探究活動：培養(yǎng)基的配置

3/4探究活動：培養(yǎng)基的配置1、學生用活動器材：材料：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、氯化鈉、NaOH、清水用具：天平、牛角勺、量筒、滴管、玻璃棒、250ml燒杯、50ml燒杯、三角架、石棉網(wǎng)、酒精燈、火柴、PH試紙、錐形瓶、平板培養(yǎng)皿、試管、棉塞、線繩、報紙、電爐子、高壓滅菌鍋2、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方牛肉膏0.3g蛋白胨1gNaCL0.5g瓊脂2gpH7.0～7.5水100ml3、配制培養(yǎng)基的過程稱量→溶化→調(diào)節(jié)pH值→過濾→分裝→塞棉塞和包扎→滅菌。①稱量：按照培養(yǎng)基配方，準確稱取各成分放入大燒杯中。技能：a.天平的使用：左物右碼b.一般藥品的稱量：各墊一張大小相同的紙c.腐蝕性、粘稠藥品的稱量：用燒杯等玻璃器皿稱量，先稱空容器的質(zhì)量②溶化：將培養(yǎng)基各種成分按配方稱量好后，分別放入燒杯中，加入100ml水，在酒精燈上加熱攪拌至完全溶化后再放瓊脂。技能：a.攪拌：玻璃棒按一個方向順序攪拌，不能碰觸燒杯內(nèi)壁。b.有些原料不易溶解，如牛肉膏等，可先在小燒杯中加水少許，加熱溶解后倒入大燒杯中，但總水量要控制在100ml。c.瓊脂的溶化：其余成分全部溶化后再放瓊脂。在瓊脂溶化過程中要不斷攪拌，并控制火力，防止培養(yǎng)基溢出或燒焦。d.培養(yǎng)基完全溶化后要補足水分。③調(diào)酸堿度（pH值）：先用pH試紙進行測量。如果偏酸或偏堿，可用10％HCI和10％NaOH調(diào)整pH值至所需范圍。技能：a.PH值的測定：用潔凈干燥的玻璃棒蘸取少量，在試紙一端點一下既可。b.調(diào)PH值時，要逐滴滴入NaOH溶液，邊滴邊攪拌，并隨時用PH試紙測量。④過濾：培養(yǎng)基中如有些成分沒完全溶解，常需過濾。常用濾紙、紗布（疊成6層）或紗布間加脫脂棉花過濾。加瓊脂的培養(yǎng)基要趁熱過濾。⑤分裝：固體培養(yǎng)基都要趁熱分裝，各容器的量如下：錐形瓶：一般不超過1/2；試管：一般裝管高的1/5或1/4；倒平板一般是用時再倒。技能：分裝時應避免培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞而引起污染。⑥塞棉塞和包扎：分裝后試管口及瓶口都要塞好棉塞。做棉塞用普通棉花，其形狀、大小、松緊與管口和瓶口要吻合，棉塞1/3露于管外，2/3塞進管內(nèi)。棉塞的制作和塞入的正確方法見圖4-7。棉塞塞好后，外包厚紙（牛皮紙一層或用舊報紙二層），用繩捆扎。包扎的作用是避免滅菌時冷凝水淋濕棉塞，并防止接種前培養(yǎng)基的水分散失或污染雜菌。⑦滅菌：經(jīng)過分裝、包扎的培養(yǎng)基應立即進行滅菌。一般采用高壓蒸汽滅菌時，在15磅/英寸2蒸汽壓、121℃技能：a.打開滅菌鍋蓋，向鍋內(nèi)加入適量水。b.將制備好的培養(yǎng)基和需要滅菌的其它用品，一起放入高壓滅菌鍋中（裝有培養(yǎng)基和水的注意要立著放穩(wěn)）。不要放得太擠，以免影響蒸汽流通。c.蓋好鍋蓋，采用對角形式均勻擰緊蓋上的螺旋，使鍋密閉。打開放氣閥，開始加熱。d.當鍋內(nèi)產(chǎn)生蒸汽后，放氣閥開始有熱氣排出，自開始產(chǎn)生熱氣后約3分鐘（鍋內(nèi)冷空氣已排盡），再關(guān)閉放氣閥。此時鍋內(nèi)溫度隨蒸汽壓力增高而上升。待壓力上升到15磅/英寸2，溫度達到120～121℃e.停止加熱，待壓力下降至零時，打開放氣閥，排出殘留蒸汽，打開鍋蓋，取出滅菌物品。注意：滅菌過程中，一定注意排凈鍋內(nèi)的冷空氣，冷空氣排不凈時，鍋內(nèi)溫度達不到滅菌溫度，會影響滅菌效果；操作時，必須嚴格按操作規(guī)程操作，否則容易發(fā)生意外事故，應在教師指導下操作。⑧倒平板和擺斜面：制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基須趁培養(yǎng)基未凝固時進行。4、制作斜面培養(yǎng)基。在實驗臺上放1支長0.5-1米左右的木條，厚度為1厘米左右。將試管頭部枕在木條上，使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜，凝固后即成斜面培養(yǎng)基。5、制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實驗臺上，點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手打開培養(yǎng)皿蓋，右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿約倒入10