【細(xì)菌耐藥基因的分子檢測方法探究綜述報告7000字】

細(xì)菌耐藥基因的分子檢測方法研究綜述報告摘要臨床治療過程中，細(xì)菌性感染治療時所采用的主要藥物就是抗生素，但大規(guī)模使用抗生素顯然會導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性?，F(xiàn)階段，在臨床治療方面，已經(jīng)出現(xiàn)了由于抗生素等藥物的使用而導(dǎo)致的細(xì)菌耐藥性。檢測細(xì)菌耐藥性，不僅可以進一步研究病原菌流行病學(xué)、精準(zhǔn)及時治療細(xì)菌感染，還可以有效地避減少傳播、發(fā)生細(xì)菌耐藥的情況。因此，如何檢測細(xì)菌耐藥基因是一個非常值得思考的問題，引起了眾多學(xué)者的關(guān)注，其直接影響到臨床重癥感染緊急用藥。本文從細(xì)菌耐藥、細(xì)菌耐藥基因的檢測方法兩方面綜述當(dāng)前國內(nèi)外學(xué)者關(guān)于細(xì)菌耐藥基因分子檢測的相關(guān)研究，梳理當(dāng)前檢測細(xì)菌耐藥基因的方法，以期為有關(guān)科研人員更好地開展檢測工作提供參考，有效預(yù)防細(xì)菌耐藥的發(fā)生與傳播。關(guān)鍵詞：細(xì)菌耐藥；分子檢測；基因；感染目錄TOC\o"1-3"\h\u17086一、緒論 319252（一）研究背景 37668（二）研究目的與意義 38251（三）國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 411521二、細(xì)菌耐藥的相關(guān)概述 4591（一）感染與抗菌藥物 411318（二）細(xì)菌耐藥機制 56909三、細(xì)菌對抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性的原因 52918（一）抗菌藥物使用不合理 515709（二）抗菌藥物選擇不合理 512693（三）抗菌藥物應(yīng)用不適用于癥狀范圍 615237（四）抗菌藥物的選擇缺乏依據(jù) 66934（五）聯(lián)合用藥不合理 612466四、抗菌藥物耐藥檢測方法 73490（一）生化檢測方法 711640（二）分子生物學(xué)方法 814899五、遏制抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性的方法 824253（一）建立醫(yī)藥監(jiān)管體系 88868（二）加強用藥管理 819789（三）組織群眾學(xué)習(xí)相關(guān)醫(yī)學(xué)知識，使用替代藥物 92408（四）嚴(yán)格要求醫(yī)生按患者的具體狀況給藥 9837結(jié)論 99170參考文獻 10緒論研究背景全球都存在濫用抗菌藥物的現(xiàn)象，即使在經(jīng)濟條件和醫(yī)療技術(shù)發(fā)達的國家，這一問題仍然困擾著各國。近年來，我國抗菌藥物濫用問題日益突出。對新型的抗菌藥物進行研究和開發(fā)的速度趕不上耐藥菌發(fā)生變化的速度，而且進入市場的速度比較忙，數(shù)量也很少。細(xì)菌的耐藥性因為受到不同因素的影響而變得不同，所以，為了對耐藥菌的變遷進行了解，對耐藥菌的傳播進行遏制的最好的方法就是對細(xì)菌的耐藥性進行監(jiān)測。本文全面分析了細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的機理及原因，為臨床抗菌藥物規(guī)范使用提供建議。以解決我國抗菌藥物耐藥性問題提供理論支持，并采取相應(yīng)措施。研究目的與意義當(dāng)前社會，人們過度使用了抗感染的藥物，耐藥菌也經(jīng)常的從藥物中被檢測出來，對抗菌藥物中的耐藥模進行了改變，尤其是多重耐藥細(xì)菌被檢查出來的概率也在不斷增加，臨床上，抗感染的治療也面臨著巨大的挑戰(zhàn)。在臨床使用中，因為感染的程度不同，監(jiān)測治療中看到的細(xì)菌所具有的耐藥性，對臨床中怎樣使用藥物具有指導(dǎo)作用，所以，在對臨床進行實踐的過程中，對細(xì)菌進行監(jiān)測非常重要，能夠幫助免疫力低下或者病情比較嚴(yán)重的危急病人對抗菌藥物進行合理的使用，同時還能夠?qū)δ退幘漠a(chǎn)生和傳播進行遏制。國內(nèi)外研究現(xiàn)狀臨床使用抗生素時，多數(shù)醫(yī)生憑經(jīng)驗用藥，患者病原學(xué)檢查率不高，或在利益驅(qū)使下選擇昂貴的抗生素、新藥和進口藥物，抗生素選擇不正確，療程和配伍不合理，聯(lián)合用藥不當(dāng)?shù)?。?018年全國對耐藥性進行的檢測可以看出，平均檢測出MRSA占了62%[1][2]。AiX等對廣州市三個中心的2059例兒童糞便標(biāo)本進行了深入研究與分析。從歐盟的調(diào)查結(jié)果中可以看出，每年因為多重耐藥菌感染而死亡的人數(shù)就有2.5萬人，給醫(yī)療保健和社會所擁有的生產(chǎn)力帶來了巨大的損失，這些損失已經(jīng)達到了9億歐元。而美國每年感染細(xì)菌的人數(shù)也有200多萬,然而這部分的細(xì)菌已經(jīng)對常用的抗菌藥有了一定的耐藥性。為了解決這一問題，美國每年需要從醫(yī)療和保健機構(gòu)拿出200億美元。2017年韓國對全球的耐藥性進行了監(jiān)測，從結(jié)果中可以看出，有一半的金黃色葡萄球菌對頭孢產(chǎn)生了耐藥性。細(xì)菌耐藥的相關(guān)概述（一）感染與抗菌藥物感染性疾病是一種常見病，也是一種多發(fā)病，嚴(yán)重影響了人類的身體健康。學(xué)者Myung-Jin表示在臨床治療方面，多種器官疾病晚期的致死原因和并發(fā)癥均為感染性疾病，在治療感染性疾病時，必不可少的就是抗菌藥物，它的使用，大大降低了感染患者的死亡率。學(xué)者F.Fenollar在對開發(fā)抗菌藥物的歷史回顧之后，表示目前在臨床上已有上百種抗菌類藥物投入使用，上千種抗生素藥物被開發(fā)。學(xué)者PaigeN等人表示抗真菌藥物、抗細(xì)菌藥物共同組成了抗菌藥物，這些人工合成藥物均具有抗菌活性。而學(xué)者KrisnaN對抗菌藥物進行了分類，表示按照化學(xué)結(jié)構(gòu)抗生素可以分為多種類型，譬如，四環(huán)素類；再如，氨基糖苷類等（二）細(xì)菌耐藥機制細(xì)菌經(jīng)過了長時間的進化，形成了比較復(fù)雜的耐藥機制和體系。作為學(xué)者，MinQiao指出，細(xì)菌可以把自身所具有的染色體的DNA進行改變，把耐藥的基因經(jīng)過增殖，然后分裂，達到傳遞的目的，也就是說DNA在細(xì)菌內(nèi)部進行了垂直傳播。其實現(xiàn)了垂直傳播。學(xué)者Wittwer則表示細(xì)菌之間也能夠?qū)崿F(xiàn)水平傳播，遺傳原件可以通過外源獲得。學(xué)者SatyvaldyJatayev表示細(xì)菌的耐藥機制之一主要是為了對菌胞膜的滲透性進行改變，抗菌藥物需要依次通過細(xì)胞膜，然后是細(xì)胞壁，最后進入到細(xì)菌細(xì)胞，并發(fā)揮出它控制細(xì)菌或者殺死細(xì)菌的作用，所以細(xì)菌在對藥物進行抵抗時就形成了多種的防御機制。而學(xué)者Huey-Ling則認(rèn)為細(xì)菌主動外排為細(xì)菌耐藥機制之一，抗菌藥物與細(xì)菌外膜孔蛋白變異常協(xié)同作用，實現(xiàn)主動外排，細(xì)菌耐藥的水平也就隨之提高。學(xué)者KevinE表示在生物細(xì)胞中，廣泛存在著主動泵出系統(tǒng)，在這些外排泵底物特異性差，往往表現(xiàn)為多重耐藥。三、細(xì)菌對抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性的原因（一）抗菌藥物使用不合理俗話說，抗菌藥物是一種化學(xué)物質(zhì)，能夠?qū)?xì)胞的發(fā)育產(chǎn)生影響。并且種類很多，每種藥物都有各自的特點，因此在使用時應(yīng)針對不同的疾病、人群、細(xì)菌等，作出正確的選擇。但是在很多情況下，抗菌藥物的適用是有限的，并不是所有人都適合使用抗菌藥物，比如一些兒童患者、孕婦和上了年紀(jì)的老人對很多抗生素是排斥的，但是很多人注意不到這一點，把抗菌藥物習(xí)慣性的當(dāng)成救命稻草，到最后卻適得其反，產(chǎn)生不良反應(yīng)。（二）抗菌藥物選擇不合理許多人過于依賴抗菌藥物，總覺得這一類藥物可以治愈各種疾病，一有個頭疼腦熱就習(xí)慣性地使用，他們通常不會去專門的藥店詢問該用什么藥，也不會去醫(yī)院就診，他們根據(jù)自己的經(jīng)驗和用藥習(xí)慣選擇服用抗菌藥物，導(dǎo)致經(jīng)驗性藥物過量。相關(guān)的細(xì)菌說明書中已經(jīng)指出，在細(xì)菌感染的情況下，可以使用一些適當(dāng)對應(yīng)的藥品進行治療，比如可采用人體輸入青霉素或者口服其他抗菌藥物等。這里我們需要考慮一種情況就是有些人對抗菌藥物過敏的情況，這時最佳的選擇就是使用頭孢菌素。按照醫(yī)藥方面的一些規(guī)定說明，在治療細(xì)菌感染時，要根據(jù)病情的嚴(yán)重程度選擇合適的抗菌藥物，不能越級使用，以免產(chǎn)生副作用。（三）抗菌藥物應(yīng)用不適用于癥狀范圍抗菌類藥物可以在非常低的濃度下破壞細(xì)菌和病毒等微生物。它的作用是殺死感染的微生物。其目的是殺死病原體，控制疾病，并最終治愈它們。但是很多人在頭痛或發(fā)燒的時候卻選擇服用抗菌藥物，并且大多數(shù)的地方醫(yī)療機構(gòu)，縣級醫(yī)院、診所等都不加阻攔。據(jù)世界衛(wèi)生組織多次公開發(fā)言可知，抗菌藥物在原則上其實是不能治愈感冒或是流感等病毒感染。但是很多地方當(dāng)出現(xiàn)有流感等傳染病，或是類似的身體炎癥時，還是有很多人選擇使用抗菌藥物進行消炎，其不適用于這一癥狀，不僅沒有治療好患者，反而還對抗菌藥物產(chǎn)生了耐藥性。（四）抗菌藥物的選擇缺乏依據(jù)在抗菌藥物的選擇過程中，我們還需要考慮到藥物的感染病體，患者是否有過敏史，以及患病的綜合情況等等。比如某些醫(yī)院的醫(yī)療水平比較有限，對于感染菌的培養(yǎng)，以及藥敏實驗，通常都需要幾天的周期性觀察才能夠確定。受一定的限制，一般人大多數(shù)人在發(fā)病前不會來醫(yī)院，而凡是來醫(yī)院治療的人，則情況就比較急。又不可能花費較高的代價，來進行藥物敏感監(jiān)測，這也造成醫(yī)生主要采取經(jīng)驗治療，從而導(dǎo)致科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)性較低。根據(jù)2000多例病歷顯示，在這其中做過菌前培養(yǎng)或藥物過敏測試的不到3%，在實際治療過程中，最常用的方法就是一種抗菌藥使用幾天之后，如果得不到起碼的療效，則直接更換抗菌產(chǎn)品。也正是處于這個原因考量，某醫(yī)院通常會選用過敏指數(shù)較低的廣譜抗菌藥，而對于高敏指數(shù)的窄譜抗菌藥物的使用頻率則是少之又少。（五）聯(lián)合用藥不合理在特殊的情況下，在一定程度上聯(lián)合使用抗菌藥物是可以的。但是很多的醫(yī)生對醫(yī)藥的了解并不是很全面，通常會有很多配藥方面的禁忌。比如笨挫西林這種青霉素的酸性是比較穩(wěn)定的，但是其他的青霉素的酸性極度的不穩(wěn)定。葡萄糖的酸堿綜合測試值是在四到六之間，是屬于酸性的，把它和氨節(jié)西林混合使用，就會導(dǎo)致藥物遭到稀釋。因此，這種藥品就應(yīng)該選取比較中性的注射液來融合使用?，F(xiàn)在，很多新型的藥物不斷應(yīng)用到醫(yī)學(xué)中，同時也就有很多的藥物方面的配伍禁忌。所以，在聯(lián)合用藥的過程中一定要考慮全面，不能因為用藥不當(dāng)而使患者痛苦。四、抗菌藥物耐藥檢測方法傳統(tǒng)檢測抗菌藥物所具有的耐藥性的方法有紙片擴散法等，這些方法都是借助耐藥表型對耐藥菌進行分析的方法為基礎(chǔ)。這種類型的檢測方法在使用的過程中非常方便，成本也比較低，可供選擇的方式也很多，但是需要長時間的對菌株進行培養(yǎng)。還有一種方法就是對耐藥酶具有的活性進行檢測，以此為基礎(chǔ)，對耐藥酶以及底物產(chǎn)生的水解反應(yīng)進行檢測，同時檢測指示劑中顏色發(fā)生的變化。該檢測方法更加方便、快速，現(xiàn)如今己在臨床診斷中廣為應(yīng)用。（一）生化檢測方法在檢測細(xì)菌耐藥基因時，一個非常主要的方法就是生化檢測方法，主要有兩種方式，一種為比色法，另一種為關(guān)于電離飛行時間有關(guān)的質(zhì)譜技術(shù)。學(xué)者UrsulaTheuretzbacher表示利用分光光度計測量或肉眼觀察，水解活性在試劑介質(zhì)中的變化，就是比色法[14]。學(xué)者AnitaL認(rèn)為對于窄譜的內(nèi)酰胺酶，顯色底物具有一定抗性，但是ESBLS能夠?qū)⑵渌?，原本黃色的液體就會變成紅色，因此ESBLS菌株就可以根據(jù)顏色變化被判斷出來。而學(xué)者王素梅、張健則表示在檢測尿液或血液中的ESBLS時，比色法被廣泛應(yīng)用，主要是因為其能夠快速得出結(jié)果，且操作簡單，但是在具體應(yīng)用的過程中非靶向酶火災(zāi)一定程度上影響顯色反應(yīng)，因此可以應(yīng)用的標(biāo)本類型比較有限。（二）分子生物學(xué)方法近年來，分子生物學(xué)技術(shù)在臨床實驗室占據(jù)了越來越重要的地位。對微生物進行檢測也可以使用各種不同的PCR技術(shù)，譬如數(shù)字PCR，還比如多重OCR等。學(xué)者王旭恩表示聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)作為常規(guī)的檢測方法，已被批準(zhǔn)用于MRSA、結(jié)核耐藥檢測[18]。而學(xué)者蘇嶼、李天嬌則明確表示目前對耐藥基因的分子檢測方法有：包括實時PCR技術(shù)在內(nèi)的普通PCR技術(shù)、PCR雜交技術(shù)（如基因芯片，特異性識別分子序列）、測序（特別是二代測序，NGS）等。PCR方法是臨床實驗室最早用來檢測腸桿菌科中內(nèi)酰胺酶相關(guān)耐藥基因的分子方法。學(xué)者馬玉蘭、宋文杰等人認(rèn)為該方法首先利用特異性引物擴增目的基因，然后產(chǎn)物通過電泳檢測是否有目的條帶。而學(xué)者TingShi則認(rèn)為應(yīng)用PCR技術(shù)采用全封閉反應(yīng)，無須PCR后處理，從而避免了擴增子對環(huán)境污染。利用不同的熒光染料可實現(xiàn)一管對多個對象的檢測，操作簡單快速、特異性強、靈敏度高。第三代DNA所使用的測序技術(shù)不用對PCR進行擴增，只需在十分鐘內(nèi)對基因進行組測序，與此同時，還能對菌株進行鑒定，并進行分析；對耐藥基因譜和毒力基因譜進行篩查；以及對基因的突變進行分析。五、遏制抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性的方法（一）建立醫(yī)藥監(jiān)管體系抗菌藥物濫用是一個綜合問題，需要政府的政策和急需政府和衛(wèi)生保健方面一起協(xié)作，同時借助全社會的力量來共同解決。美國和瑞典作為監(jiān)管藥物濫用的體系，在全國的范圍內(nèi)對抗菌藥物的耐藥性進行了宣傳教育，通過及時的檢測，做出相應(yīng)的報告。在我國，也對使用抗菌藥物的情況進行了實時的監(jiān)測，并提前做出了預(yù)測，同時建議在我國家建立對臨床抗藥菌的進行監(jiān)測的網(wǎng)絡(luò)，根據(jù)不同地區(qū)對細(xì)菌耐藥性監(jiān)測得出的結(jié)果，來監(jiān)測我國的濫用藥物的實際情況，并對這種情況進行管理。從抗藥菌藥物的監(jiān)管的角度來看，國外已經(jīng)制定出了合理有效的方案，在以后的發(fā)展中，我國可以從國外的醫(yī)藥管理所積累的經(jīng)驗中吸取經(jīng)驗教訓(xùn)，來對我國濫用抗生素的監(jiān)管體系進行完善。（二）加強用藥管理本質(zhì)上抗菌藥物并不能發(fā)揮出有效的消炎效果，但是對于一些由炎癥所引起的微生物，卻有著非常好的治療效果。因此，抗菌藥物不適合由病毒引起的炎癥，只適合因細(xì)菌而引起來的炎癥。它們不能防止感染，如果用抗菌藥物來預(yù)防流感等疾病，那是有害無益的。如果沒有明顯的病原微生物時，可使用廣譜抗菌藥物。如果鑒定出病原微生物，可以用來治療或抑制致病微生物感染，最好使用相應(yīng)的窄譜抗菌藥物，這對微生物具有致命的作用。（三）組織群眾學(xué)習(xí)相關(guān)醫(yī)學(xué)知識，使用替代藥物有人自認(rèn)為“久病成良醫(yī)”，胡亂服用抗生素。在有些家庭中常備阿莫西林，不論牙痛、腹痛、腹瀉，均用阿莫西林解決，不注重其用法、查出需要進行個體化調(diào)整的藥物，與療程以及適應(yīng)癥。此外，許多患者缺乏藥品知識，誤認(rèn)為新型抗菌藥物就比舊的好，價格越貴越好，覺得可以直接消炎，或認(rèn)為一起使用的種類越多效果越好等。這些想法和認(rèn)識都是不對的，患者應(yīng)該積極主動的去學(xué)習(xí)這方面的知識，而不是道聽途說，盲目地服用這些抗菌類藥物。什么癥狀對應(yīng)什么藥，這些都是需要專業(yè)的醫(yī)生通過對患者進行針對性的診斷才能給出具體建議的?；颊卟荒軕{著經(jīng)驗盲目的亂吃藥。與此同時，患者自身也還需明白，抗菌藥物不是萬能的，雖然可以治療一些疾病，但是仍然存在一些問題，所以很多時候患者可以選擇使用替代性藥物。（四）嚴(yán)格要求醫(yī)生按患者的具體狀況給藥在老年人、孕婦、兒童、肝功能、腎功能不全或者免疫力低等情況下，必須充分考慮抗菌藥物的使用。對于抗生素的劑量和治療應(yīng)該根據(jù)年齡和適應(yīng)癥進行調(diào)整。肝酶系統(tǒng)，腎排泄不完整的，有一些副作用較大的藥物例如磺胺類、四環(huán)素類、多粘菌素、氯霉素等在使用的時候應(yīng)該先檢測血藥濃度。其中β-內(nèi)酰胺類抗生素是最安全的品種，對于哺乳期的患者以下抗菌藥物的種類對其有不利的影響，如氯霉素物、甲硝唑、等濃度特別低，通過哺乳的方式口服吸收，不需要停止母乳喂養(yǎng)。兒童患者在使用氨基糖苷類、氟喹諾酮類藥物時要慎用。醫(yī)生應(yīng)嚴(yán)格根據(jù)不同患者、不同情況嚴(yán)格給藥。結(jié)論醫(yī)院的抗菌藥物種類很多，而且這些藥物的選擇也非常多，充分滿足了各類患者的需求。同時我們也可以發(fā)現(xiàn)很多的醫(yī)生對抗菌藥物的選擇都有盲目性，使用時都存在用藥過度，費用高昂的特點。在我國很多地方都有醫(yī)生不按照規(guī)定使用抗菌藥品的現(xiàn)象，這樣就加劇了病人的痛苦，同時還要付出高昂的費用，導(dǎo)致了資源的嚴(yán)重浪費，更重要的是對細(xì)菌還出現(xiàn)了耐藥性，使得抗菌藥品達不到預(yù)期的效果。這就是為什么我們需要提高醫(yī)生的整體素質(zhì)，使他們能夠明智地使用抗菌藥物。同時，還要要求醫(yī)護人員在使用抗菌藥品的過程中，一方面要考慮到治療效果，更多的還要考慮藥品對患者的不利影響和患者的經(jīng)濟方面的承受能力，這樣才能讓醫(yī)院使用的抗菌藥物更加的安全，效果更好，成本更低。結(jié)合上面所講的內(nèi)容得知，PCR技術(shù)是一種檢測基因的耐藥性的檢測技術(shù)，主要應(yīng)用于臨床，目前技術(shù)比較成熟。但是對細(xì)菌的耐藥性進行檢測時，仍然有很多無法解決的問題存在，上面所講的技術(shù)，在對細(xì)菌的耐藥性進行基因檢測之前，要對核酸進行提取，并對PCR進行擴增，這種操作比較復(fù)雜，最后得到的結(jié)果也會依賴于DNA進行的測序結(jié)果。由于人們逐漸了解了病原菌所具有的耐藥基因以及臨床制藥的機制兩者之間的關(guān)系，測序技術(shù)也得到了深入發(fā)展，同時降低了檢測的成本。一種新型的測序技術(shù)很快會在臨床中使用，讓治療臨床病原菌的感染有了革命性的變化。參考文獻[1]李昕,曾潔,王岱,薛云新,趙西林.細(xì)菌耐藥耐受性機制的最新研究進展[J].中國抗生素雜志.2020(02)[2]向蕾,陳仕菊,王昕,呂星,陸家海,房師松.實時熒光定量RT-PCR快速檢測四種呼吸道病毒的研究[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志.2014(04)[3]MassinissaSiMehand,FarahAl-Shorbaji,PiersMillett,BernadetteMurgue.TheWHOR&DBlueprint:2018reviewofemerginginfectiousdiseasesrequiringurgentresearchanddevelopmentefforts[J].AntiviralResearch.2018[4]Myung-JinMun,Joon-YongBae,JinHyuckKim,SooBokKim,IlseobLee,JinIlKim,MeeSookPark,Man-SeongPark,YongSukNam.One-stepmultiplexreal-timeRT-PCRfordetectionandtypingofdenguevirus[J].MolecularandCellularProbes.2018[5]F.Fenollar,O.Mediannikov.EmerginginfectiousdiseasesinAfricainthe21stcentury[J].NewMicrobesandNewInfections.2018[6]MauricioT.CaballeroMD,FernandoP.PolackMD.Respiratorysyncytialvirusisan“opportunistic”killer[J].PediatricPulmonology.2018(5)[7]PaigeN.Dahlgren,KanokwanBishop,ShatovishaDey,Brittney-SheaHerbert,HiromiTanaka.DevelopmentofaNewMonochromeMultiplexqPCRMethodforRelativeTelomereLengthMeasurementinCancer[J].Neoplasia.2018(5)[8]KrisnaN.A.Pangesti,MoatazAbdElGhany,MichaelG.Walsh,AlisonM.Kesson,GrantA.Hill‐Cawthorne.Molecularepidemiologyofrespiratorysyncytialvirus[J].ReviewsinMedicalVirology.2018(2)[9]MinQiao,Guang-GuoYing,AndrewC.Singer,Yong-GuanZhu.ReviewofantibioticresistanceinChinaanditsenvironment[J].EnvironmentInternational.2018[10]M.Li,R.A.Palais,L.Zhou,C.T.Wittwer.QuantifyingvariantdifferencesinDNAmeltingcurves:Effectsoflength,meltingrate,andcurveoverlay[J].AnalyticalBiochemistry.2017[11]SatyvaldyJatayev,AkhylbekKurishbayev,LyudmilaZotova,GulmiraKhasanova,DaurenSerikbay,AskarZhubatkanov,MakpalBotayeva,AibekZhumalin,ArysgulTurbekova,KathleenSoole,PeterLangridge,YuriShavrukov.AdvantagesofAmplifluor-likeSNPmarkersoverKASPinplantgenotyping[J].BMCPlantBiology.2017(2)[12]Huey-LingYou,Shun-JenChang,Hong-RenYu,Chia-ChinLi,Chang-HanChen,Wei-TingLiao.BMCPediatrics.Simultaneousdetectionofrespiratorysyncytialvirusandhumanmetapneumovirusbyone-stepmultiplexreal-timeRT-PCRinpatientswithrespiratorysymptoms[J].2017(1)[13]KevinE.Eboigbodin,KirsiMoilanen,SonjaElf,MarkHoser.Rapidandsensitivereal-timeassayforthedetectionofrespiratorysyncytialvirususingRT-SIBA?[J].BMCInfectiousDiseases.2017(1)[14]UrsulaTheuretzbacher.GlobalantimicrobialresistanceinGram-negativepathogensandclinicalneed[J].CurrentOpinioninMicrobiology.2017[15]AnitaL.Rack-Hoch,GudrunLaniado,JohannesHübner.ComparisonofinfluenzaandRSVdiagnosticfromnasopharyngealswabsbyrapidfluorescentimmunoassay（Sofiasystem）andrapidbedsidetesting（BinaxNOW）vs.conventionalfluorescentimmunoassayinaGermanuniversitychildren’shospital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