實(shí)驗(yàn)五大腸桿菌與沙門(mén)氏菌

關(guān)于實(shí)驗(yàn)五大腸桿菌與沙門(mén)氏菌實(shí)驗(yàn)原理各種細(xì)菌在其新陳代謝中，由于利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力有所差異，排泄的代謝產(chǎn)物亦不同，所以利用這點(diǎn)進(jìn)行生化試驗(yàn)，可達(dá)到鑒定細(xì)菌種的目的，尤其在鑒定腸道桿菌時(shí)，生化試驗(yàn)是極其常用的一種方法。第2頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、目的要求學(xué)習(xí)常用的生化實(shí)驗(yàn)方法；掌握大腸桿菌與沙門(mén)氏菌的主要生化特點(diǎn)。第3頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天個(gè)體為桿狀散在或成對(duì)G－二、背景知識(shí)介紹大腸桿菌中等大小0.4-0.7×2-3μm大腸埃希氏菌是這個(gè)菌群的代表成原；與廣泛的獸醫(yī)臨床病征有關(guān)，如：犢牛的腸道感染和水瀉；幼豬的水瀉和腹瀉，斷奶仔豬水腫病；狗的尿道感染；雞：臍炎、眼炎、腸炎、肝周炎、肺炎、氣囊炎、腹膜炎、肉芽腫等。

第4頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天第5頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天第6頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天個(gè)體為桿狀散在或成對(duì)G－沙門(mén)氏菌是一大群寄生于人和動(dòng)物腸道內(nèi)、生化特性和抗原結(jié)構(gòu)相似，G－，兼性厭氧的無(wú)芽胞直桿菌。在醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)和公共衛(wèi)生上均十分重要：絕大多數(shù)沙門(mén)氏菌對(duì)人和動(dòng)物有致病性；能致人和動(dòng)物多種不同臨床表現(xiàn)的沙門(mén)氏菌病；人類(lèi)食物中毒的主要病原之一。第7頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天第8頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天傷寒沙門(mén)氏菌鼠傷寒沙門(mén)氏菌除雛沙門(mén)和雞沙門(mén)氏菌外，其余各菌具有周生鞭毛。第9頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、實(shí)驗(yàn)材料常規(guī)接種工具：接種棒、酒精燈等革蘭氏染色液、玻片、滴管等菌種:大腸桿菌的普通瓊脂（或麥康凱）培養(yǎng)物（1個(gè)/組）沙門(mén)氏菌的普通瓊脂（或麥康凱）培養(yǎng)物（1個(gè)/組）大腸桿菌、沙門(mén)氏菌的鄧亨氏蛋白胨水培養(yǎng)物；大腸桿菌、沙門(mén)氏菌的葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物。培養(yǎng)基：三糖鐵斜面（1支/人）生化管：葡、乳、麥、甘、蔗、H2S、尿、枸（1套/人）試劑：吲哚試劑、M.R試劑、V-P試劑等第10頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容觀察大腸桿菌在普通瓊脂上的生長(zhǎng)表現(xiàn)；大腸桿菌在麥康凱平板上生長(zhǎng)表現(xiàn)；沙門(mén)氏菌在普通瓊脂上的生長(zhǎng)表現(xiàn)；沙門(mén)氏菌在麥康凱平板上生長(zhǎng)表現(xiàn)；大腸桿菌與沙門(mén)氏菌的革蘭氏染色、鏡檢；記錄結(jié)果。第11頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天三糖鐵瓊脂接種挑取待試菌菌落穿刺接種三糖鐵底部并涂布于斜面；置37℃培養(yǎng)。第12頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天生化管接種培養(yǎng)糖發(fā)酵試驗(yàn)：葡乳麥甘蔗H2S試驗(yàn)；尿素酶試驗(yàn)；枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)。葡乳麥甘蔗H2S尿枸第13頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天葡乳麥甘蔗H2S尿枸大腸桿菌沙門(mén)氏菌大腸桿菌沙門(mén)氏菌置37℃培養(yǎng)第14頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天吲哚試驗(yàn)接種大腸桿菌或沙門(mén)氏菌于5mL鄧亨氏蛋白胨水中，置37℃培養(yǎng)3-5d；靜置分層后，沿試管壁加入吲哚試劑1mL；上層變?yōu)榧t色者為陽(yáng)性反應(yīng)。乙醚混勻分層吲哚試劑陽(yáng)性陰性第15頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天吲哚試驗(yàn)原理蛋白質(zhì)中的色氨酸有些細(xì)菌如大腸埃希氏菌吲哚對(duì)位二甲基氨基苯甲醛+玫瑰吲哚紅色①試劑配方一：對(duì)二甲基氨基苯甲醛 1g無(wú)水乙醇 95mL濃鹽酸 20mL②試劑配方二：對(duì)二甲基氨基苯甲醛5g戊醇（或異戊醇）75mL濃鹽酸 25mL先用乙醇溶解試劑后加鹽酸，避光保存。第16頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天M.R試驗(yàn)接種大腸桿菌或沙門(mén)氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培養(yǎng)3-5d）；于培養(yǎng)物中加入幾滴試劑；變紅色者為陽(yáng)性反應(yīng)，桔紅到黃色則為陰性。M.R試劑陽(yáng)性陰性第17頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天V-P試驗(yàn)接種大腸桿菌或沙門(mén)氏菌于1mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培養(yǎng)3-5d）；于培養(yǎng)物中加入0.5mLV-P甲液；隨后加V-P乙液0.5mL，輕搖；靜置10-15min。15min內(nèi)變紅者為陽(yáng)性。V-P甲液V-P乙液陽(yáng)性陰性第18頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天M.R與V-P試驗(yàn)原理M.R試驗(yàn)：甲基紅是一種pH指示劑：當(dāng)細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸且產(chǎn)酸量大時(shí)；在加入甲基紅指示劑后顯紅色為陽(yáng)性。pH4.4-6.2

紅→黃葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇2,3-丁二烯醇某些細(xì)菌能發(fā)酵二乙酰堿V-P試驗(yàn)：+胨中的胍基化合物注意：通常M.R和V-P試驗(yàn)是密切相關(guān)：如果一個(gè)微生物M.R是陽(yáng)性，則V-P是陰性；或者相反。粉紅色化合物+第19頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天M.R試劑V-P試劑甲基紅0.02g95％酒精60mL蒸餾水40mL甲液：α萘酚酒精溶液（α萘酚5g無(wú)水乙醇100mL）乙液：KOH溶液（KOH40g，水100ml）將甲液和乙液分裝棕色瓶中，于4-10℃保存。第20頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天五、結(jié)果觀察大腸桿菌的生長(zhǎng)表現(xiàn)普通瓊脂：形成圓形、光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色菌落，直徑約2~3mm；麥康凱：瓊脂上形成紅色菌落較大的菌落。第21頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天三糖鐵瓊脂斜面產(chǎn)酸（黃色）底部產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)氣＋H2S－反應(yīng)模式表示：A／A＋；－第22頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)表現(xiàn)普通瓊脂：生長(zhǎng)不良；麥康凱：瓊脂上形成灰白色菌落。第23頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天三糖鐵瓊脂斜面產(chǎn)堿（紅色）底部產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)氣－H2S＋反應(yīng)模式表示：K／A＋(－)；＋(－)第24頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天細(xì)菌的染色、鏡檢大腸桿菌沙門(mén)氏菌G－直桿菌，大小0.4-0.7×2-3μm，無(wú)芽胞，兩端鈍圓，散在或成對(duì)。第25頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天生化管接種培養(yǎng)葡乳麥甘蔗H2S尿枸葡乳麥甘蔗H2S尿枸大腸桿菌沙門(mén)氏菌⊕⊕⊕⊕⊕/-－－－⊕－⊕⊕－＋

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