實(shí)驗(yàn)一培養(yǎng)基的配制

關(guān)于實(shí)驗(yàn)一培養(yǎng)基的配制一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私庵参锿庵搀w離體培養(yǎng)所需各種營養(yǎng)成分及激素種類。初步掌握培養(yǎng)基母液配制方法。第2頁,共18頁，2024年2月25日，星期天二、實(shí)驗(yàn)原理

植物材料培養(yǎng)要獲得成功，并正常生長，培養(yǎng)基的成分是一個決定性因素，不同植物要求不同的培養(yǎng)基。大多數(shù)植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基由無機(jī)營養(yǎng)物、碳源、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機(jī)附加物等五類物質(zhì)組成。第3頁,共18頁，2024年2月25日，星期天

在配制培養(yǎng)基之前，為了使用方便、簡化操作、用量準(zhǔn)確，減少每次配藥稱量各種化學(xué)成分所花費(fèi)的時間和誤差，常常將配制培養(yǎng)基所需無機(jī)大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物、激素成分分別配制成比需要量大若干倍的濃縮母液，置于冰箱內(nèi)保存。當(dāng)配制培養(yǎng)基時，按預(yù)先計算好的量分別吸取各種母液稀釋即可。第4頁,共18頁，2024年2月25日，星期天三、實(shí)驗(yàn)材料與器具1、用具器材滅菌鍋、普通及精密天平、燒杯、醫(yī)用瓷缸、量桶、移液管、試劑瓶、藥勺、玻璃棒、pH試紙。2、藥品試劑蒸餾水、1NHCl、1NNaOH、95%酒精、蔗糖、瓊脂、各種所需化學(xué)藥品（分析純）。第5頁,共18頁，2024年2月25日，星期天四、實(shí)驗(yàn)步驟

1、母液配制（1）配制10倍1LMS大量元素母液NH4NO3

16.5gKH2PO4

1.7gKNO3

19g

CaCl2·2H2O

4.4gMgSO4·7H2O

3.7g第6頁,共18頁，2024年2月25日，星期天

配制成200倍1L母液，依次稱取:KI

0.166g

Na2MoO4·2H2O

0.05gH3BO3

1.24g

CuSO4·5H2O

0.005gMnSO4·4H2O

4.46g

CoCl2·6H2O

0.005gZnSO4·7H2O

1.72g（2）配制MS微量元素母液第7頁,共18頁，2024年2月25日，星期天

配制成200倍lL鐵鹽母液，依次稱取:EDTA二鈉（Na2·EDTA·7H2O）7.46g

FeSO4·7H2O

5.56g（3）配制MS鐵鹽母液

第8頁,共18頁，2024年2月25日，星期天

配制成200倍1L有機(jī)母液，依次稱?。蝴}酸硫胺素（VB1）

0.02g煙酸

0.1g

鹽酸吡哆醇（VB6）

0.1g（4）配制MS有機(jī)母液①第9頁,共18頁，2024年2月25日，星期天（5）配制MS有機(jī)母液②配制成200倍1L有機(jī)母液：肌醇

20.0g

（6）配制MS有機(jī)母液③配制成200倍1L有機(jī)母液：甘氨酸

0.4g

第10頁,共18頁，2024年2月25日，星期天

0.1mg/mL的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的鹽酸溶解，再加蒸餾水定容至250mL。0.1mg/mLNAA：取25mg的NAA可溶于熱水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后，再加水定容至250mL。0.1mg/mL2，4-D：取20mg的2，4-D溶于少量95%乙醇中，再加水定容至200mL。（7）植物激素的配制第11頁,共18頁，2024年2月25日，星期天

2、培養(yǎng)基的配制（以1L培養(yǎng)基為例）1、計量根據(jù)配制培養(yǎng)基的量（1L）和母液的濃度計算需要吸取母液的量，計算公式：吸取量mL=培養(yǎng)基中物質(zhì)濃度（mg/L）×1000mL/母液濃度（mg/L）。母液濃度/培養(yǎng)基中物質(zhì)濃度=稀釋倍數(shù)2、移液取大燒杯（1L）一只，按照計算吸取母液的量依次吸取各母液置于燒杯中備用。3、稱取稱取10g瓊脂，30g蔗糖備用。第12頁,共18頁，2024年2月25日，星期天4、融化用搪瓷量杯量取600～700mL的蒸餾水放在電爐上，加入瓊脂，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀將其取下，加入蔗糖，攪拌使之溶解。5、混合將融化的瓊脂和蔗糖倒入裝有母液的大燒杯中，充分混合，用蒸餾水定容到1000mL。6、調(diào)pH

用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1mol/L的NaOH或HCl溶液調(diào)pH為6.0。第13頁,共18頁，2024年2月25日，星期天編號6-BA（mg/l）NAA（mg/l）2,4-D（mg/l）第一組0.50.11.0第二組0.50.52.0第三組0.50.050第四組1.00.10共分4組，每組配750mL培養(yǎng)基，每瓶倒25-30mL，共接種28瓶左右每瓶編號1（1/2/3/4）n號分組情況第14頁,共18頁，2024年2月25日，星期天3、培養(yǎng)基的分裝和滅菌溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。分裝時，將燒杯中的培養(yǎng)基倒入錐形瓶中，每瓶約25mL-30mL。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。用封口膜封口并編號。滅菌：121℃，15-20min。第15頁,共18頁，2024年2月25日，星期天五、注意事項(xiàng)

配制鐵鹽母液時，F(xiàn)eS04和Na2EDTA應(yīng)分別加熱溶解后混合，并置于加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃色（約加熱20

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30

min），調(diào)pH值至5.5，防止FeS04結(jié)晶析出