免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用

免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第1頁教材高等醫(yī)學(xué)院?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)試驗教學(xué)系列教材?免疫學(xué)試驗?科學(xué)出版社，年6月主編朱道銀，吳玉章免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第2頁臨床醫(yī)學(xué)本科試驗內(nèi)容及安排試驗課內(nèi)容課時數(shù)錄像1凝集反應(yīng)4

2沉淀反應(yīng)4

有3免疫標(biāo)識技術(shù)4

有4免疫酶斑點試驗4

有免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第3頁非臨床醫(yī)學(xué)本科試驗內(nèi)容及安排試驗課內(nèi)容課時數(shù)錄像1凝集反應(yīng)4

2沉淀反應(yīng)4

有3免疫標(biāo)識技術(shù)4

有免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第4頁一、免疫學(xué)試驗注意事項1.學(xué)生進(jìn)試驗室必須穿白大褂，不得穿拖鞋。2.學(xué)生在試驗過程中應(yīng)恪守試驗操作規(guī)程和試驗室秩序，按要求完成試驗。3.學(xué)生應(yīng)愛護試驗設(shè)備、器材等公物，厲行節(jié)約；若損壞試驗用具，要及時匯報。4.需回收玻璃器材如載玻片等，放于指定陶瓷缸內(nèi)；廢棄使用具仍-入垃圾桶內(nèi)。5.試驗結(jié)束，清理好桌面，由班干部安排值日學(xué)生做清潔；做完清潔，關(guān)好水電、門窗，由帶教老師檢驗認(rèn)可后，值日學(xué)生方可離去。免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第5頁二、免疫試驗課目標(biāo)1.驗證所學(xué)理論知識。2.訓(xùn)練基礎(chǔ)操作技能，培養(yǎng)獨立工作能力。三、要求1.嚴(yán)厲認(rèn)真。2.多想、多看、多做。3.當(dāng)堂完成試驗匯報。免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第6頁四、Ag-Ab反應(yīng)相關(guān)知識血清學(xué)反應(yīng)——即體外進(jìn)行Ag-Ab反應(yīng)。因為機體絕大個別抗體存在于血清中，故稱之為血清學(xué)反應(yīng)。1.Ag-Ab反應(yīng)基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)（1）用已知抗體檢測未知抗原；（2）用已知抗原檢測未知抗體。免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第7頁

2.Ag-Ab反應(yīng)特點：（1）特異性（2）可逆性（3）可見性免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第8頁

3.影響Ag-Ab反應(yīng)原因（1）電解質(zhì)：0.85%NaCl（2）酸堿度：pH6～8（3）溫度：37℃免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第9頁4.Ag-Ab反應(yīng)類型：（1）凝集反應(yīng)（2）沉淀反應(yīng)（3）補體結(jié)合反應(yīng)（4）中和反應(yīng)（5）免疫標(biāo)識技術(shù)4大經(jīng)典免疫試驗免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第10頁試驗一凝集反應(yīng)免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第11頁一、目標(biāo)要求1.掌握血清學(xué)反應(yīng)概念、特點。2.熟悉凝集反應(yīng)概念、常見凝集反應(yīng)試驗方法及結(jié)果判定。3.了解凝集反應(yīng)原理、類型及其用途。免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第12頁二、試驗內(nèi)容1.直接凝集試驗(玻片法)

——ABO血型判定(每人做)2.間接凝集試驗

——類風(fēng)濕因子檢測(小組做)免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第13頁三、凝集反應(yīng)相關(guān)知識

（一）概念

顆粒性抗原(細(xì)菌、細(xì)胞等)與對應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見凝集物，稱為凝集反應(yīng)。顆粒性Ag又稱凝集原對應(yīng)Ab又稱凝集素免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第14頁·顆粒性抗原：光鏡下可見，肉眼觀呈渾濁懸液，如細(xì)菌、RBC等。·可溶性抗原：光鏡下無形態(tài)，肉眼觀呈澄清透明，如蛋白質(zhì)、多糖抗原等。免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第15頁（二）凝集反應(yīng)類型1.直接凝集反應(yīng)2.間接凝集反應(yīng)免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第16頁1.直接凝集

——玻片法已知Ab,測Ag，為定性試驗；用途：判定菌種、菌種分型、血型判定。

——試管法（如肥達(dá)氏反應(yīng)）已知Ag,測Ab，為半定量試驗；用途：輔助診療腸熱癥等。

免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第17頁2.間接凝集反應(yīng)RBC——間接血凝試驗用途：一些病毒感染和變態(tài)反應(yīng)患者血清中相抗體量。乳膠——間接乳膠凝集試驗用途：檢測類風(fēng)濕因子等。免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第18頁間接凝集抑制試驗——妊娠試驗（已知）（已知）（已知）（已知）免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第19頁反向間接凝集試驗——一些傳染病和原發(fā)性肝癌早期診療。免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第20頁四、試驗操作內(nèi)容

（一）玻片法——

ABO血型判定（每人做）用已知血型Ab,測未知血型Ag；為定性試驗。

ABO血型系統(tǒng)血型紅細(xì)胞表面血型Ag血清中血型Ab

A型A抗B

B型B抗A

AB型A、B

—O型—抗A、抗B

免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第21頁1.材料已知Ab：標(biāo)準(zhǔn)血清——抗A、抗B待測Ag：紅細(xì)胞血型抗原免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第22頁2.操作步驟

(1)無菌操作采血(無名指尖)于NS試管→形成約2～5%紅細(xì)胞(RBC)懸液；

(2)準(zhǔn)備1張載波片；

(3)加血清(Ab)各1滴；

(4)加RBC各1滴；

(5)搖擺混勻；

(6)結(jié)果判斷(10-15分鐘后)。免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第23頁3.結(jié)果判斷凝集者：出現(xiàn)紅色顆粒狀或塊狀凝集物；不凝集者：呈紅色均勻混濁。(1)若抗A凝集，抗B不凝集——

A型血(2)若抗A不凝集，抗B凝集——

B型血(3)若抗A、抗B均凝集——

AB型血(4)若抗A、抗B均不凝集——

O型血在白背景上觀察凝集不凝集免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第24頁

4.注意事項

(1)適度RBC懸液濃度，約2-5%；

(2)抗A和抗B不能混用；

(3)在白色背景上觀察效果很好。免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第25頁（二）間接乳膠凝集試驗

—類風(fēng)濕因子檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中存在：變性IgG—Ag抗變性IgG抗體(類風(fēng)濕因子)—Ab

臨床上用檢測類風(fēng)濕因子以輔助診療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第26頁1.材料已知Ag：致敏乳膠(乳膠顆粒表面有變性IgG)待測Ab：待檢血清中類風(fēng)濕因子待測Ab已知Ag免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第27頁

2.檢測步驟：(1)取黑底紙片三片；

(2)加待測血清、陽性和陰性對照血清各1滴；(3)各加1滴致敏乳膠,用牙簽混勻；(4)5分鐘后觀察結(jié)果，以黑背景觀察為佳。陽性者現(xiàn)象：呈乳白色細(xì)沙狀（乳膠凝集）；陰性者現(xiàn)象：呈乳白色均勻混濁。免疫學(xué)實驗供臨床醫(yī)學(xué)本科用第28頁

完成試驗匯報試驗一凝集反應(yīng)

一、直接凝集反應(yīng)（玻片法）——

ABO血型判定1.材料2.操作步驟3.結(jié)果判斷（自己血型）4.試驗討論

二、