GB-T生物產(chǎn)品降解有機磷農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范征求意見稿

ICS07.080

A20/39

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXXX—XXXX

生物產(chǎn)品降解有機磷農(nóng)藥功效評價

技術(shù)規(guī)范

Technicalspecificationsforefficacyevaluationofdegradationof

organophosphorouspesticidebybiologicalproducts

（征求意見稿）

201X-XX-XX發(fā)布201X-XX-XX實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

中國國家標(biāo)準(zhǔn)1化管理委員會

發(fā)布

2

生物產(chǎn)品降解擬有機磷農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了生物產(chǎn)品降解有機磷類農(nóng)藥的功效評價原理、試劑與材料、儀器設(shè)備與器

具、分析步驟和結(jié)果分析。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于微生物和酶生物產(chǎn)品降解有機磷農(nóng)藥效果評價。

2規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容引用了下列文件和其中的條款，凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本

適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB23200.91有機磷農(nóng)藥的氣相色譜測定方法

GB/T6682分析實驗室用水

GB/T15818培養(yǎng)基配置方法

NY/T761-2008降解產(chǎn)物有機磷農(nóng)藥的提取方法

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文本。

3.1

生物產(chǎn)品biologicproducts

利用生物技術(shù)獲得的產(chǎn)品。

3.2

有機磷農(nóng)藥organophosphoruspesticides

含磷元素的有機化合物農(nóng)藥。

3.3

降解效果degradationeffect

生物產(chǎn)品降解擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的能力。

4原理

用生物產(chǎn)品對有機磷農(nóng)藥進行處理，采用液液萃取法萃取反應(yīng)體系中的有機磷農(nóng)藥，經(jīng)

3

萃取、濃縮、凈化、定容后，通過配有火焰光度檢測器的氣相色譜儀檢測，外標(biāo)法定量，計

算生物制品對有機磷農(nóng)藥的降解效率。

5儀器和設(shè)備

5.1氣相色譜儀：配有火焰光度檢測器（FPD磷濾光片）。

5.2旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：轉(zhuǎn)速20-280rpm。

5.3微量進樣器：0.5-500ul。

5.4恒溫振蕩器：0-300r/min；溫控范圍，室溫-100℃。

5.5分光光度計：波長330nm-800nm。

5.6pH計：精度0.1。

5.7高速冷凍離心機：轉(zhuǎn)速可達(dá)10000rpm以上。

5.8分析天平：精度0.0001g。

6試劑和材料

所有試劑除另有說明外，均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。

6.1有機磷農(nóng)藥

有機磷農(nóng)藥純度≥99％。

6.2基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基

按照GB/T15818中方法配制

6.30.01mol/L磷酸鹽緩沖液，pH8.0

分別配制0.2mol/L的Na2HPO4和0.2mol/L的NaH2PO4，量取Na2HPO461mL,NaH2PO439

mL,用3mol/L的稀鹽酸和1mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH備用。

7分析步驟

7.1試驗設(shè)計

不同類型生物產(chǎn)品降解有機磷類農(nóng)藥效果試驗設(shè)計應(yīng)符合表1要求。

表1生物產(chǎn)品降解有機磷類農(nóng)藥效果試驗設(shè)計

4

產(chǎn)品種類

項目

微生物產(chǎn)品酶產(chǎn)品

1.供測樣品

處理設(shè)計2.失活樣品

3.空白對照

按結(jié)構(gòu)選擇5種類型：一硫代磷酸酯，甲基對

有機磷農(nóng)藥選擇硫磷；二硫代磷酸酯，甲拌磷；磷酸酯，敵敵畏；

膦酸酯，敵百蟲；磷酰胺或硫代磷酰胺，甲胺磷

首先將有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用丙酮配制成儲

農(nóng)藥處理備溶液，4℃保存?zhèn)溆?，試驗時稀釋成一定濃度的

工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

重復(fù)次數(shù)不少于3次

降解反應(yīng)條件按正交試驗結(jié)果確定

7.2供試微生物產(chǎn)品試驗實施

7.2.1培養(yǎng)基制備

選擇基礎(chǔ)培養(yǎng)基，或根據(jù)微生物特殊生長需要對培養(yǎng)基進行改良。

7.2.2供試樣品處理

塊狀固體產(chǎn)品應(yīng)進行研磨處理。

7.2.3失活樣品處理

取供試的固體或液體微生物樣品進行121oC，30min殺菌處理。

7.2.4最佳反應(yīng)體系確定

設(shè)計正交試驗，影響因素宜選取微生物添加量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)轉(zhuǎn)速、反應(yīng)時間、底物

濃度等，確定最佳反應(yīng)體系條件。

7.2.5降解試驗

取250mL三角瓶9個，空白樣3個，供試樣品瓶3個，失活樣品瓶3個。按照最佳反

應(yīng)體系確定的底物濃度，制備底物溶液，滅菌后備用。然后根據(jù)微生物添加量，制備成反應(yīng)

體系為100mL的培養(yǎng)液，在最佳反應(yīng)體系條件下進行降解反應(yīng)。

7.3供測酶試驗實施

7.3.1供試樣品處理

5

固體酶產(chǎn)品應(yīng)進行研磨處理，稱取一定質(zhì)量的供測固體酶粉，采用不同pH的磷酸鹽緩沖

液按要求稀釋為不同濃度（g/mL）備用；若供測樣品為液體，用不同pH的磷酸鹽緩沖液按要

求稀釋為不同濃度（mL/mL）備用。

7.3.2失活樣品處理

取供試的固體或液體酶樣品在100oC環(huán)境下進行30min的去酶活處理。

7.3.3最佳反應(yīng)條件確定

設(shè)計正交實驗，影響因素宜選擇酶濃度、底物濃度、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、pH值等，

確定最佳反應(yīng)體系條件。

7.3.4降解試驗

取25mL離心管9個，空白樣3個，供試樣品瓶3個，失活樣品瓶3個。按照最佳反

應(yīng)體系確定的微生物添加量、底物濃度，制備成反應(yīng)體系為10mL的反應(yīng)液，在最佳反應(yīng)

體系條件下進行降解反應(yīng)。

7.4濃度測定

反應(yīng)液按照NY/T761要求進行處理，然后按照GB23200.91要求進行測定。

8結(jié)果分析

8.1結(jié)果計算

將將誒率按照式（1）計算：：

..............................(1)

(?????)???????(?????)

?=??×100%

式中：

R——降解率（%）；

Xi——底物原始濃度（mg/L）；

Xa——為供試樣品降解反應(yīng)終點底物濃度（mg/L）；

Xb——為失活樣品降解反應(yīng)終點底物濃度（mg/L）；

Xc——為空白樣品降解反應(yīng)終點底物濃度（mg/L）。

以平行樣的平均值為最終的降解率值，計算結(jié)果保留到小數(shù)點后兩位。

8.2結(jié)果判定

以降解率的大小評價被測試生物產(chǎn)品的降解功效：降解率大于等于80%，小于100%時，

降解效果為好；降解率大于等于60%，小于80%時，降解效果為良好；降解率大于等于40%，

小于60%時，降解效果為較好；降解率大于等于20%，小于40%時，降解