中藥制劑的含量測定技術(shù)

關(guān)于中藥制劑的含量測定技術(shù)1.定義紫外-可見分光光度法（UltravioletandVisibleSpectrophotometry）系指通過測定被測物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)(200～760nm)對光的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，進(jìn)行物質(zhì)定性定量分析的方法。

2.特點(diǎn)設(shè)備簡單、操作簡便、靈敏度和準(zhǔn)確度較高等。3.適用范圍中藥制劑定性鑒別、雜質(zhì)檢查及含量測定。第2頁,共139頁，2024年2月25日，星期天一、儀器工作原理（一）紫外-可見分光光度儀的構(gòu)造光源單色器吸收池檢測器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)第3頁,共139頁，2024年2月25日，星期天1.光源（輻射源)

（1）可見光光源：為熱輻射光源，如鹵鎢燈、碘鎢燈、鎢絲燈（白熾燈）。（2）紫外光源：多為氣體放電光源，如氫、氘、氙放電燈及汞燈等。2.單色器是能從光源的復(fù)合光中分出測量所需波長單色光的光學(xué)裝置。（1）棱鏡單色器：有玻璃和石英兩種材料。是依據(jù)光的折射率不同，而將其分成不同波長的單色光。第4頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（2）光柵單色器：是利用光的衍射和干涉作用制成的。可用于紫外、可見和近紅外光譜區(qū)域，具有良好的、幾乎均勻一致的色散率，且具有適用波長范圍寬、分辨本領(lǐng)高、成本低、便于保存和易于制作等優(yōu)點(diǎn)，是目前常用的色散元件。缺點(diǎn)是各級光譜會重疊而產(chǎn)生干擾。3.吸收池又叫比色皿。是用于盛放分析試液并提供一定吸光厚度的器皿。一臺分光光度計(jì)配有幾組厚度不同的吸收池，吸收池的大小規(guī)格從幾毫米到幾厘米不等，最常用的是1厘米的吸收池。

（1）石英池：適用于可見光區(qū)及紫外光區(qū)。

（2）玻璃吸收池：只能用于可見光區(qū)。第5頁,共139頁，2024年2月25日，星期天4.檢測器

是通過光電轉(zhuǎn)換元件檢測透過光的光通量大小，并將光信號轉(zhuǎn)變成電信號的裝置。檢測器應(yīng)在測量的光譜范圍內(nèi)具有高的靈敏度；線性關(guān)系好、線性范圍寬；對不同波長的輻射響應(yīng)性能相同且可靠；有好的穩(wěn)定性和低的噪音水平等特點(diǎn)。（1）光電池：常用的光電池有硒電池和硅光電池。（2）光電管：它以一彎成半圓柱且內(nèi)表面涂上一層光敏材料的鎳片作為陰極，而置于圓柱形中心的一金屬絲作為陽極，密封于高真空的玻璃或石英中構(gòu)成的，當(dāng)光照到陰極的光敏材料時(shí)，陰極發(fā)射出電子，被陽極收集而產(chǎn)生光電流。真空光電二極管

第6頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（3）光電倍增管：光電倍增管是一種加上多級倍增電極的光電管，其外殼由玻璃或石英制成，陰極表面涂上光敏物質(zhì)，在陰極、陽極間裝有一系列次級電子發(fā)射極，D1、D2……等。光電倍增管工作原理圖

第7頁,共139頁，2024年2月25日，星期天5.信號指示系統(tǒng)

是把檢測到的信號以適當(dāng)?shù)姆绞斤@示或記錄下來。常用的信號指示裝置有直讀檢流計(jì)、電位調(diào)節(jié)指零裝置以及數(shù)字顯示或自動記錄裝置等。常用的顯示方式有數(shù)字顯示、熒光屏顯示、曲線掃描及結(jié)果打印等多種。高性能的儀器還帶有數(shù)據(jù)站，即可對分光光度計(jì)進(jìn)行操作控制，又可進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。第8頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（二）紫外-可見分光光度計(jì)的工作原理

1.單光束分光光度計(jì)的工作原理國產(chǎn)722型、751型、724型、英國SP500型以及BackmanDU-8型等均屬于此類光度計(jì)。光學(xué)系統(tǒng)工作原理圖

第9頁,共139頁，2024年2月25日，星期天單波長雙光束分光光度計(jì)原理圖

2.單波長雙光束分光光度計(jì)的工作原理儀器有國產(chǎn)710型、730型、740型等。第10頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

3.雙波長分光光度計(jì)的工作原理紫外分光光度計(jì)（200～400nm）、可見分光光度計(jì)（400～800nm）和紫外-可見分光光度計(jì)（200～1000nm）。雙波長分光光度計(jì)光路示意圖

第11頁,共139頁，2024年2月25日，星期天二、儀器操作通法（一）操作通法1.儀器接通電源，預(yù)熱。2.根據(jù)測定波長，選擇相應(yīng)光源，繼續(xù)預(yù)熱（各型號儀器在操作順序上略有區(qū)別）。3.靈敏度鈕置1檔。4.將盛有供試品溶液及空白（參比）溶液的吸收池放入吸收池架，使空白（參比）溶液置光路位置，蓋好供試品室蓋。5.量程選擇鈕置T位置。第12頁,共139頁，2024年2月25日，星期天6.斷開光路調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)，使顯示為0。打開光路調(diào)節(jié)儀器透光率，使顯示為100%。7.量程選擇鈕置A位置。8.將供試品置于光路中，讀取供試品的吸光度值。9.儀器使用完畢，取出吸收池，關(guān)機(jī)，登記。10.不同型號的紫外分光光度計(jì)其操作方法和要求亦有所不同，使用前應(yīng)詳細(xì)閱讀使用說明書。第13頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（二）注意事項(xiàng)1.量瓶、移液管及吸收池均應(yīng)經(jīng)洗凈、校正后使用。2.吸收池的校正3.吸收池使用方法①使用前的處理；②吸收池使用；③使用后的處理。4.狹縫寬度的選擇5.吸光度的測定6.制劑含量的測定第14頁,共139頁，2024年2月25日，星期天三、含量測定（一）基本原理紫外-可見分光光度法的定量分析依據(jù)是朗伯-比爾定律。數(shù)學(xué)表達(dá)式為：A=KCLA為吸光度；K為吸收系數(shù)；C為溶液濃度；L為液層厚度。吸收系數(shù)：百分吸收系數(shù)、摩爾吸收系數(shù)?！吨袊幍洹凡捎冒俜治障禂?shù)。第15頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（二）操作步驟

1.對照溶液品與供試品溶液的制備

2.紫外可見分光光度計(jì)的校正

（1）波長準(zhǔn)確度的校正吸光度準(zhǔn)確度的標(biāo)準(zhǔn)范圍波長（nm）吸收強(qiáng)度百分吸收系數(shù)相對偏差范圍235257313350最小最大最小最大124.5144.048.62106.6

123.0～126.0142.5～146.047.0～50.3105.5～108.5第16頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（2）吸光度的校正鉻酸鉀溶液的吸光度λ/nm吸光度Aλ/nm吸光度Aλ/nm吸光度Aλ/nm吸光度A200.45593100.15183800.92814600.01732300.16753100.04583900.68414700.00832400.29333200.06204000.38724800.00352500.49623300.14574100.19724900.00092600.63453400.31434200.12615000.00002700.74473500.55284300.0841

2800.72353600.82974400.535

2900.42953700.99144500.0325

第17頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（3）雜散光的檢查

雜散光的檢查試劑名稱試劑濃（g/100ml）測定用波長（nm）透光率（%）碘化鈉亞硝酸鈉1.005.00220340<0.8<0.8第18頁,共139頁，2024年2月25日，星期天3.選擇測量條件

顯色反應(yīng)的條件、消除干擾物質(zhì)的方法、測量波長、參比溶液、及測量波長、吸光度范圍及儀器狹縫寬度的選擇。4.進(jìn)樣測試5.含量計(jì)算第19頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（三）含量測定的方法

1.單組分樣品的定量分析（1）吸收系數(shù)法：按藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸光度（A），根據(jù)A=K·C·L與藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的被測物質(zhì)的百分吸收系數(shù)，計(jì)算供試品溶液的濃度C供（g/100ml）。

含量（W/W）=C供×D供×V樣100×W供第20頁,共139頁，2024年2月25日，星期天如《中國藥典》駐車丸中總生物堿的含量測定、前列舒丸中牡丹皮的含量測定等采用本法。先計(jì)算C供，再計(jì)算出藥品中被測成分的含量（W/W）。含量計(jì)算公式有兩種：①含量（mg/丸）=C供（mg/ml)×D供×V樣(ml)×平均丸重（g/丸）W樣（g）②含量（標(biāo)示量%）=C供（mg/ml)×D供×V樣(ml)×平均丸重（g/丸）W樣（g)×標(biāo)示含量（mg/丸）×100%第21頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（2）對照品比較法：按藥品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，在相同條件下，在規(guī)定波長處分別測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度，按計(jì)算供試品溶液中待測組分的濃度。式中：AR為對照品溶液的吸光度；AX為供試品溶液的吸光度；CR為對照品溶液的濃度；CX為供試品溶液的濃度?！吨袊幍洹啡A山參片中生物堿的含量測定、黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D的含量測定均采用本法。第22頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線法（工作曲線法）：配制一系列不同濃度的對照品溶液，選擇合適的參比溶液，在相同條件下分別測定各對照品溶液的吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制A-C曲線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線或工作曲線。然后在完全相同的條件下測定樣品溶液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(或回歸直線)上查出樣品溶液的對應(yīng)濃度，或代入回歸方程，求出樣品溶液的濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線第23頁,共139頁，2024年2月25日，星期天在做精密測量時(shí)，用對照品溶液的濃度進(jìn)行線性回歸，求出回歸直線方程（相關(guān)系數(shù)r≥0.999），繪出回歸直線代替標(biāo)準(zhǔn)曲線，以盡量消除偶然誤差。亦可利用計(jì)算器將一系列對照品溶液的濃度與相應(yīng)的吸光度進(jìn)行一元線性回歸，求出回歸方程（相關(guān)系數(shù)≥0.9990），將供試品溶液的吸光度代入回歸方程，算出供試品溶液的濃度?；貧w方程：A=a+bC

式中，A為被測溶液吸光度；C為被測溶液濃（g/ml）；a為截距；b為斜率。

《中國藥典》槐米中蘆丁及青黛中靛藍(lán)的含量測定，復(fù)方皂礬丸中的硫酸亞鐵，獨(dú)一味膠囊、益心酮片、消咳喘糖漿和排石顆粒中的總黃酮，桂林西瓜霜中的總生物堿的含量測定等均使用該法。第24頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

2.混合物的測定方法

當(dāng)待測組分彼此不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)時(shí)，根據(jù)吸收定律的加和性，不需化學(xué)分離，可同時(shí)測定樣品中兩種或多種組分的含量。當(dāng)溶液中同時(shí)存在兩組分a和b時(shí)，它們的吸收峰相互重疊的程度有三種情況，如圖所示?；旌辖M份吸收光譜重疊示意圖

第25頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

（1）在最大吸收峰處互不重疊：如圖(1)，可分別在λ1和λ2處用單組分樣品的測定方法，先后測定組分a和b的濃度。（2）在最大吸收峰處部分重疊：如圖(2)，在λ1處，組分b無吸收，在λ2處，組分a和b均有吸收。則可先在λ1處用單組分樣品的測量方法，測定樣品溶液中組分a的濃度；然后在λ2處測定樣品溶液的吸光度Aa＋b2，根據(jù)吸光度的加和性原則，計(jì)算組分b的濃度。

（3）兩組分在最大吸收峰處相互重疊：如圖(3)，常采用解線性方程組法。選擇兩個(gè)測定波長λ1和λ2，首先測定兩組分在兩波長處的吸收系數(shù)的值，然后在兩波長處測定樣品溶液的吸光度，最后用解線性方程組的方法求出兩組分的濃度。第26頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（4）等吸收雙波長測定法：對于圖(3)的情況，可利用等吸收雙波長測定法對其中一種組分或兩種組分同時(shí)進(jìn)行測定。操作步驟：①選擇參比與測定波長；②繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；③含量測定等吸收雙波長測定法示意圖

第27頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

（5）導(dǎo)數(shù)光譜法：導(dǎo)數(shù)光譜法又稱微分光譜法，是一種消除光譜干擾的方法。以吸光度A對波長λ的吸收光譜稱為零階光譜，對吸收光譜進(jìn)行一級微分，即可得到(dA/dλ)-λ曲線，稱為一階導(dǎo)數(shù)光譜，以同樣方法可得到二階導(dǎo)數(shù)光譜(d2A/dλ2)-λ曲線，三階導(dǎo)數(shù)光譜(d3A/dλ3)-λ曲線，四階導(dǎo)數(shù)光譜(d4A/dλ4)-λ曲線。各階倒數(shù)光譜的基本曲線圖1.零階2.一階3.二階4.三階5.四階第28頁,共139頁，2024年2月25日，星期天原理：在導(dǎo)數(shù)光譜中，導(dǎo)數(shù)信號與濃度成正比，即：dA/dλ∝C，d2A/dλ2∝C，d3A/dλ3∝C，d4A/dλ4∝C。信號對濃度的靈敏度取決于吸收系數(shù)在特定波長下的變化率，即：dε/dλ，d2ε/dλ2，d3ε/dλ3，d4ε/dλ4，導(dǎo)數(shù)光譜的測量法有幾何法和代數(shù)法。在幾何法中，導(dǎo)數(shù)光譜的定量參數(shù)是振幅。導(dǎo)數(shù)光譜的微分階數(shù)n越大，峰形越尖銳、分辨率越強(qiáng)，但信噪比將降低，通常不超過四階。操作步驟：①干擾情況考查；②選擇測定條件；③繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；④樣品測定。第29頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

（6）差示光譜法(ΔA)法：先選定一個(gè)理想的參比溶液，使待測組分發(fā)生特征光譜變化，而共存組分不發(fā)生光譜變化，由此消除其干擾。一般是取兩份相等的供試液，在一份中加酸或堿，形成不同的酸堿介質(zhì)環(huán)境；或加入能與待測組分發(fā)生反應(yīng)的試劑，使待測組分以不同的形式存在，吸收光譜發(fā)生顯著變化，將兩份供試液稀釋至同樣濃度，分別置于樣品池與參比池中，于選定波長處測其吸光度差值ΔA，在一定濃度范圍內(nèi)，ΔA與待測組分濃度C呈線性關(guān)系，可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)。第30頁,共139頁，2024年2月25日，星期天原理：導(dǎo)數(shù)光譜的微分階數(shù)n越大，峰形越尖銳、分辨率越強(qiáng)，但信噪比將降低，通常不超過四階。導(dǎo)數(shù)光譜的波長間隔△λ越大，靈敏度越高，但分辨率降低。一般選1～2nm為宜。導(dǎo)數(shù)光譜的中間波長λm的選擇原則是：干擾組分在此波長處的導(dǎo)數(shù)值最好為零，而且通過選擇適宜的波長和求導(dǎo)條件，可消除背景吸收、雜質(zhì)和共存物的干擾。操作步驟：①干擾情況考查；②選擇測定條件；③繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；④供試品測定；第31頁,共139頁，2024年2月25日，星期天四、案例（一）六味地黃顆粒中牡丹皮的含量測定供試品溶液的制備參比溶液的制備紫外—分光光度計(jì)含量計(jì)算

取本品約2g，精密稱定，用水蒸氣蒸餾，收集餾出液約450ml，置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度。照紫外－分光光度法，在274nm波長處測定吸光度，按丹皮酚(C9H10O3)的吸收系數(shù)為862計(jì)算，即得。本品每袋含牡丹皮按丹皮酚(C9H10O3)計(jì)，不得少于6.0mg。第32頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（二）獨(dú)一味膠囊中總黃酮的含量測定

本品每粒含總黃酮以無水蘆丁(C27H30O16)計(jì)，不得少于26mg。獨(dú)一味膠囊中總黃酮的含量測定采用的是何種方法

？供試品溶液是如何制備的？對照品溶液的制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備吸光度的測定含量計(jì)算供試品溶液的制備課堂互動第33頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（三）黃楊寧片中黃楊寧的含量測定藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每片含黃楊寧以環(huán)維黃楊星D（C26H46N2O）計(jì)算，應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%。供試品溶液的制備對照品溶液的制備吸光度的測定含量計(jì)算黃楊寧片中黃楊寧的含量測定采用的是何種方法

？供試品溶液是如何制備的？課堂互動第34頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

1.定義薄層掃描法是供試品經(jīng)薄層分離后,用一束波長、強(qiáng)度一定的紫外線或可見光對薄層板進(jìn)行掃描，通過測定薄層板上的斑點(diǎn)對光的吸收強(qiáng)度或斑點(diǎn)經(jīng)激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度,將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行定量的方法。

2.特點(diǎn)設(shè)備簡單、操作方便、分離快速、靈敏度及分辨率高、顯色劑選擇范圍廣、適用于多組分及微量組分定量等。第二節(jié)薄層掃描法第35頁,共139頁，2024年2月25日，星期天一、儀器工作原理（一）薄層色譜掃描法的基本原理

薄層色譜掃描法的測定原理是用長寬可以調(diào)整的一束波長、強(qiáng)度固定的光，對薄層板上的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，通過測量斑點(diǎn)或被斑點(diǎn)反射的光束的強(qiáng)度變化，求出待測組分含量。薄層掃描法可分為吸收薄層掃描法和薄層熒光掃描法。第二節(jié)薄層掃描法第36頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

1.

吸收薄層掃描測定法

是用可見-紫外光的單色光對薄層板上色譜斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，根據(jù)掃描獲得的吸光度隨展開距離變化的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行定量的方法。根據(jù)測光的方式不同，吸收掃描測定法又分為透射法和反射法兩種。

第二節(jié)薄層掃描法透射法是測定光透過供試品斑點(diǎn)后的吸收情況進(jìn)行的定量方法透射法掃描

L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點(diǎn)

PD-檢測器第37頁,共139頁，2024年2月25日，星期天反射法是測定供試品斑點(diǎn)對光的反射情況進(jìn)行的定量方法。L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點(diǎn)

PD-檢測器反射法掃描

第二節(jié)薄層掃描法第38頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)薄層掃描法吸光度與物質(zhì)的濃度及液層厚度間不呈線性關(guān)系的解決方法選擇曲線中的直線部分進(jìn)行定量分析采用Kubelka-Munk方程利用非線性方程定量第39頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

2.薄層熒光掃描法是通過儀器對供試品吸收可見-紫外光后發(fā)射的熒光強(qiáng)度掃描得到的吸收光譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)，求出供試品含量的方法第二節(jié)薄層掃描法熒光反射法掃描L-光源MC-單色器P-薄層板S-斑點(diǎn)

PD-檢測器第40頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)薄層掃描法當(dāng)樣品量很少時(shí)，斑點(diǎn)中組分的濃度與熒光強(qiáng)度呈線性關(guān)系，可按公式計(jì)算：F=2.3K/IoECL或F=KC式F=2.3K/IoECL中：F為熒光強(qiáng)度；Io為入射光強(qiáng)度；C為濃度；E為吸收系數(shù)；K為常數(shù)（與熒光效率有關(guān)）；L為薄層厚度。式F=KC中：C為濃度；

K為2.3K/IoEL之積。在薄層熒光掃描法中，常用斑點(diǎn)熒光強(qiáng)度的積分值（色譜峰面積）代替公式中的F，斑點(diǎn)中組份的含量代替公式中的C進(jìn)行計(jì)算。第41頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（二）薄層掃描儀的構(gòu)造薄層掃描儀主要由主機(jī)（光源、單色器、供試品室、薄層板臺架、檢測器）及工作站組成。

1.光源光源室能提供穩(wěn)定的、具有一定強(qiáng)度的所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光源。包括紫外光源氘燈（200nm～370nm）；可見光源鎢燈（370nm～700nm）；熒光光源氙燈或汞燈（200nm～700nm），其中汞燈為線光源，可提供特征輻射光譜。第二節(jié)薄層掃描法第42頁,共139頁，2024年2月25日，星期天2.單色光器單色光器可以將光源發(fā)出的連續(xù)光分解為單色光。其主要由入射狹縫、出射狹縫、色散元件、平行光裝置（準(zhǔn)直鏡）等部分構(gòu)成。薄層掃描儀多采用光柵為色散元件。3.薄層板臺包括薄層板臺架及驅(qū)動裝置。4.檢測器檢測器是用來檢測和放大由供試品斑點(diǎn)透射、反射或發(fā)出熒光強(qiáng)度的裝置。5.工作站具有設(shè)定儀器參數(shù)、控制儀器工作條件和信號采集、處理計(jì)算和打印輸出等功能的裝置。第二節(jié)薄層掃描法第43頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（三）儀器性能的檢定

1.波長準(zhǔn)確度的檢查一是利用汞燈的特征光譜線對儀器的波長進(jìn)行準(zhǔn)確度檢查。二用氘燈以反射方式對硅膠G的薄層板上的10mg/ml的膦酸氯喹水溶液斑點(diǎn)做光譜掃描，如在257±10nm和343±10nm有最大吸收峰，則準(zhǔn)確度符合要求。

2.重復(fù)性測定系指同一薄層板上、同一供試品溶液相同濃度的數(shù)個(gè)斑點(diǎn)，掃描結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。以峰面積的積分值計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。鋸齒掃描的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)≤1.5%，線性掃描的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)≤2.0%.第二節(jié)薄層掃描法第44頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（四）薄層掃描儀的工作流程

1.吸收薄層掃描法的薄層掃描儀工作原理以CS-9301PC型雙波長掃描儀為例。第二節(jié)薄層掃描法薄層掃描儀的光學(xué)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖第45頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

2.薄層熒光掃描法的薄層掃描儀工作流程以島津CS-9000型雙飛點(diǎn)掃描儀為例。第二節(jié)薄層掃描法

CS-9000型儀器的光學(xué)系統(tǒng)

第46頁,共139頁，2024年2月25日，星期天三、含量測定（一）概述1.原理薄層掃描法含量測定有外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法兩種方法，中國藥典僅采用外標(biāo)法。2.類型根據(jù)對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線性質(zhì)的不同，外標(biāo)法又分為外標(biāo)一點(diǎn)法和外標(biāo)兩點(diǎn)法。第二節(jié)薄層掃描法第47頁,共139頁，2024年2月25日，星期天供試品選擇檢測方法

含量計(jì)算薄層掃描發(fā)含量測定操作步驟溶液的制備薄層板點(diǎn)樣展開掃描掃描波長對照品系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

測定方式

掃描方式

第二節(jié)薄層掃描法第48頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（二）操作步驟和方法外表一點(diǎn)法和外標(biāo)二點(diǎn)法的點(diǎn)樣操作。（1）外標(biāo)一點(diǎn)法（2）外標(biāo)兩點(diǎn)法外標(biāo)兩點(diǎn)法點(diǎn)樣方法

第二節(jié)薄層掃描法第49頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

4.系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)（1）靈敏度的檢測：（2）分離度：（3）重復(fù)性

5.上機(jī)掃描（1）檢測方法選擇（2）測定方式選擇:反射法和透射法

第二節(jié)薄層掃描法第50頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（3）掃描波長選擇：①單波長掃描法；②雙波長掃描法;③薄層熒光掃描波長的選擇第二節(jié)薄層掃描法單波長、單光束掃描儀光路圖單波長、雙光束掃描儀光路圖

第51頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

（4）掃描方式的選擇：①直式掃描（線性掃描)；②鋸齒掃描（飛點(diǎn)掃描）；③圓形掃描；④傾斜掃描。掃描時(shí)，應(yīng)自下而上掃描，不可橫向掃描。掃描光束（點(diǎn)）的形狀和大小，可通過調(diào)整狹縫的高度和寬度實(shí)現(xiàn)。第二節(jié)薄層掃描法線性掃描圖

第52頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)薄層掃描法鋸齒掃描

第53頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

6.含量計(jì)算

（1）外標(biāo)一點(diǎn)法：標(biāo)準(zhǔn)曲線通過原點(diǎn)。計(jì)算公式：C=F1·A

（2）外標(biāo)兩點(diǎn)法(隨行標(biāo)準(zhǔn)法)：標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過原點(diǎn)。計(jì)算公式：C=F1·A+F2

由C1=F1·A1+F2C2=F1·A2+F2得第二節(jié)薄層掃描法7.結(jié)果判斷將測定結(jié)果與2010年版《中國藥典》中的各品種項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對比，符合標(biāo)準(zhǔn)即為合格。8.注意事項(xiàng)

第54頁,共139頁，2024年2月25日，星期天四、案例（一）靈寶護(hù)心丹的含量測定供試品溶液的制備對照品溶液的制備薄層掃描含量計(jì)算本品每1g含牛黃以膽酸（C24H40O5）計(jì)，不得少于2.5mg。靈寶護(hù)心丹的膽酸含量測定采用的是何種方法

？供試品溶液是如何制備的？課堂互動第二節(jié)薄層掃描法第55頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

1.定義高效液相色譜法是采用高壓輸液泵將流動相泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離并測定含量的方法。

2.特點(diǎn)分離效能高、選擇性好、靈敏度高、分析速度快、適用范圍廣（供試品不需氣化，只需制成溶液即可）、流動相選擇性大、流出組分易收集、色譜柱可反復(fù)使用等特點(diǎn)。

3.范圍揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大、離子型化合物。第三節(jié)高效液相色譜法第56頁,共139頁，2024年2月25日，星期天一、儀器工作原理（一）儀器的構(gòu)造第三節(jié)高效液相色譜法高壓輸液系統(tǒng)色譜分離系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)檢測系統(tǒng)高效液相色譜儀的構(gòu)造第57頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)高效液相色譜法高效液相色譜儀1.貯液罐2.脫氣裝置3.梯度洗脫4.高壓輸液泵5.流動相流量顯示6.柱前壓力表7.輸液泵頭8.過濾器9.阻尼器10.進(jìn)樣裝置11.色譜柱12.檢測器13.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)14.廢液貯罐第58頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)高效液相色譜法

1.高壓輸液系統(tǒng)由貯液罐、脫氣裝置、高壓輸液泵、過濾器、梯度洗脫裝置等組成。

（1）貯液罐：由玻璃、不銹鋼或氟塑料等化學(xué)惰性、耐腐蝕材料制成，有無色及棕色兩種貯液罐。（2）脫氣裝置：貯液瓶配有抽真空及吹入惰性氣體的脫氣裝置。①超聲波振動脫氣；②抽真空脫氣；③加熱回流脫氣；④吹氦脫氣；⑤真空在線脫氣。第59頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)高效液相色譜法（3）高壓輸液泵：完成流動相的輸送任務(wù)。柱塞往復(fù)泵示意圖

兩種連接方式的柱塞往復(fù)泵

第60頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)高效液相色譜法（4）過濾器：在流動相進(jìn)入色譜柱之前，用于除去流動相中固體顆粒雜質(zhì)的直徑為0.45μW濾膜裝置。（5）梯度洗脫系統(tǒng)：可分為高壓與低壓兩種梯度洗脫裝置。

三元高壓梯度洗脫系統(tǒng)示意圖

1，2，3-閥門驅(qū)動器；4，5，6-比例閥；7，8，9-溶劑貯罐；10-溶劑比例控制器；11-梯度洗脫程序；12-高壓泵；13-溶劑混合器第61頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)高效液相色譜法

2.進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣器有高壓進(jìn)樣閥、六通手動進(jìn)樣閥及自動進(jìn)樣器等裝置。（1）高壓進(jìn)樣閥（2）六通閥進(jìn)樣器六通進(jìn)樣閥

1，4-定量管；

2-泵；

3-進(jìn)入色譜柱

5，6-排液口（a）取樣（b）進(jìn)樣第62頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)高效液相色譜法（3）自動進(jìn)樣裝置

自動進(jìn)樣器

1-沖洗液管；2-沖洗泵；3-電磁閥；4-單向閥；5-注射器；6-三通閥；7-六通閥；8-沖洗液；9-空氣間隙；10-樣品；11-采樣針頭；12-空氣；13-供試品瓶；14-沖洗瓶第63頁,共139頁，2024年2月25日，星期天3.色譜分離系統(tǒng)色譜分離系統(tǒng)由保護(hù)柱、色譜柱、恒溫裝置和連接閥等組成。（1）保護(hù)柱：具有防止供試品和進(jìn)樣閥墊圈中的固體顆粒的進(jìn)入分析柱作用。（2）色譜柱：色譜柱是高效液相色譜儀的重要部件，由柱管、接頭和過濾片組成。第三節(jié)高效液相色譜法第64頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)高效液相色譜法帶保護(hù)柱的PEEK色譜柱

1-柱接頭；2-PEEK保護(hù)柱；3-0.5μm鈦金屬濾過片；4-電解鋁外殼；5-PEEK色譜分析柱；6-0.5μm鈦金屬濾過片；7-柱接頭第65頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

柱管、接頭、過濾片第三節(jié)高效液相色譜法柱接頭的液流分配功能

內(nèi)接式柱結(jié)構(gòu)1-毛細(xì)連接管；2-壓緊螺絲；3，7-密封圈；4-濾過片；5-柱頭螺帽；6-鎖緊螺帽；8-柱管第66頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（4）恒溫裝置：恒溫裝置(恒溫箱)精確控制色譜柱溫度的裝置，具有調(diào)節(jié)溫度的功能。（5）色譜柱柱效的評價(jià)：硅膠柱、反相色譜法的色譜柱（ODS柱等）、正相色譜法的色譜柱（氰基或氨基柱）測各組分的W1/2及tR，計(jì)算理論塔板數(shù)n及相鄰組分的分離度R（≥1.5）第三節(jié)高效液相色譜法第67頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

4.檢測系統(tǒng)高效液相色譜檢測器通常分為兩類：通用性檢測器和選擇性檢測器。（1）通用性檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器、示差折光檢測器。（2）選擇性檢測器：可見-紫外檢測器、二極管陳列檢測器、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器及質(zhì)譜檢測器。第三節(jié)高效液相色譜法第68頁,共139頁，2024年2月25日，星期天紫外檢測器（Utravioletdetector，UV）：紫外檢測器是高效液相色譜法中使用最廣范的選擇性檢測器。分為固定波長、可變波長和二極管陣列檢測器三種類型。①固定波長檢測器；②可變波長檢測器；③二極管陣列檢測器（Diodearraydetector）。第三節(jié)高效液相色譜法熒光檢測器（Fluorophotometriedetector,FD電化學(xué)檢測器（Electrochemicaldetector,ECD）蒸發(fā)光散射檢測器（Evaporativelightscatteringdetector,ELSD）示差折光檢測器（Differentialrefractiveindex,RID）：第69頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

5.數(shù)據(jù)記錄與處理系統(tǒng)是將色譜系統(tǒng)的檢測信號進(jìn)行記錄和處理成分析結(jié)果的裝置。

6.儀器性能衡量儀器性能的指標(biāo)包括儀器的重復(fù)性、噪音、基線漂移、敏感度、線性、波長精度等。第三節(jié)高效液相色譜法第70頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

典型的高效液相色譜儀流程如圖所示第三節(jié)高效液相色譜法（二）儀器工作原理1.貯液罐2.脫氣裝置3.梯度洗脫4.高壓輸液泵

5.流動相流量顯示6.柱前壓力表7.輸液泵頭8.過濾器9.阻尼器10.進(jìn)樣裝置11.色譜柱12.檢測器13.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)14.廢液貯罐第71頁,共139頁，2024年2月25日，星期天1.用流動相沖洗濾器，再把濾器浸入流動相中，啟動泵。2.打開泵的排放閥，用專用注射器從閥口抽出流動相約20ml，設(shè)置高流速（如9ml/min）或用沖洗鍵（PURGE）進(jìn)行泵排氣，出口處流動相連續(xù)液流后，將流速逐步回零或停止沖洗，關(guān)閉排放閥。第三節(jié)高效液相色譜法二、儀器操作通法（一）泵的操作3.將流速調(diào)節(jié)至分析用流速，對色譜柱進(jìn)行平衡，同時(shí)觀察壓力指示應(yīng)穩(wěn)定，用干燥濾紙片的邊緣檢查柱管各連接處應(yīng)無滲漏。初始平衡時(shí)間一般需約30分鐘。如為梯度洗脫，應(yīng)在程序器上設(shè)置梯度狀態(tài)，用初始比例的流動相對色譜柱進(jìn)行平衡。第72頁,共139頁，2024年2月25日，星期天1.開啟檢測器電源開關(guān)，選擇光源（鎢燈或氘燈），選定檢測波長，待穩(wěn)定后，測試參比和供試品光路的信號應(yīng)符合要求，設(shè)置吸收度方式和檢測響應(yīng)時(shí)間（一般不大于1秒），設(shè)置滿刻度吸收值（適用于記錄儀）。2.開啟色譜處理機(jī)，設(shè)定處理方法，初步設(shè)定衰減、紙速、記錄時(shí)間、最小峰面積等參數(shù)，或設(shè)定記錄儀的紙速或衰減。第三節(jié)高效液相色譜法（二）紫外-可見檢測器和色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)的操作3.進(jìn)行檢測器回零操作，檢查處理機(jī)的電平（LEVEL），應(yīng)符合要求，或檢查記錄儀的筆應(yīng)處在設(shè)定的起始位置，如有變動，可繼續(xù)回零操作直至符合要求。4.記錄基線，待穩(wěn)定后，進(jìn)行處理機(jī)斜率測試，符合要求后方能進(jìn)行操作。第73頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

1.六通閥式進(jìn)樣器（1）進(jìn)樣手柄置采樣位置（LOAD）。（2）用供試品溶液清洗配套的注射器，再抽取適量，如用定量環(huán)（LOOP）載樣，則注射器抽取量應(yīng)不少于定量環(huán)容積的5倍，用微量注射器定容進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量不得多于環(huán)容積的50%。在排除氣泡后方能向進(jìn)樣器中注入供試品溶液。（3）把注射器的平頭針直插至進(jìn)樣器底部，注入供試品溶液，除另有規(guī)定外，注射器不應(yīng)取下。（4）將手柄轉(zhuǎn)至進(jìn)樣位置（INJECT），供試品被流動相帶入色譜柱。第三節(jié)高效液相色譜法（三）進(jìn)樣操作第74頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

2.自動進(jìn)樣器：自動進(jìn)樣裝置有圓盤式自動進(jìn)樣器、鏈?zhǔn)阶詣舆M(jìn)樣器、坐標(biāo)式自動進(jìn)樣器等。（1）將供試品溶液用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液至進(jìn)樣瓶中，蓋上帶有墊片的瓶蓋，順時(shí)針方向旋緊。為避免堵塞進(jìn)樣器及損傷進(jìn)樣器，一般應(yīng)選擇與自動進(jìn)樣器型號相配套的進(jìn)樣瓶。（2）將進(jìn)樣瓶依次放入貯樣室內(nèi)，記錄瓶位置號（VIAL）。如果自動進(jìn)樣器有控溫裝置，設(shè)置溫度參數(shù)。（3）對自動進(jìn)樣器進(jìn)行校正，使自動進(jìn)樣器為默認(rèn)位置、進(jìn)樣針沖洗系統(tǒng)正常、管內(nèi)無氣泡、有足夠的沖洗液和流動相。（4）設(shè)定自動進(jìn)樣參數(shù)。即設(shè)定供試品溶液自動進(jìn)樣的起始位置、進(jìn)樣體積、稀釋倍數(shù)、數(shù)據(jù)文件名等，用START進(jìn)樣。第三節(jié)高效液相色譜法第75頁,共139頁，2024年2月25日，星期天1.注樣同時(shí)啟動數(shù)據(jù)處理機(jī)，采集和處理色譜信息，如系記錄儀，則注樣同時(shí)按下記號鍵作起始記號。2.最后一峰出完后應(yīng)繼續(xù)走一段基線，確認(rèn)無組分流出后結(jié)束記錄。3.根據(jù)第一張預(yù)試的色譜圖，調(diào)整衰減、紙速、記錄時(shí)間等參數(shù)，使色譜峰信號在色譜圖上有一定強(qiáng)度。定量時(shí)，一般峰頂不超過記錄滿量程。再按3.（1）～4.（1）正式分析操作。

4.含量測定的對照品溶液和供試品溶液每份至少進(jìn)樣2次，由全部進(jìn)樣結(jié)果（n≥4）求得平均值，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）不應(yīng)大于1.5%。5.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)應(yīng)符合藥典規(guī)定。第三節(jié)高效液相色譜法（四）色譜數(shù)據(jù)的收集和處理第76頁,共139頁，2024年2月25日，星期天1.分析完畢，先關(guān)檢測器和數(shù)據(jù)處理機(jī)，再用經(jīng)濾過和脫氣的適當(dāng)溶劑清洗色譜系統(tǒng)，正相柱用正己烷，反相柱如使用過含鹽流動相，則先用水，然后用甲醇-水沖洗，沖洗前先按上述操作通法項(xiàng)下1（1）、1（2）操作，再用分析流速沖洗，各種沖洗劑一般沖洗15分鐘～30分鐘，特殊情況可延長沖洗時(shí)間，尤其是用過含鹽流動相的柱子，有時(shí)需沖洗數(shù)小時(shí)甚至更長時(shí)間。

2.沖洗完畢后逐步降低流速至0，關(guān)泵。進(jìn)樣器也應(yīng)用相應(yīng)溶劑沖洗，可用進(jìn)樣閥所附專用沖洗接頭。

3.關(guān)閉電源，作好使用登記，內(nèi)容包括日期、檢品、色譜柱、柱壓、使用時(shí)間（小時(shí)）及儀器使用前后的狀態(tài)等。第三節(jié)高效液相色譜法（五）清洗和關(guān)機(jī)第77頁,共139頁，2024年2月25日，星期天外標(biāo)法可分為工作曲線法、外標(biāo)一點(diǎn)法、外標(biāo)兩點(diǎn)法。

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線法

2.外標(biāo)一點(diǎn)法

第三節(jié)高效液相色譜法

三、含量測定（一）原理(外標(biāo)法)第78頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

3.峰面積歸一化法按藥品標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)項(xiàng)下進(jìn)行峰面積歸一化法求組分的含量，按下式計(jì)算式中：∑Ai為待測組份峰面積；∑A未參與計(jì)算的全部峰面積（溶劑峰和其他干擾峰除外）之和。第三節(jié)高效液相色譜法第79頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

4.雜質(zhì)檢查法（1）加校正因子的主成分自身對照法：測定雜質(zhì)含量時(shí)，如在檢測波長下，雜質(zhì)色譜峰位置與主成分色譜峰位置不同時(shí)，可將主成分作為內(nèi)標(biāo)物加到雜質(zhì)的對照品溶液中，求出雜質(zhì)相對于主成分的校正因子，然后根據(jù)供試品中主成分色譜峰和雜質(zhì)色譜峰的面積，采用內(nèi)標(biāo)法計(jì)算雜質(zhì)的含量。

（2）不加校正因子的主成分自身對照法：在雜質(zhì)未知或未建立雜質(zhì)對照品時(shí)，可采用不加校正因子的主成分自身對照法測定雜質(zhì)的含量或限量。第三節(jié)高效液相色譜法第80頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

1.溶液的制備

2.系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

（1）色譜柱的理論塔板數(shù)（n）：

（2）分離度（R）：分離度應(yīng)大于1.5。（3）重復(fù)性：相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.0%。（4）拖尾因子（T）：T應(yīng)在0.95～1.05之間。第三節(jié)高效液相色譜法（二）操作步驟和方法第81頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（5）色譜圖及其參數(shù)①保留時(shí)間tR；②峰高h(yuǎn)；④峰寬W；⑤峰面積A。第三節(jié)高效液相色譜法色譜圖及其參數(shù)

3.進(jìn)樣測試

4.含量計(jì)算（1）外標(biāo)法：

5.結(jié)果判斷第82頁,共139頁，2024年2月25日，星期天四、案例（一）固本咳喘片中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量測定供試品溶液的制備對照品溶液的制備高校液相色譜儀含量計(jì)算第三節(jié)高效液相色譜法【處方】黨參151g白術(shù)(麩炒)151g茯苓100g麥冬151g補(bǔ)骨脂（鹽炒）151g炙甘草75g五味子75g本品每片含補(bǔ)骨脂以補(bǔ)骨脂素（C11H6O3）和異補(bǔ)骨脂素（C11H6O3）的總量計(jì)，不得少于0.30mg。為什么選擇補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素為指標(biāo)性成分？第83頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（二）胃舒寧顆粒中甘草酸含量的測定【處方】甘草595g海螵蛸595g白芍464g白術(shù)310g延胡索310g黨參119g第三節(jié)高效液相色譜法為什么選擇甘草酸為指標(biāo)性成分？供試品溶液的制備對照品溶液的制備高校液相色譜儀含量計(jì)算本品每袋含甘草以甘草酸（C42H62O16）計(jì)不得少于20mg。第84頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

1.定義以氣體為流動相（稱載氣）流經(jīng)色譜柱，進(jìn)行分離定量的色譜分析法稱氣相色譜法（GC）。2.特點(diǎn)分離效能高、選擇性好、靈敏度高、分析速度快等特點(diǎn)

3.適用范圍具有揮發(fā)性，在常溫下可氣化或加熱后可氣化的物質(zhì)的含量測定。第四節(jié)氣相色譜法第85頁,共139頁，2024年2月25日，星期天一、儀器工作原理（一）儀器的組成第四節(jié)氣相色譜法氣控系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)柱分離系統(tǒng)檢測系統(tǒng)信號處理系統(tǒng)溫控系統(tǒng)第86頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法氣相色譜儀結(jié)構(gòu)示意圖

1.載氣鋼瓶（N2）2.氫氣鋼瓶3.空氣鋼瓶4.減壓閥5.干燥器6.穩(wěn)壓器7.壓力表8.針形閥9.轉(zhuǎn)子流量計(jì)10.進(jìn)樣器及汽化室11.色譜柱（虛線表示恒溫室）12.氫火焰離子化檢測器（虛線表示恒溫室）13.微電流放大器14.記錄器第87頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法1.氣流控制系統(tǒng)包括氣源、氣體凈化裝置、氣體流速控制和測量裝置。氣體流量調(diào)節(jié)閥高壓閥減壓閥壓力表凈化器檢測器轉(zhuǎn)子流量計(jì)色譜柱放空氣化室第88頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法（1）氣源及凈化：①氣源（載氣）：是氣相色譜儀載氣和輔助氣的來源，可以是高壓氣鋼瓶、氫氣發(fā)生器以及空氣壓縮機(jī)。（2）減壓閥：是指聯(lián)接在高壓鋼瓶和氣體流路之間中減壓裝置，將由高壓鋼瓶供給的氣體壓力降至0.2～0.5mPa。（3）穩(wěn)壓閥：又稱壓力調(diào)節(jié)器，可以為針形閥提供穩(wěn)定的氣壓；為它后邊的穩(wěn)流閥提供恒定的參考壓力。第89頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法減壓閥結(jié)構(gòu)示意圖1-調(diào)節(jié)手柄；2-彈簧；3-隔膜；4-提升針閥；5-出口腔；6-入口腔；7-氣體入口；8-高壓壓力表；9-氣體出口；10-低壓壓力表穩(wěn)壓閥示意圖

1-閥座；2-針形閥（或平面閥）；3-波紋閥；4-彈簧；5-手柄；6-閥桿第90頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法（4）壓力表：壓力顯示器，指示和監(jiān)測載氣流量的儀器。（5）凈化裝置：聯(lián)接在氣源與儀器之間的凈化載氣中的雜質(zhì)和水分所用載氣的裝置。（6）氣體流量調(diào)節(jié)閥（穩(wěn)流閥）：調(diào)節(jié)載氣流量、穩(wěn)定氣體壓力的裝置。（7）轉(zhuǎn)子流量計(jì)：測定顯示載氣流速的儀器。穩(wěn)流閥示意圖

1-彈性膜片；2-上游反饋管；3-手柄；4-針閥第91頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法2.進(jìn)樣系統(tǒng)供試品引入裝置（進(jìn)樣器）和氣化室（進(jìn)樣系統(tǒng)）溫度控制裝置組成。（1）進(jìn)樣器：將供試品加到氣相色譜儀中的裝置，主要有手動微量注射器、自動進(jìn)樣器及頂空進(jìn)樣器。①氣體進(jìn)樣器：六通閥或微量進(jìn)樣閥、注射器；②液體進(jìn)樣器：微量注射器或有分流裝置的氣化室。第92頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法（2）進(jìn)樣系統(tǒng)和進(jìn)樣模式：①填充柱進(jìn)樣系統(tǒng)；②分流進(jìn)樣系統(tǒng)；③不分流進(jìn)樣系統(tǒng)；④冷柱頭進(jìn)樣；⑤程序升溫氣化進(jìn)樣；⑥大體積進(jìn)樣；⑦頂空進(jìn)樣技術(shù)；⑧熱解進(jìn)樣。靜態(tài)頂空進(jìn)樣示意圖1-溫度計(jì)；2-注射器；3-恒溫??；4-容器；5-樣品；6-隔膜；7-螺母不分流進(jìn)樣示意圖1-載氣入口；2-清掃器入口；3-墊圈；4-分流閥；5-分流器出口；6-緩沖器；7-毛細(xì)管柱第93頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法分流進(jìn)樣示意圖1-隔膜；2，4-針形閥；3-分流點(diǎn)；5-毛細(xì)管；6-紅寶石；7-色譜柱1-錐形口；2-0.3mm通道；3-鋼杯；4-載氣入口；5-石墨墊；6-毛細(xì)管柱；7-冷卻空氣出口；8-冷卻空氣入口；9-停止閥冷柱頭進(jìn)樣器示意圖第94頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法

程序升溫進(jìn)樣器示意圖

1-注射器；2-裝有彈簧的O型密封圈；3-不銹鋼針管；4-轉(zhuǎn)動閥；5-閥柄；6-散熱片；7-載氣入口；8-玻璃插入管；9-外徑0.18mm內(nèi)徑0.1mm的彈性石英毛細(xì)管；10-冷卻劑；11-溫度敏感元件；12-針閥；13-進(jìn)樣器清洗器出口；14-柱箱；15-彈性石英毛細(xì)管；16-加熱器第95頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法（3）氣化室：氣化室是將液體或固體供試品進(jìn)行加熱氣化的裝置。（4）溫度控制系統(tǒng)：設(shè)置、控制、測量氣化室溫度的裝置。第96頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法3.分離系統(tǒng)包括色譜柱、柱室和柱溫箱。（1）色譜柱：色譜柱按柱內(nèi)徑的大小和長度，可分為填充柱和毛細(xì)管柱；柱形有螺旋形、Ｕ形。①填充柱；②色譜柱填料；③固定液；④毛細(xì)管柱。（2）柱室：是指色譜柱內(nèi)沒有被固定相填充的空間。（3）柱溫箱：設(shè)置、控制、測量色譜柱溫度的裝置。第97頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法4.檢測系統(tǒng)由檢測器微電流放大器等部件組成。是指示和測量載氣中被測組分及其量變化的一種裝置。（1）檢測器：是將流出色譜柱的載氣中被測組分的濃度（或質(zhì)量）轉(zhuǎn)化為電信號變化的裝置。①積分型檢測器；②微分型檢測器；③濃度型檢測器；④質(zhì)量型檢測器。

（2）溫控系統(tǒng)：設(shè)置、控制、測量檢測器溫度的裝置。5.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)由放大器、記錄儀、積分儀、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。數(shù)據(jù)處理機(jī)或色譜工作站接收處理經(jīng)放大的供試品濃度或質(zhì)量的信號（色譜圖信息），打印出操作條件，由積分儀給出定性和定量分析結(jié)果。第98頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（二）儀器的工作流程第四節(jié)氣相色譜法由高壓瓶提供載氣，經(jīng)壓力調(diào)節(jié)器調(diào)壓后，進(jìn)入凈化干燥裝置除去載氣中的雜質(zhì)及水分，再由穩(wěn)壓閥調(diào)制適宜的流量和流速后進(jìn)入色譜柱。供試品（液體）用微量注射器或進(jìn)樣閥由進(jìn)樣器注入，進(jìn)樣后的供試品瞬間氣化為氣體，被載氣帶入色譜柱。各組分在色譜柱內(nèi)經(jīng)分離后依次流出色譜柱進(jìn)入檢測器，檢測器將各組分的濃度或質(zhì)量信號轉(zhuǎn)變成電壓變化，經(jīng)放大器放大后記錄在記錄儀上，得到色譜圖，供試品經(jīng)檢測器后放空。第99頁,共139頁，2024年2月25日，星期天二、儀器操作通法（一）開機(jī)前的準(zhǔn)備第四節(jié)氣相色譜法1.檢查儀器上電器開關(guān)，均處于“關(guān)”位置。2.選擇好合適的色譜柱，柱的兩端應(yīng)有盲堵。3.取下盲堵，分清入口與出口端，套好石墨密封圈及固定螺母，小心裝于儀器上，擰緊固定螺絲，但也勿過緊，以不漏氣為度。換下的色譜柱，應(yīng)堵上盲堵保存。

4.開啟載氣鋼瓶上總閥調(diào)節(jié)減壓閥至規(guī)定壓力。

5.用表面活性劑檢查柱連接處是否漏氣，如有漏氣應(yīng)檢查柱兩端的石墨密封圈或再略加緊固定螺母。

6.如果儀器有恒流和恒壓閥調(diào)節(jié)氣流量，換柱后可不再調(diào)節(jié)，若有疑點(diǎn)可用皂膜流量計(jì)檢查和調(diào)節(jié)流量。第100頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（二）開機(jī)第四節(jié)氣相色譜法1.打開各部分電路開關(guān)及色譜站，設(shè)置進(jìn)樣系統(tǒng)、氣化室、柱溫箱及檢測器溫度和載氣流量等色譜參數(shù)，并開始加熱。2.待各部分溫度恒定后，打開氫氣鋼瓶及空氣壓縮機(jī)總閥，同載氣操作。3.按下點(diǎn)火按鈕（FID檢測器）（有些儀器在檢測器溫度達(dá)到一定溫度后有自動點(diǎn)火功能），應(yīng)有“卟”的點(diǎn)火聲，用玻璃片置氫火焰離子化檢測器（FID）氣體出口處，檢視玻璃片上如有水霧，表示已點(diǎn)著火，同時(shí)記錄器有響應(yīng)。注意：對于有自動點(diǎn)火功能的儀器來說，有時(shí)工作站已顯示點(diǎn)火成功，但實(shí)際上沒有點(diǎn)火，所以每次試驗(yàn)均應(yīng)用玻璃片檢視4.調(diào)節(jié)儀器的放大器靈敏度等，走基線，待基線穩(wěn)定度達(dá)到可接受范圍內(nèi)，即可進(jìn)樣分析。第101頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（三）測定第四節(jié)氣相色譜法1.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)應(yīng)符合藥品標(biāo)準(zhǔn)各品種項(xiàng)下的要求。2.預(yù)試驗(yàn)初次測定藥品時(shí)，可先經(jīng)預(yù)試驗(yàn)以確定儀器參數(shù)，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)情況，可適當(dāng)調(diào)節(jié)柱溫、載氣流速、進(jìn)樣量等，使色譜峰的保留時(shí)間、分離度、峰面積或峰高的測量符合要求。如果用積分儀作峰面積積分時(shí)，對含量測定的色譜峰面積不得小于10000μV·s，否則應(yīng)調(diào)節(jié)進(jìn)樣量，也可調(diào)節(jié)FID的靈敏度，但應(yīng)注意信噪比是否達(dá)到。第102頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法3.正式進(jìn)樣測定每份校正因子測定溶液（或?qū)φ掌啡芤海┘肮┰嚻啡芤焊鬟M(jìn)樣2次，2份共4個(gè)校正因子及4個(gè)供試品數(shù)據(jù)結(jié)果平均值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）不得大于2.0%。用外標(biāo)法測定同上，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不得大于2.5%。多份供試品測定時(shí)，每隔5批應(yīng)再進(jìn)對照品2次。

進(jìn)樣注意事項(xiàng)：（1）要根據(jù)進(jìn)樣量選用注射器（2）取樣前要先洗滌注射器（3）進(jìn)樣方法：取樣后，一手持注射器，另一支手護(hù)住針頭，小心將針頭刺穿過隔墊，在將注射器插到底的同時(shí)，供試品也要迅速推進(jìn)氣化室（注意針尖不要彎曲），并立即抽出注射器。第103頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法（四）關(guān)機(jī)分析完畢后，待各組分流出后，先關(guān)閉氫氣和空氣，再進(jìn)行降溫操作，將進(jìn)樣系統(tǒng)、柱溫箱、檢測器、以及頂空進(jìn)樣器的溫度均設(shè)為40℃或更低，待各組件的溫度降至40℃以下時(shí)，依次關(guān)閉載氣工作站、氣相色譜儀并斷電。若要取下色譜柱，則應(yīng)將柱兩端用盲堵堵上，放在盒內(nèi)，妥善保。

（五）填寫使用登記第104頁,共139頁，2024年2月25日，星期天三、含量測定（一）原理

第四節(jié)氣相色譜法利用色譜峰的峰面積或峰高與待測組分的濃度或質(zhì)量成正比的原理，選用與檢測器相對應(yīng)的純物質(zhì)作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（內(nèi)標(biāo)物），將內(nèi)標(biāo)物加到供試品中，用氣相色譜儀測得待測組分和內(nèi)標(biāo)物的峰面積或峰高，將待測組分和內(nèi)標(biāo)物的峰面積或峰高相比較進(jìn)行定量的方法稱為內(nèi)標(biāo)法。內(nèi)標(biāo)法可分為內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法、校正因子法、工作曲線法。第105頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法1.峰面積的計(jì)算公式不同峰型的色譜峰，采用不同的計(jì)算公式。（1）對稱峰的峰面積計(jì)算公式：A=1.065h×W1/2

式中：A為峰面積，h為峰高，W1/2半峰寬（2）不對稱峰的峰面積計(jì)算公式：式中：A為峰面積；h為峰高；W0.15W0.85分別為0.15及0.85峰高處的峰寬。（3）用數(shù)字積分以計(jì)算峰面積：色譜專用微機(jī)處理機(jī)能自動記錄、儲存色譜峰高、面積等數(shù)據(jù)，并能進(jìn)行定量運(yùn)算，給出測量結(jié)果及打印報(bào)告等。

第106頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法2.定量校正因子為使峰面積或峰高與其濃度或質(zhì)量相對應(yīng)，因此必須引入校正因子。校正因子分為絕對校正因子和相對校正因子。（1）絕對校正因子：

Wi=fi×AiWi=Ai/Si

式中：fi為比例常數(shù)，稱為絕對校正因子，為單位峰面積或峰高代表的i組分的量；Wi為待測組分i的質(zhì)量；Ai為待測組分i的峰面積或峰高；Si為單位待測組分i的峰面積或峰高，簡稱響應(yīng)值；fi

、Si為絕對定量校正因子，單位相同時(shí)二者為倒數(shù)：fi=1/Si第107頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法（2）相對校正因子：相對校正因子是指某組分i與內(nèi)標(biāo)物s絕對校正因子的比值。面積相對質(zhì)量校正因子又稱質(zhì)量校正因子或相對校正因子：式中：fW為相對校正因子；fi

為待測組分i的絕對校正因子；fs

為內(nèi)標(biāo)物的絕對校正因子；Ai、AW和Wi、Ws分別代表待測組分i的純品和內(nèi)標(biāo)物s的峰面積和質(zhì)量。

第108頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法3.定量分析方法

（1）工作曲線法：①用相同的方法配制對照品溶液與供試品溶液；②繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或求出回歸方程；③在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出供試品中待測組分的含量，或用回歸方程計(jì)算出供試品中待測組分的含量。（2）校正因子法：精密稱取供試品Wi克，加一定量精密稱取的內(nèi)標(biāo)物Ws克,由兩者的峰面積或峰高之比，用內(nèi)標(biāo)校正因子計(jì)算含量。由公式：得第109頁,共139頁，2024年2月25日，星期天計(jì)算供試品中待測組分量的公式：式中，為供試品中待測組分的濃度；為供試品峰面積（或峰高）；為供試品中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；為相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積。第四節(jié)氣相色譜法(3)內(nèi)標(biāo)法加校正因子法（內(nèi)標(biāo)對比法）計(jì)算校正因子的公式：式中，為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積（或峰高）；為對照品的峰面積（或峰高）；為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；為對照品的濃度。第110頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法如果供試品溶液的濃度為C，則供試品中被測組分的百分含量用下式計(jì)算：第111頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（二）操作步驟和方法第四節(jié)氣相色譜法

1.測試溶液的制備（1）對照品溶液的配制：（2）供試品溶液的配制：

2.系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

3.進(jìn)樣測試

4.相對校正因子的測定與計(jì)算

5.含量計(jì)算第112頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)氣相色譜法內(nèi)標(biāo)法計(jì)算公式：如供試品溶液的濃度為C，則供試品中被測組分的百分含量可用下式計(jì)算：

6.結(jié)果判斷將測定結(jié)果與藥品標(biāo)準(zhǔn)比較，若在規(guī)定的范圍之內(nèi)，則判斷本品合格，否則為不合格。第113頁,共139頁，2024年2月25日，星期天四、案例（一）復(fù)方鮮竹瀝液

【處方】

鮮竹瀝400ml魚腥草150g生半夏25g生姜25g枇杷葉150g桔梗75g薄荷素油1ml本品每ml含薄荷素油以薄荷腦（C10H200）計(jì)，不得少于10μg。對照品、內(nèi)標(biāo)溶液的制備測定校正因子含量計(jì)算結(jié)果判定供試品溶液的制備無水蘆丁含量測定采用的是何種方法

？供試品溶液是如何制備的？第四節(jié)氣相色譜法課堂互動第114頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（二）保婦康栓

【處方】

莪術(shù)油82g冰片75g供試品溶液是如何制備的？本品每粒含莪術(shù)油以莪術(shù)醇（C15H24O2）計(jì)，不得少于10.0mg.對照品溶液的制備含量計(jì)算結(jié)果判定氣相色譜儀測定供試品溶液的制備第四節(jié)氣相色譜法課堂互動第115頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

浸出物測定法是以藥材浸出物的含量作為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的測定。一般用于該藥材的活性成分或指標(biāo)性成分不清或含量很低或尚無精確的定量方法時(shí)采用。《中國藥典》收載了三種方法，分別是：水溶性浸出物測定法醇溶性浸出物測定法揮發(fā)性醚浸出物測定法第五節(jié)浸出物測定法第116頁,共139頁，2024年2月25日，星期天一、水溶性浸出物測定法

本法系以水為溶劑，對制劑中水溶性成分進(jìn)行提取，并計(jì)算其在制劑中的含量。本法包括冷浸法和熱浸法。第五節(jié)浸出物測定法第117頁,共139頁，2024年2月25日，星期天

（一）冷浸法

取供試品約4g，精密稱定，置250～300ml的錐形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸；前6小時(shí)內(nèi)時(shí)時(shí)振搖，再靜置18小時(shí)，用干燥濾器迅速濾過，精密量取濾液20ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中；在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量(W/W%)。第五節(jié)浸出物測定法第118頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第五節(jié)浸出物測定法

（二）熱浸法

取供試品約2～4g，精密稱定，置100～250ml錐形瓶中，精密加水50～100ml，密塞，稱定重量；靜置1小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時(shí)；放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過。精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中；在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量(W/W%)。第119頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（三）注意事項(xiàng)1.儀器應(yīng)干凈、干燥。2.干燥時(shí)可參考水分測定法中烘干法的有關(guān)內(nèi)容第五節(jié)浸出物測定法第120頁,共139頁，2024年2月25日，星期天（四）含量計(jì)算（五）結(jié)果判斷

將測定結(jié)果與藥品標(biāo)準(zhǔn)比較，若等于或高于限度則符合規(guī)定；否則不符合規(guī)定。第五節(jié)浸出物測定法第121頁,共139頁，2024年2月25日，星期天第五節(jié)