RKTG基因剔除小鼠模型的建立及功能分析開題報(bào)告

RKTG基因剔除小鼠模型的建立及功能分析開題報(bào)告一、選題背景RKTG基因（RafKinaseTrappingtoGolgi）又稱FLJ22609，是在人類小肺癌組織中篩選到并克隆的一種新的抑癌基因。研究發(fā)現(xiàn)，RKTG基因能夠通過引導(dǎo)Raf-1激酶到高爾基體分泌途徑中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體中轉(zhuǎn)運(yùn)，從而抑制Raf-1激酶的活性，從而形成RKTG蛋白的保守功能。RKTG基因的缺失或低表達(dá)與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)。為了研究RKTG基因的生物學(xué)功能和機(jī)制，目前已經(jīng)建立了多種RKTG基因敲除小鼠模型。然而，這些模型中的某些基因缺失影響了小鼠正常的發(fā)育和生長(zhǎng)，導(dǎo)致了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的誤差。因此，需要建立一種新的完全敲除RKTG基因的小鼠模型，以更加準(zhǔn)確地研究RKTG基因的生物學(xué)功能和機(jī)制。二、研究目的和意義本研究旨在利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)，建立一種完全敲除RKTG基因的小鼠模型，并對(duì)此模型進(jìn)行功能分析，從而確定RKTG基因在小鼠生長(zhǎng)和發(fā)育中的生物學(xué)功能和機(jī)制。本研究將為深入理解RKTG基因的功能、探討其在腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用提供新的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。三、研究?jī)?nèi)容和方法研究?jī)?nèi)容：（1）使用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除小鼠的RKTG基因。（2）分別采用Westernblot和RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)敲除后小鼠體內(nèi)RKTG基因蛋白和RNA的表達(dá)情況，確定敲除效果。（3）對(duì)敲除后的小鼠進(jìn)行生長(zhǎng)和發(fā)育史跡的觀察，通過測(cè)量小鼠體重、身長(zhǎng)、頭臂長(zhǎng)等指標(biāo)評(píng)估敲除RKTG基因?qū)π∈笊L(zhǎng)發(fā)育的影響。（4）利用Westernblot和免疫組織化學(xué)等技術(shù)檢測(cè)敲除RKTG基因?qū)π∈篌w內(nèi)信號(hào)通路、細(xì)胞周期、凋亡等方面的影響。研究方法：本研究將采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)建立RKTG基因完全敲除的小鼠模型。敲除后，利用Westernblot和RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)小鼠體內(nèi)RKTG基因蛋白和RNA的表達(dá)情況，確定敲除效果。同時(shí)，對(duì)敲除后的小鼠進(jìn)行生長(zhǎng)和發(fā)育史跡的觀察，通過測(cè)量小鼠體重、身長(zhǎng)、頭臂長(zhǎng)等指標(biāo)評(píng)估敲除RKTG基因?qū)π∈笊L(zhǎng)發(fā)育的影響。最后，利用Westernblot和免疫組織化學(xué)等技術(shù)檢測(cè)敲除RKTG基因?qū)π∈篌w內(nèi)信號(hào)通路、細(xì)胞周期、凋亡等方面的影響。四、預(yù)期成果和研究難點(diǎn)預(yù)期成果：本研究將成功建立一種完全敲除RKTG基因的小鼠模型，并對(duì)此模型進(jìn)行生長(zhǎng)和發(fā)育指標(biāo)的觀察和免疫學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，從而深入探討RKTG基因在小鼠中的生物學(xué)功能和機(jī)制。研究難點(diǎn)：（1）CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)的應(yīng)用和優(yōu)化。（2）建立RKTG基因完全敲除的小鼠模型。（3）對(duì)小鼠的生長(zhǎng)和發(fā)育進(jìn)行指標(biāo)評(píng)估。（4）對(duì)成年小鼠的信號(hào)通路、細(xì)胞周期、凋亡等方面進(jìn)行免疫學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。五、可行性分析本研究采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)建立RKTG基因完全敲除的小鼠模型，該技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域。同時(shí)，對(duì)小鼠的生長(zhǎng)和發(fā)育進(jìn)行指標(biāo)評(píng)估，以