口蹄疫疫苗的質(zhì)量控制及檢驗

01口蹄疫疫苗的質(zhì)量控制（一）原輔料、包裝材料、標簽的質(zhì)量控制倉庫應(yīng)由專人負責(zé)對進廠的原輔料進行驗收、保管、收放管理，并定期填寫原輔材料質(zhì)量報告。車間應(yīng)由專人負責(zé)車間用的原輔材料、包裝材料、標簽的領(lǐng)取、驗收和使用。（二）生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制范圍應(yīng)由質(zhì)量管理部門和生產(chǎn)部門共同制定，并形成書面技術(shù)檔案。為了保證生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制得以實施，質(zhì)量管理部門和生產(chǎn)部門有必要對具體實施的方法加以規(guī)定。生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制點由疫苗生產(chǎn)企業(yè)根據(jù)生產(chǎn)工藝和工序?qū)|(zhì)量影響重要程度來決定。檢查或檢驗后，應(yīng)填寫檢查或檢驗記錄。生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制與監(jiān)督工作由車間(兼職質(zhì)監(jiān)員)與質(zhì)量管理部門(專職質(zhì)監(jiān)員)共同完成。檢驗性的質(zhì)量控制由質(zhì)量管理部門在生產(chǎn)過程中實施。各級專職和兼職質(zhì)量監(jiān)督員，要按照疫苗的工藝要求和質(zhì)量標準，檢查半成品(中間體)、成品質(zhì)量和工藝衛(wèi)生情況并做好記錄，填寫半成品及成品的質(zhì)量報告。（三）批生產(chǎn)記錄和批檢驗記錄的管理質(zhì)量管理部負責(zé)對批生產(chǎn)記錄和批檢驗記錄的審核，以及配料、稱量過程的復(fù)核，各工序生產(chǎn)記錄、清場記錄、中間產(chǎn)品質(zhì)量檢驗結(jié)果、偏差處理、成品檢驗結(jié)果的復(fù)核等。（四）產(chǎn)品出廠后的質(zhì)量監(jiān)控（1）處理退貨質(zhì)量管理部門應(yīng)對退貨的產(chǎn)品進行復(fù)檢、確認，重大問題會同有關(guān)部門分析原因，提出處理意見和防范措施，記錄存檔，并向企業(yè)負責(zé)人提交書面報告。（2）用戶訪問質(zhì)量管理部門必須按規(guī)定要求，組織開展對用戶的訪問或發(fā)放產(chǎn)品征詢質(zhì)量改進意見單，重視用戶對產(chǎn)品質(zhì)量的意見，制訂整改措施并監(jiān)督實施。（3）留樣觀察質(zhì)檢部門應(yīng)設(shè)立留樣觀察室，根據(jù)留樣觀察制度，明確規(guī)定留樣品種、批數(shù)、數(shù)量、復(fù)查項目、復(fù)查期限、留樣時間等．指定專人進行留樣觀察，填寫留樣觀察記錄。產(chǎn)品留樣期間如有異常質(zhì)量變化，應(yīng)填寫留樣樣品質(zhì)量變化通知單，報告質(zhì)量管理部門負責(zé)人，由部門負責(zé)人報告有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)及部門分析原因研究措施，并監(jiān)督執(zhí)行。（4）穩(wěn)定性試驗質(zhì)量管理部門應(yīng)開展對原料、中間產(chǎn)品及成品的質(zhì)量穩(wěn)定性考核，根據(jù)考核結(jié)果來確定物料的貯存期，為制定藥品有效期提供依據(jù)。02口蹄疫滅活疫苗的質(zhì)量檢驗質(zhì)量檢驗應(yīng)包括生產(chǎn)前期的相關(guān)檢驗、生產(chǎn)過程的中間檢驗及產(chǎn)品最終檢驗和試驗。生產(chǎn)準備和生產(chǎn)過程中間的檢驗指原輔材料、包裝材料、工藝用水、中間產(chǎn)品的檢驗。所有生產(chǎn)過程涉及的物料必須進行檢驗，檢驗合格并提供文件證明才可以投放到生產(chǎn)工序中。最終檢驗和試驗成品必須在各工序的檢驗和試驗合格后才能進行成品的最終檢驗和試驗，檢驗合格并提供文件證明，且有關(guān)文件得到認可后成品才能出廠。滿足質(zhì)量標準規(guī)定全部要求的為合格品，反之為不合格品。（一）取樣取樣是指按取樣規(guī)定抽取一定數(shù)量的能代表全體物料的樣本來進行質(zhì)量檢驗，檢驗的結(jié)論才可信。取樣工作由質(zhì)量管理部門負責(zé)，由專職的取樣員取樣。1.取樣的原則（1）保證樣品的代表性，而且不影響所取容器內(nèi)物料的原始質(zhì)量，著重需要考慮微生物和理化方面的影響因素。（2）取樣時盡可能將物料移至指定的取樣區(qū)。取樣環(huán)境的空氣潔凈度級別應(yīng)與生產(chǎn)要求一致。（3）對原輔料、半成品(中間體)、成品、副產(chǎn)品及包裝材料都應(yīng)制定取樣辦法，對取樣環(huán)境的潔凈要求，取樣人員、取樣容器、取樣的部位、順序、取樣方法、取樣量、樣品混合方法、取樣容器的清洗、保管、必要的留樣時間，以及對無菌或有毒物料在取樣時的特殊要求都應(yīng)有明確的規(guī)定，否則會失去取樣的意義或影響檢驗結(jié)果的真實性。2.取樣的程序（1）將盛放物料的容器移至取樣區(qū)。（2）按清潔規(guī)定清潔并隨機取樣，取樣數(shù)量應(yīng)參照有關(guān)國家標準。（3）樣品容器上貼簽，注明必要的內(nèi)容，如：批號；原料名稱；取樣員簽名、取樣日期。（4）重新關(guān)閉容器，并注明“已取樣”。（5）將容器放回原處，并填寫取樣記錄。（二）檢驗1.質(zhì)量檢驗標準操作規(guī)程的編寫（1）原輔料(包括工藝用水)、半成品、成品及包裝材料的檢驗操作規(guī)程由質(zhì)檢室根據(jù)質(zhì)量標準組織編制，經(jīng)質(zhì)管負責(zé)人審查，技術(shù)副廠長或總工程師批準、簽章后，按規(guī)定日期起執(zhí)行。（2）檢驗操作規(guī)程內(nèi)容應(yīng)包括：檢品名稱(中、外文名)、代號、結(jié)構(gòu)式、分子式、分子量、性狀、鑒別、檢驗項目與限度及操作方法等。（3）滴定溶液、標準液、指示劑、試劑、酸堿度、熱原、生物效價等單項檢驗操作方法，參閱《中華人民共和國獸藥典》或有關(guān)規(guī)定。2.檢驗獸藥生產(chǎn)中所有的原輔料、包裝材料、半成品、成品、工藝用水的檢驗工作均由質(zhì)量管理部門按質(zhì)量標準規(guī)定組織實施。在口蹄疫疫苗生產(chǎn)中一般有四個最重要的質(zhì)量查證點：原輔材料檢驗、病毒效價檢測、滅活檢測、成品檢驗。（1）原輔料檢驗。對于購入的原輔料，應(yīng)著重進行理化檢驗和無菌檢驗。檢驗結(jié)果應(yīng)與供應(yīng)原料的生產(chǎn)廠家提供的檢驗報告進行核對，如雙方的檢驗結(jié)果相差較大(如供應(yīng)廠家檢驗報告結(jié)論是合格，而購貨廠家檢驗報告結(jié)論是不合格；或雖均為合格結(jié)論，但檢驗數(shù)據(jù)相差較大)時，質(zhì)量管理部門必須仔細檢查所收到供應(yīng)廠家的檢驗證書的一致性和完整性。并有必要與供應(yīng)廠家進行聯(lián)系，共同分析檢驗結(jié)論不一致的原因，以取得雙方檢驗方法、檢驗結(jié)果的一致性。（2）包裝材料的檢驗。包裝材料檢驗項目的內(nèi)容主要包括材質(zhì)、外觀、規(guī)格和理化性質(zhì)。直接接觸藥品的包裝材料、容器，還要對其衛(wèi)生狀況進行檢查。檢驗后質(zhì)檢員要填寫檢驗報告。包裝材料經(jīng)檢驗合格后，由質(zhì)管部門出具合格證書并貼上合格的標志或標簽，方可使用。不合格品貼上不合格的標志，并在較短的時間內(nèi)退回供應(yīng)廠家。（3）半成品的檢驗。半成品的檢驗是在生產(chǎn)中進行的。如病毒液的pH、顏色、病毒含量等項目的檢驗；疫苗灌裝中要進行裝量檢查，灌裝后要進行裝量和穩(wěn)定性的檢查；印字后要進行內(nèi)容、字跡清晰度的檢驗；裝盒后要對裝入盒內(nèi)支數(shù)的抽查等。其中最重要的是病毒效價檢測和滅活檢測（安全性檢驗和無菌檢驗）。半成品的每一步檢驗，都應(yīng)該由專職質(zhì)檢員來完成，經(jīng)檢驗合格并由質(zhì)檢員簽字后，方可進入下一步的生產(chǎn)程序。①牛、羊口蹄疫疫苗用病毒抗原效價的檢測：將待測效價的口蹄疫病毒液用無血清細胞培養(yǎng)液作十倍梯度稀釋，分別標記為10-1、10-2、……10-8。取10-6、10-7、10-83個稀釋度的病毒液分別接種到培養(yǎng)24?48小時生長良好的細胞管中（或乳鼠）。將接毒后的細胞管置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天定時觀察兩次。根據(jù)細胞的病變情況做好記錄，連續(xù)觀察72小時。按各稀釋度細胞病變情況計算病毒的TCID50，TCID50應(yīng)≥7。②豬口蹄疫疫苗用病毒抗原效價的檢測：將待測效價的口蹄疫病毒液用無血清細胞培養(yǎng)液作十倍梯度稀釋，分別標記為10-1、10-2、……10-8。取10-6、10-7、10-83個稀釋度的病毒液分別接種于2日齡乳鼠（或細胞），每個稀釋度接種4只，每天定時觀察兩次。根據(jù)小鼠病變及死亡情況做好記錄，連續(xù)觀察72小時。按各稀釋度小鼠死亡情況計算病毒的LD50，LD50應(yīng)≥7。③口蹄疫抗原滅活后的無菌檢驗方法：參考《中華人民共和國獸藥典》。④口蹄疫抗原滅活后的安全性檢驗方法：a.將滅活后的病毒液頸部皮下接種3～4日齡乳鼠4～5只，0.2mL/只，并設(shè)空白對照，觀察7天，乳鼠不得出現(xiàn)口蹄疫癥狀和發(fā)病死亡。b.將滅活后的病毒液接種不帶母源抗體未經(jīng)免疫的30～40日齡仔豬，每頭仔豬兩側(cè)耳根后接種5mL，觀察10天應(yīng)不出現(xiàn)口蹄疫癥狀和死亡。（4）成品的檢驗。口蹄疫滅活疫苗在批準銷售前應(yīng)進行成品的理化檢驗、無菌檢驗、安全性檢驗、效力檢驗，以保證其符合企業(yè)內(nèi)控標準要求。①口蹄疫滅活疫苗的理化檢驗方法：口蹄疫滅活油佐劑疫苗應(yīng)為乳白色或淡粉紅色略帶粘滯性的乳劑。吸取疫苗逐滴滴入盛有潔凈冷水的容器，除第一滴呈云霧狀擴散外，其余均不擴散。以0.12cm內(nèi)徑的1mL吸管吸取疫苗1mL，在室溫下垂直放置使疫苗自然跌落，放出0.4mL的時間不得超過10秒。以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，乳劑液面出油不得超過液體高度的1/10，底部出水也不得超過液體高度的1/10。②口蹄疫滅活疫苗的無菌檢驗方法：參考《中華人民共和國獸藥典》。③口蹄疫滅活疫苗的安全性檢驗：a.皮下接種豚鼠和小白鼠，每只豚鼠皮下注射2mL，每只小白鼠皮下注射0.5mL，接種后觀察7d，應(yīng)不出現(xiàn)口蹄疫癥狀和因注射疫苗引起的毒性反應(yīng)。b.對于豬口蹄疫滅活疫苗，除按a步驟檢驗外，還應(yīng)取抗體檢測陰性的30?40日齡仔豬兩頭，每頭仔豬兩側(cè)耳根后接種疫苗兩頭份，觀察14d，應(yīng)不出現(xiàn)口蹄疫癥狀和因注射疫苗引起的毒性反應(yīng)。c.對于牛羊口蹄疫滅活疫苗，除按a步驟檢驗外，取抗體檢測陰性6月齡以上牛3頭，每頭牛舌面皮內(nèi)注射疫苗20個點，每點0.1mL，7d后頸部再注射疫苗3頭份（6mL）觀察10天，接種牛不得出現(xiàn)口蹄疫癥狀或因注射疫苗引起的毒性反應(yīng)。④口蹄疫滅活疫苗的效力檢驗：a.對于豬用滅活疫苗，選體重40kg左右的健康且抗體檢測陰性仔豬17頭，其中15頭隨機分為3組，每組5頭，將疫苗按1頭份、1/3頭份、1/9頭份接種，每劑量于耳根后肌肉接種5頭豬，接種后28天，連同2頭對照豬，每頭耳根后肌肉注射1000個半數(shù)感染量（ID50）口蹄疫強毒，觀察10d，對照豬均應(yīng)至少一蹄出現(xiàn)水皰或潰瘍，免疫豬出現(xiàn)任何口蹄疫癥狀，判為不保護，根據(jù)免疫豬的保護頭數(shù)計算PD50，每頭份疫苗應(yīng)不低于3個PD50。b.對牛羊用滅活疫苗，選6月齡以上健康且抗體檢測陰性牛17頭，其中15頭隨機分為3組，每組5頭，將疫苗按1頭份、1/3頭份、1/9頭份接種，每劑量頸部肌肉接種5頭牛，接種后21天，連同2頭對照牛，每頭牛舌面分兩點皮內(nèi)注射1000個半數(shù)感染量（ID50）的同源口蹄疫強毒，觀察10d，對照牛每頭必須3個以上蹄部出現(xiàn)口蹄疫典型病變。免疫牛除舌面以外，不得出現(xiàn)任何口蹄疫病變判為保護。根據(jù)各劑量發(fā)病牛的數(shù)量計算PD50。要求每劑量疫苗效力不得低于3個PD50。3.檢驗記錄檢驗人員應(yīng)按規(guī)定作好檢驗操作記錄。檢驗操作記錄為檢驗所得數(shù)據(jù)、記錄、運算等原始資料。檢驗結(jié)果由檢驗人簽字，專業(yè)技術(shù)負責(zé)人復(fù)核，檢驗報告單由質(zhì)