅細胞吸附試驗（hemoadsorptiontest）易感動物為雪貂4.抵抗力：抵抗力較弱不耐熱，56℃30分鐘可滅活病毒室溫下很快喪失傳染性第一節(jié)呼吸道病毒第8頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗1.標本：血清、咽漱液2.鑒定：電鏡觀察ELISA檢查患者咽漱液中的抗原用單克隆抗體經(jīng)免疫酶法PCR技術(shù)、核酸雜交等方法檢出病毒或進行分型第一節(jié)呼吸道病毒第9頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（三）臨床意義傳染源：患者、隱性感染者、被感染的動物傳播途徑：飛沫，經(jīng)呼吸道進入體內(nèi)致病機理：呼吸道上皮細胞感染增殖，病毒不入血，毒素樣物質(zhì)進入血液癥狀：上呼吸道癥狀、發(fā)熱、頭痛、全身酸痛

第一節(jié)呼吸道病毒第10頁,共105頁，2024年2月25日，星期天二、風疹病毒（一）生物學特性1．形態(tài)結(jié)構(gòu)：單股正鏈RNA病毒有包膜，核衣殼為二十面體對稱一個血清型人是唯一宿主2．抵抗力：抵抗力較弱不耐熱，56℃30分鐘可滅活病毒對紫外線、乙醚、氯化銫、去氧膽酸等均敏感第一節(jié)呼吸道病毒第11頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗1．標本：鼻咽分泌物、皮疹液、尿液，腦脊液、血液、骨髓等2．鑒定病毒培養(yǎng)（CPE）

免疫學檢測紅細胞凝集抑制試驗中和試驗補體結(jié)合試驗酶或熒光素標記單克隆抗體

病毒核酸檢測：PCR或核酸雜交技術(shù)第一節(jié)呼吸道病毒第12頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（三）臨床意義兒童是主要易感者、病后可終身免疫呼吸道傳播局部淋巴節(jié)增殖后經(jīng)病毒血癥散播全身可垂直傳播導(dǎo)致胎兒先天性感染第一節(jié)呼吸道病毒第13頁,共105頁，2024年2月25日，星期天三、其他呼吸道病毒（一）SARS冠狀病毒1．生物學特性：（1）形態(tài)結(jié)構(gòu)不規(guī)則球形，核酸為非節(jié)段單正鏈RNA

直徑60-220nm，有包膜

刺突糖蛋白S、小包膜糖蛋白E、膜糖蛋白M（2）變異性：重組率高、容易發(fā)生變異第一節(jié)呼吸道病毒第14頁,共105頁，2024年2月25日，星期天2.微生物學檢驗（1）標本：鼻咽拭子、咽漱液、糞便等（2）鑒定：電鏡技術(shù)病毒培養(yǎng)：CPE免疫學檢測：IgM、IgGRT-PCR基因芯片第一節(jié)呼吸道病毒第15頁,共105頁，2024年2月25日，星期天3.臨床意義（1）傳播途徑：嚴重急性呼吸綜合征，飛沫、接觸傳播（2）臨床表現(xiàn)可垂直傳播導(dǎo)致胎兒先天性感染（3）致病和免疫免疫病理損傷是SARS致病的主要機制（4）預(yù)防治療第一節(jié)呼吸道病毒第16頁,共105頁，2024年2月25日，星期天三、其他呼吸道病毒（二）麻疹病毒1．生物學特性：（1）形態(tài)結(jié)構(gòu)球形，核心為完整非節(jié)段單股負鏈RNA有包膜、衣殼螺旋對稱

不容易重組、不容易發(fā)生變異、只有一個血清型（2）抵抗力：較弱，對一般消毒劑、紫外線、脂溶劑均敏感第一節(jié)呼吸道病毒第17頁,共105頁，2024年2月25日，星期天2.微生物學檢驗（1）標本：鼻咽拭子、鼻咽洗液、痰、血和尿等，雙份血清（2）鑒定：電鏡觀察包涵體病毒培養(yǎng)：免疫學檢測：雙份血清檢測抗體RT-PCR第一節(jié)呼吸道病毒第18頁,共105頁，2024年2月25日，星期天3.臨床意義（1）傳染源傳播途徑：患者是唯一的傳染源，主要經(jīng)過飛沫傳播（2）臨床表現(xiàn)以皮丘疹、發(fā)熱及呼吸道癥狀為特征（3）致病和免疫麻疹病后可獲得牢固免疫力，極少發(fā)生再感染第一節(jié)呼吸道病毒第19頁,共105頁，2024年2月25日，星期天三、其他呼吸道病毒（三）腮腺炎病毒1．生物學特性：（1）形態(tài)結(jié)構(gòu)球形，核心為單股負鏈RNA有包膜、衣殼螺旋對稱只有一個血清型（2）抵抗力：較弱，紫外線、脂溶劑均敏感第一節(jié)呼吸道病毒第20頁,共105頁，2024年2月25日，星期天2.微生物學檢驗（1）標本：發(fā)病早期唾液、腦脊液、雙份血清（2）鑒定：病毒分離培養(yǎng)：免疫學檢測：雙份血清檢測抗體RT-PCR第一節(jié)呼吸道病毒第21頁,共105頁，2024年2月25日，星期天3.臨床意義（1）傳染源傳播途徑：人是唯一宿主，通過飛沫或唾液污染的食品、玩具進行傳播（2）臨床表現(xiàn)本病潛伏期約2～3周，病毒侵入呼吸道上皮細胞和局部淋巴結(jié)內(nèi)增殖后，進入血流，然后經(jīng)血流侵入腮腺及其它腺體器官如睪丸、卵巢、胰腺等。臨床表現(xiàn)主要為一側(cè)或雙側(cè)腮腺腫大，伴發(fā)熱、乏力、肌肉疼痛等。青春期感染者易并發(fā)睪丸炎或卵巢炎，并發(fā)睪丸炎者可導(dǎo)致男性不育癥，腮腺炎也是導(dǎo)致兒童期獲得性耳聾的常見原因。（3）免疫腮腺炎病后一般可獲得終身免疫。第一節(jié)呼吸道病毒第22頁,共105頁，2024年2月25日，星期天三、其他呼吸道病毒病毒名稱形態(tài)結(jié)構(gòu)所致疾病SARS冠狀病毒球形、冠狀，有包膜，單正鏈RNA發(fā)熱、干咳、胸悶、氣短，急性呼吸窘迫綜合癥、休克、多器官功能障礙綜合癥等麻疹病毒球形、衣殼呈螺旋對稱型，有包膜，不分節(jié)段的單股負鏈RNA發(fā)熱、咳嗽、流涕、眼結(jié)膜充血、皮膚出現(xiàn)紅色斑丘疹腮腺炎病毒球形，核心為單股負鏈RNA，衣殼呈螺旋對稱，有包膜一側(cè)或雙側(cè)腮腺腫大，伴有疼痛、發(fā)熱第一節(jié)呼吸道病毒第23頁,共105頁，2024年2月25日，星期天三、其他呼吸道病毒病毒名稱形態(tài)結(jié)構(gòu)所致疾病腺病毒球形、雙鏈DNA、核衣殼20面體對稱、無包膜咽炎、扁桃體炎、肺炎、流行性眼結(jié)膜炎、急性出血性膀胱炎、胃腸炎等副流感病毒球形、單負鏈RNA、核衣殼螺旋對稱、有包膜小兒氣管炎、支氣管炎、肺炎、普通感冒等呼吸道合胞病毒球形、單負鏈RNA、核衣殼螺旋對稱、有包膜嬰幼兒喘息性支氣管炎、肺炎、成人普通感冒等鼻病毒球形、單正鏈RNA、核衣殼20面體對稱、無包膜嬰幼兒支氣管炎、支氣管肺炎、成人普通感冒等第一節(jié)呼吸道病毒第24頁,共105頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)肝炎病毒肝炎病毒是指引起病毒性肝炎的病原體。人類肝炎病毒有甲型、乙型、丙型、丁型和戊型和庚型病毒之分。第25頁,共105頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)肝炎病毒一、甲型肝炎病毒（一）生物學特性

1.形態(tài)結(jié)構(gòu)屬小RNA病毒科,線性單正鏈RNA，直徑約為27nm，呈球形，二十面體立體對稱、無包膜第26頁,共105頁，2024年2月25日，星期天HAV電鏡圖第二節(jié)肝炎病毒第27頁,共105頁，2024年2月25日，星期天2.抵抗力耐受乙醚、氯仿等脂溶劑耐酸：在pH3的酸性環(huán)境中穩(wěn)定不耐熱：100℃5

min可使之滅活在海水、淡水、毛蚶、泥沙中存活數(shù)天至數(shù)月第二節(jié)肝炎病毒第28頁,共105頁，2024年2月25日，星期天3.培養(yǎng)特性易感動物：黑猩猩，狨猴，鷹面猴，短尾猴允許性細胞：Vero、恒河猴胚腎細胞（FRHK-4）、人肝癌細胞株（PLC/PRF/S）等在培養(yǎng)細胞中生長緩慢，無CPE第二節(jié)肝炎病毒第29頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗HAV-IgM檢測：早期、快速診斷最可靠的血清學指標HAV-IgG檢測：主要用于了解既往感染史、疫苗免疫、效果評價或流行病學調(diào)查分離培養(yǎng)：原代肝細胞或恒河猴胚腎傳代株細胞對HAV敏感，生長緩慢，不引起細胞裂解第二節(jié)肝炎病毒第30頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（三）臨床意義傳染源：主要性患者和亞臨感染者傳播途徑：糞－口途徑傳播第二節(jié)肝炎病毒第31頁,共105頁，2024年2月25日，星期天二、乙型肝炎病毒第二節(jié)肝炎病毒第32頁,共105頁，2024年2月25日，星期天二、乙型肝炎病毒（一）生物學特性1．形態(tài)與結(jié)構(gòu)①小球形顆粒:直徑22nm；②管形顆粒:直徑22nm，長度在50～700nm之間；③大球形顆粒:即Dane顆粒，直徑42nm。第二節(jié)肝炎病毒第33頁,共105頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)肝炎病毒即完整的HBV顆粒，也稱Dane顆粒，直徑約42nm，分為包膜和核心兩部分。包膜含HBsAg、糖蛋白和細胞脂肪，核心含核心蛋白（即乙型肝炎核心抗原，HBcAg）、環(huán)狀雙股HBV-DNA和HBV-DNA多聚酶。第34頁,共105頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)肝炎病毒小球形顆粒：直徑約22nm。管狀顆粒：直徑約22nm，長度100～500nm。這兩種顆粒均由與病毒包膜相同的脂蛋白（即乙型肝炎表面抗原，HBsAg）組成，不含核酸，一般無傳染性。第35頁,共105頁，2024年2月25日，星期天2.基因組從感染HBV病人的血清中及感染肝臟提純的病毒核心中分離出環(huán)狀雙股DNA，約3200bp，HBVDNA負鏈有四個開放區(qū)，分別稱為S、C、P及X，能編碼全部已知的HBV蛋白質(zhì)。S基因能編碼主要表面蛋白。C區(qū)基因包括前C基因和C基因，分別編碼HBeAg和HBcAg。P區(qū)最長，編碼病毒體DNA多聚酶。X區(qū)可能編碼有154個氨基酸的堿性多肽。第二節(jié)肝炎病毒第36頁,共105頁，2024年2月25日，星期天3.抗原組成（1）表面抗原HBsAg存在于三型顆粒中,是HBV感染的主要標志pres1和preS2抗原的檢作為病毒復(fù)制的指標抗-preS2抗體陽性常見于急性乙肝的恢復(fù)期，表示病毒正在或已經(jīng)被清除抗-HBs保護性抗體（中和抗體）乙肝痊愈（臨床）或免疫成功（接種疫苗）的標志第二節(jié)肝炎病毒第37頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（2）核心抗原HBcAg僅存在于Dane顆粒中，刺激機體產(chǎn)生抗HBc（IgG、IgM）可在感染的肝細胞核心部位的表面存在，表明病毒在復(fù)制到血液中即被降解為HBeAg，一般血清學方法檢測不到HBcAg，而只能檢測到抗-HBc抗-HBc對機體無保護作用抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活動的標志抗HBc-IgG：持續(xù)時間長凡有過HBV感染者均可陽性，并可終身伴隨第二節(jié)肝炎病毒第38頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（3）e抗原HBeAg僅存在于Dane顆粒中，HBeAg是HBcAg的降解產(chǎn)物，游離存在于血液中，為病毒復(fù)制及強傳染性的指標，產(chǎn)生抗－HBe，是預(yù)后良好的征象抗-HBe隨著HBeAg的消失而出現(xiàn)抗-HBe的出現(xiàn)標志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低保護作用第二節(jié)肝炎病毒第39頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（4）PreS1、PreS2與HBV-DNA成正比是病毒復(fù)制的指標抗-PreS1、抗-PreS2在恢復(fù)期的早期出現(xiàn)陽性提示病毒正在或已經(jīng)被清除是預(yù)后良好的指標第二節(jié)肝炎病毒第40頁,共105頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)肝炎病毒第41頁,共105頁，2024年2月25日，星期天4.培養(yǎng)特性動物接種：黑猩猩、鴨第二節(jié)肝炎病毒5.抵抗力具有頑強的抵抗力：它對低溫、干燥、紫外線、對一般濃度的化學消毒劑，都能夠耐受；常用的消毒劑，如酒精、來蘇兒、碘酒等對它根本不起作用，不能殺死它們，所以家里有了乙肝病人就不要用這些消毒劑來消毒，但是HBV怕高熱，如加熱到100度，只要10分鐘就可使其失去傳染性。HBV對0.5%過氧乙酸非常敏感，5%次氯酸鈉也可用來殺滅HBV。第42頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗1.標本：血清2.鑒定HBV抗原、抗體檢測血清HBV-DNA檢測血清DNA多聚酶檢測第二節(jié)肝炎病毒第43頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（三）臨床意義傳染源：患者或無癥狀HBsAg攜帶者傳播途徑：血液、血制品、母嬰傳播、性傳播乙型肝炎的臨床表現(xiàn)呈多樣性，可由無癥狀攜帶至急性肝炎、慢性肝炎、重癥肝炎等。病毒不僅存在于肝內(nèi)，也存在于脾臟和血細胞等。一般認為，病毒在細胞內(nèi)增殖對肝細胞的直接破壞作用不大，而機體對肝臟的免疫病理損害才是引起肝炎發(fā)生的主要原因第二節(jié)肝炎病毒第44頁,共105頁，2024年2月25日，星期天三、丙型肝炎病毒（一）生物學特性第二節(jié)肝炎病毒1.形態(tài)結(jié)構(gòu)球形，單正鏈RNA有包膜2.抵抗力：對有機溶劑敏感1.標本：血清或血漿2.鑒定：檢測病毒抗體：用ELISA法檢測抗-HCV檢測病毒RNA：因HCV在血液中含量很少，常用敏感的RT-PCR法（二）微生物學檢驗第45頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（三）臨床意義1.主要通過輸血和血制品傳播，其他如性接觸傳播、母嬰傳播2.是引起輸血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因3.HCV感染極易轉(zhuǎn)為慢性4.無癥狀HCV攜帶者和慢性丙肝者多見5.人群普遍易感，HCV感染的母親所生嬰兒感染率高6.誘發(fā)肝外損傷：腎小球腎炎7.無有效疫苗，免疫力不牢固第二節(jié)肝炎病毒第46頁,共105頁，2024年2月25日，星期天四、丁型肝炎病毒（一）生物學特性HDV是一種缺陷病毒由HBsAg構(gòu)成其外殼，HDV定位于肝細胞核內(nèi)，在血液中由HBsAg包被形成35-37nm顆粒，單負鏈環(huán)狀RNA，已知的最小的動物病毒HDV結(jié)構(gòu)模式圖第二節(jié)肝炎病毒第47頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗1.HDAg是HDV感染的直接標志2.抗-HD抗體檢測抗HDV-IgM：是HDV早期感染標志抗HDV-IgG：是HDV既往感染的標志慢性HDV感染時，兩種抗體可長期共存3.HDV-RNAHDVRNA是HDV存在及復(fù)制的一個有用指標第二節(jié)肝炎病毒第48頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（三）臨床意義感染HBsAg陽性的病人共同感染(coinfection)：與HBV同時感染重疊感染(superinfection)：在慢性乙型肝炎或HBsAg攜帶者的基礎(chǔ)上再感染HDV第二節(jié)肝炎病毒第49頁,共105頁，2024年2月25日，星期天五、戊型肝炎病毒（一）生物學特性屬杯狀病毒科，球形，無包膜，直徑32～34nm，單正鏈RNA一個血清型第二節(jié)肝炎病毒第50頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗檢測HEV：電鏡或免疫電鏡觀察檢測抗-HEV抗HEV-IgM：是近期內(nèi)HEV感染的標志，有早期診斷價值抗HEV-IgG：HEV感染后可長期存在，可用于流行病學調(diào)查HEVRNA第二節(jié)肝炎病毒第51頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（三）臨床意義主要通過糞-口途徑傳播，患者多見于20～40歲成年人，潛伏期為2～9w，多數(shù)患者于病后6w即好轉(zhuǎn)或痊愈。少數(shù)患者可表現(xiàn)為重癥肝炎，甚至可導(dǎo)致死亡。孕婦感染時，發(fā)病率高，病情嚴重，常發(fā)生流產(chǎn)或死產(chǎn)HEV致病機制尚不明了，可能是病毒本身作用及機體免疫應(yīng)答造成肝細胞損傷病后有一定免疫力第二節(jié)肝炎病毒第52頁,共105頁，2024年2月25日，星期天六、其他肝炎相關(guān)病毒1.庚型肝炎病毒屬黃病毒科，為單股正鏈RNA。主要通過輸血等非腸道途徑傳播，呈全球分布，我國主要在非甲至戊型肝炎病人、獻血員、血透病人、器官移植患者及肝癌患者中存在2.TT型肝炎病毒是從一例日本輸血后非甲至庚型肝炎病人（TT）血液中發(fā)現(xiàn)的一類新型DNA病毒，屬細小DNA病毒科，通過血液和血制品傳播，也可經(jīng)消化道傳播第二節(jié)肝炎病毒第53頁,共105頁，2024年2月25日，星期天三、其他呼吸道病毒病毒名稱形態(tài)結(jié)構(gòu)所致疾病HAV球形、線性單正鏈RNA、核衣殼20面體對稱、無包膜急性甲型肝炎HBV球形、雙鏈環(huán)狀DNA、層衣殼急性、慢性乙型肝炎，并與肝硬化及肝癌相關(guān)HCV球形、單正鏈RNA、有包膜急性或慢性丙型肝炎HDV球形、單鏈環(huán)狀RNA、有包膜加重乙型肝炎HEV球形、單正鏈RNA、無包膜戊型肝炎第二節(jié)肝炎病毒第54頁,共105頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒包括腫瘤病毒亞科、泡沫病毒亞科和慢病毒亞科人類嗜T細胞病毒人類免疫缺陷病毒（HIV）

HIV-I型和HIV-II型獲得性免疫缺陷綜合癥（AIDS）第55頁,共105頁，2024年2月25日，星期天

中國AIDS流行現(xiàn)狀截至2014年2月28日，我國累計報告報告的HIV/AIDS587182例，死亡138956例?，F(xiàn)存活艾滋病病毒感染者271624例，艾滋病病人176602例。我國艾滋病疫情總體上保持低流行態(tài)勢，但依然呈上升趨勢，幅度較以前有所減緩。據(jù)統(tǒng)計，自2005年至今，性傳播比例持續(xù)攀升。2014年3月新發(fā)現(xiàn)的HIV/AIDS中，異性性傳播4515例（69.8%），同性性傳播1260例（19.5%），注射毒品傳播430例（6.6%），母嬰傳播36例（0.6%），性接觸加注射毒品傳播13例（0.2%），既往輸血及使用血制品傳播11例（0.2%），既往采血漿傳播5例（0.1%），傳播途徑不詳203例（3.1%）。50歲以上群體和學生群體所占比例上升，這也是我國HIV傳播的新特點知識拓展第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第56頁,共105頁，2024年2月25日，星期天一、人類免疫缺陷病毒（一）生物學特性1．形態(tài)與結(jié)構(gòu)RNA，有包膜球形病毒。72個釘狀突起，gp120

gp412．HIV復(fù)制（1）吸附----gp120

+CD4（2）穿入和脫殼（3）生物合成（4）裝配與釋放

第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第57頁,共105頁，2024年2月25日，星期天3．HIV的理化特性對熱敏感56℃處理30分鐘失去感染性，但不能完全滅活血清中的HIV,滅活方法是100℃20分鐘對化學因素敏感，在室溫下70%酒精只需1分鐘即不能檢出活性對紫外線或γ射線不敏感，因此紫外線或γ射線不能滅活HIV病毒第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第58頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗1．標本采集采集血液、體液標本2．HIV檢驗包括HIV抗體、P24抗原、HIV病毒載量、CD4+T細胞計數(shù)等抗體檢測是診斷HIV感染的唯一標準（1)HIV-1P24

HIV-1P24------可用于“窗口期”及HIV-1抗體陽性的母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第59頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（2）血清抗體檢測分為篩查和確認試驗免疫印跡法--是HIV血清學檢測中最常用的確證性試驗篩查陽性者必須進行確認試驗第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第60頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（3）測定病毒核酸臨床常用于測定感染者體內(nèi)游離病毒的RNA含量即病毒載量（4）CD4+T細胞計數(shù)應(yīng)用流式細胞儀（FCM）進行CD4+T細胞記數(shù)及占淋巴細胞的百分率（正常情況下與CD8+T細胞比例為2:1）CD4+T細胞數(shù):＜0.5×109/L時，為抗反轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療的指征＜0.2×109/L時，應(yīng)立刻進行卡氏肺孢子菌的預(yù)防治療

＜0.1×109/L時，易感染巨細胞病毒和結(jié)核分枝桿菌（5）耐藥性檢測檢測患者標本中HIV基因序列，監(jiān)控變異的發(fā)生，間接估計藥物耐藥情況。第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第61頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（三）臨床意義HIV無癥狀攜帶者和AIDS患者傳播途徑性接觸、輸血或血制品、母-嬰傳播傳染源病毒選擇性侵犯CD4+細胞，細胞變性、壞死，導(dǎo)致以CD4+細胞缺陷為主的嚴重免疫缺陷1．致病機制第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第62頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（1）急性期：（2）無癥狀潛伏期：（3）AIDS期:感染后2～6周內(nèi)一般為8～10年通常難以檢測到HIV抗體血清抗體陽性，具傳染性。持續(xù)發(fā)熱、盜汗、失重、不明原因的慢性腹瀉、濕疹、銀屑病、脂溢性皮炎、皮炎、皰疹-帶狀皰疹、口腔念珠菌病、黏膜白斑病等機會感染和腫瘤2．臨床特征第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第63頁,共105頁，2024年2月25日，星期天機會性感染帶狀皰疹毛囊炎第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第64頁,共105頁，2024年2月25日，星期天在AIDS患者中念珠菌屬感染是很常見的,象鵝口瘡（上圖）盡管不危及生命但十分討厭.

左圖為念珠菌性肺炎.機會性感染第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第65頁,共105頁，2024年2月25日，星期天惡性腫瘤圖為AIDS患者常出現(xiàn)的Kaposi肉瘤第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第66頁,共105頁，2024年2月25日，星期天由于缺乏AIDS宣傳及預(yù)防意識，中國九十年代出現(xiàn)“AIDS村”

第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第67頁,共105頁，2024年2月25日，星期天患艾滋病的孩子

第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第68頁,共105頁，2024年2月25日，星期天二、人類嗜T細胞病毒

引起T細胞白血病和毛細胞白血病人類嗜T細胞病毒(HTLV)（一）生物學特性電鏡下HTLV呈球形，直徑約100nm，中心為病毒的RNA和反轉(zhuǎn)錄酶最外層系病毒的包膜，其表面嵌有g(shù)p120，能與細胞表面的CD4分子結(jié)合而介導(dǎo)病毒的感染。包膜內(nèi)有病毒的衣殼，含有P18和P24兩種結(jié)構(gòu)蛋白第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第69頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢查*電鏡觀察*免疫血清或單克隆抗體鑒定*血液中HTLV-I抗體的存在即可診斷為該病毒感染；而血液中異常淋巴細胞數(shù)量的大量增生，同時證實這些淋巴細胞中有HTLV-IDNA，則可支持成人T淋巴細胞白血病的診斷第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第70頁,共105頁，2024年2月25日，星期天HTLV-I可經(jīng)輸血、注射或性接觸等傳播，也可通過胎盤、產(chǎn)道或哺乳等途徑垂直傳播。（三）臨床意義成人T淋巴細胞白血病主要采取化療，但對HTLV-I的抵抗效果不佳；AZT和其他反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑能夠有效的對抗細胞培養(yǎng)中的HTLV-II。第三節(jié)反轉(zhuǎn)錄病毒第71頁,共105頁，2024年2月25日，星期天

第四節(jié)皰疹病毒皰疹病毒（Herpesviruses）是一群中等大小的有包膜的雙股DNA病毒，有110個以上成員，其中與人感染有關(guān)的人皰疹病毒已發(fā)現(xiàn)有8種常用名單純皰疹病毒1型巨細胞病毒單純皰疹病毒2型人類皰疹病毒6型水痘帶狀皰疹病毒人類皰疹病毒7型EB病毒人類皰疹病毒8型第72頁,共105頁，2024年2月25日，星期天球形，直徑約為120～300nm。核心為雙鏈線性DNA，衣殼呈20面體，有包膜感染類型①增殖感染破壞宿主細胞②潛伏宿主細胞③部分整合到宿主細胞DNA中④經(jīng)胎盤感染胎兒，先天畸形對脂溶劑敏感，臨床采集標本不應(yīng)與脂溶劑接觸。最適保存溫度為-196℃（液氮），在-70℃病毒感性可保存數(shù)月，4℃可保存數(shù)天，-20℃易破壞病毒包膜，短期保存即完全滅活皰疹病毒共同的特：

第四節(jié)皰疹病毒第73頁,共105頁，2024年2月25日，星期天一、單純皰疹病毒（HSV）HSV-1

HSV-2HSV-2型則與生殖器皰疹和新生兒感染有關(guān)

主要引起口唇和角膜皰疹（一）生物學特性基因組DNA有40%左右的序列同源

HSV的增殖周期短，常潛伏于神經(jīng)節(jié)中引起潛伏感染。抵抗力較弱，易被脂溶劑滅活。溫度高于56℃30分鐘失去感染性

第四節(jié)皰疹病毒第74頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗1．標本

采集水皰液、唾液、腦脊液、角膜刮取物、陰道拭子等標本，經(jīng)常規(guī)處理后接種或置低溫冰箱保存2．分離培養(yǎng)鑒定

常用原代兔腎、人胚肺、人胚腎細胞或地鼠腎等傳代細胞分離培養(yǎng)病毒。在雞胚絨毛膜上，HSV-2形成大空斑，而HSV-1形成針尖大小的空斑。常用實驗動物有家兔、豚鼠、小鼠等3．血清學檢測中和試驗、免疫熒光等鑒定也可分離病毒DNA，根據(jù)DNA酶切圖譜差異鑒定型別

第四節(jié)皰疹病毒第75頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（三）臨床意義直接接觸傳染或被唾液污染的餐具

間接傳染HSV感染一般分為原發(fā)感染和復(fù)發(fā)感染。原發(fā)感染好發(fā)于嬰幼兒或兒童，多為隱性感染，并不表現(xiàn)出癥狀HSV-2侵及軀體腰以下部位，主要是生殖器，它是引起性病的主要病原體之一HSV-1主要侵犯軀體腰以上部位，可引起口腔、唇、眼、腦及腰以上部位感染

第四節(jié)皰疹病毒第76頁,共105頁，2024年2月25日，星期天單純皰疹病毒感染---多核細胞

第四節(jié)皰疹病毒第77頁,共105頁，2024年2月25日，星期天二、水痘-帶狀皰疹病毒（VSV）（一）生物學特性水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）

初次感染再次感染水痘

（多見于兒童）

帶狀皰疹（多成人和老人）

第四節(jié)皰疹病毒第78頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗水痘一帶狀皰疹的臨床癥狀典型，一般不需作微生物學診斷。必要時可檢查嗜酸性核內(nèi)包涵體和多核巨細胞細胞內(nèi)抗原（三）臨床意義

傳染源：

主要是患者，病毒經(jīng)呼吸道、口、咽、結(jié)膜、皮膚等處侵入人體1．人是水痘-帶狀皰疹病毒的唯一自然宿主2．帶狀皰疹是潛伏在體內(nèi)的VZV復(fù)發(fā)感染

第四節(jié)皰疹病毒第79頁,共105頁，2024年2月25日，星期天三、人巨細胞病毒（HCMV）和EB病毒一般是宮內(nèi)感染侵犯胎兒神經(jīng)系統(tǒng)、肝、腎等器官，人巨細胞病毒（HCMV）

EB病毒（EBV）與多種人類疾病相關(guān)如傳染性單核細胞增多癥、Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤等鼻咽癌和EB病毒關(guān)系密切，血清學檢查有高效價EB病毒抗原抗體可采集各種體液、分泌物等樣本進行病毒分離、抗原或核酸檢測

第四節(jié)皰疹病毒第80頁,共105頁，2024年2月25日，星期天第五節(jié)腸道病毒一、脊髓灰質(zhì)炎病毒（一）生物學特性1.形態(tài)結(jié)構(gòu)球形，直徑27～30nm，無包膜單股正鏈RNA病毒，核衣殼呈20面體立體對稱結(jié)構(gòu)第81頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（一）生物學性狀2.培養(yǎng)特性可在猴腎細胞,人胚腎細胞、人羊膜細胞中培養(yǎng)增殖引起CPE敏感的實驗動物有猴、猩猩等靈長類動物，將病毒接種于脊髓或腦內(nèi)容易發(fā)病，導(dǎo)致肢體麻痹第五節(jié)腸道病毒第82頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（一）生物學性狀3.抵抗力：在污水及糞便中可生存數(shù)月，耐酸、耐乙醚、乙醇，不被胃酸和膽鹽滅活。對紫外線、干燥敏感，對強氧化劑敏感較強第五節(jié)腸道病毒第83頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗1.標本：病人發(fā)病早期咽洗液、糞便、血液、腦脊液或組織2.鑒定（1）病毒的分離培養(yǎng)與鑒定第五節(jié)腸道病毒第84頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗2.鑒定（2）血清學診斷（3）其他

電子顯微鏡分子生物學技術(shù)第五節(jié)腸道病毒第85頁,共105頁，2024年2月25日，星期天二、輪狀病毒（一）生物學性狀1.形態(tài)結(jié)構(gòu)：直徑60～80nm，核心為雙鏈RNA，無包膜衣殼殼粒呈放射狀排列，負染色后電鏡下觀察形如車輪，故得名輪狀病毒（如右圖）電鏡下的輪狀病毒第五節(jié)腸道病毒第86頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（一）生物學特性2.培養(yǎng)特性組織培養(yǎng)十分困難需選用特殊的細胞株培養(yǎng)3.抵抗力較強在糞便中可存活數(shù)天至數(shù)周，耐乙醚，耐酸堿95％的乙醇是最有效的滅活劑第五節(jié)腸道病毒第87頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗1.標本采集病人發(fā)病5天內(nèi)的糞便，密封后送檢2.鑒定（1）電鏡觀察如見特殊車輪狀病毒顆粒即可診斷（右圖）第五節(jié)腸道病毒第88頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）微生物學檢驗2.鑒定（2）抗原檢測ELISA雙抗體夾心法（3）血清學檢查：IgM、IgG（4）分子生物學檢測技術(shù)第五節(jié)腸道病毒第89頁,共105頁，2024年2月25日，星期天（二）臨床意義1.傳播與流行輪狀病毒是由糞口路徑所傳染的，借由與接觸弄臟的手、弄臟的表面以及弄臟的物體來傳染，而且有可能經(jīng)由接觸傳染2.臨床表現(xiàn)輪狀病毒腸胃炎是一種從溫和到嚴重的疾病，有一些表征像是嘔吐，水狀腹瀉，以及低程度的發(fā)熱。在癥狀發(fā)生前大約會有兩天的潛伏期癥狀通常是從嘔吐開始，接著是四到八天的大量腹瀉。3.免疫預(yù)防感染后可產(chǎn)生中和抗體。第五節(jié)腸道病毒第90頁,共105頁，2024年2月25日，星期天三、其他腸道病毒（一）柯薩奇病毒與?？刹《究滤_奇病毒?？刹《九c脊髓灰質(zhì)炎病毒生物性狀類似；為球形無包膜單股正鏈RNA病毒；柯薩奇病毒在多種組織細胞中生長并產(chǎn)生CPE；?？刹《驹诤锬I細胞中增殖良好。柯薩奇病毒——血凝抑制試驗鑒定；?？刹《尽泻驮囼炶b定第五節(jié)腸道病毒第91頁,共105頁，2024年2月25日，星期天三、其他腸道病毒（二）新型腸道病毒1.腸道病毒70型引起急性出血性結(jié)膜炎又稱急性出血性結(jié)膜炎病毒2.新型腸道病毒71型引起手足口病流行第五節(jié)腸道病毒第92頁,共105頁，2024年2月25日，星期天一、朊粒（一）生物學特性1.形態(tài)與結(jié)構(gòu)：

朊蛋白（PrP)

2.抵抗力：第六節(jié)朊粒及其他病毒PrPscPrPc氨基酸序列完全一致空間構(gòu)象對蛋白酶K抗性致病性有差異強第93頁,共105頁，2024年2月25日，星期天正